Gulrot (Daucus carota) er en vinter krydret toårig plante som vokser for sin spiselige taproot. Det er en av de mest konsumerte og produserte grønnsaker på grunn av sin diettvariasjon i farge, smak, fiber og vitamin A, samt forbruket i både rå og kokte former. Mer enn 20 millioner tonn av det produseres hvert år til konsum.

Vevskulturpraksis har vært svært populær i kloning av planter. Den første studien av gulrotvevskultur ble rapportert i 1939 Av Gautheret Og Nobecourt. Imidlertid Steward et al. Og Reinert rapporterte den første studien av «gulrotembryogenese» ; de prøvde å vokse røttene ved hjelp av cellesuspensjon og callus kulturer.somatisk embryogenese er en effektiv metode for å forstå og undersøke de biokjemiske, fysiologiske og genetiske aspektene av plantecellekultur.

Mange studier på gulrotvevskulturen førte til utviklingen av en enkel metode for embryogenese i gulrøtter. Ifølge metoden kan veksten av gulrotkulturer induseres ved bare å fjerne hormonet 2,4-D fra cellesuspensjonskulturer. Nå brukes gulrot ofte som en eksperimentell modell for analyse av somatisk embryogenese i ulike laboratorier over hele verden.

Materiale Og Utstyr Som Kreves for Etablering Av Kulturen

Steriliserte Materialer

• 5 Sprø callus kultur av gulrot, forurenset, og opprettholdes ved 25 ℃.
• 5 erlenmeyer-kolber (250 ml), inneholdende kulturmedium med 5 x 10-8 g / ml 2, 4-D.
• 5 målesylindere (100 ml) med foliehetter.
• 2 spatler.
• 25 ark aluminiumsfolie (100 x 100 mm).
• 2 stykker nylon, eller rustfritt stål sikter med en porøsitet på 250 µ, som kan settes inn i åpningen av målesylindrene.
• 5 petri-retter.

Ikke-steriliserte materialer

• Vanntett merking penn
• Roterende risting maskin
• Bunsen brenner
• 1 Erlenmeyer kolbe (150 ml) som inneholder 95% etanol
• Parafilm

prosedyre for initiering og etablering av kulturen

1. ta rørene av callus kultur, steril munnen av alle 5 rør og overfør callus til petriskålen separat (5 calli I 5 Petriskål).
2. Ta en 250 ml kanonisk kolbe som inneholder kulturmediet og 2, 4-D.
3. Overfør alle 5 calli fra Petriskålen til 5 kanoniske kolber, separat.
4. Flamme / steril munnen på kolberne og dekk dem med hetten. Fest hetten med parafilm.
5. Plasser alle kolber som inneholder kulturen på den roterende ristemaskinen i mørk eller lav lysintensitet ved 25 ℃.
6. etter 7 dager, overfør kolber fra shakeren til et sterilt rom.
7. Fjern parafilmen og foliehetten fra hver kolbe og flammer / steriliser flaskenes munn.
8. Overfør suspensjonen av hver kolbe til en steril 100 ml sylinder separat ved å passere den gjennom en sigte.
9. La innholdet avgjøre i 10 minutter og kast deretter supernatanten.
10. Overfør rester av celler igjen i målesylinderen til en 250 ml kolbe som inneholder 60 ml ferskt medium.
11. Gjenta trinn 10 for hver kulturkolbe.
12. Sett alle de fem kolber på shakeren igjen.
13. etter 7 dager gjenta prosedyren du har gjort før (fra trinn 6-10). Men denne gangen tar bare 1 / 5th av de resterende cellene som inokulumet.
14. Gjenta prosedyren omtrent 3-4 ganger. Ved å gjøre det, vil bare enkeltceller eller små aggregater forbli i gulrotfjæringen.
15. for gulrotcellesuspensjon varierer antallet passende celler mellom 105 og 3 x 105 celler/ml eller 100 og 300 mg (ferskvekt) inokulum i et volum på 60 ml ferskt medium som inneholder medier og 5×10-8 g/ml, 2,4-D.
16. en overføringsperiode på 7 dager er passende for at gulroten skal få enkeltceller i suspensjonskulturen.

Approximate Schedule of the Culture

Event	Timing (approximate)
Initiation of cell suspension and determination of total cell number and PCV (packed cell volume)	Day 0
First transfer of cultures	Day 8
Fourth transfer of cultures	Day 29

Result

What should you observe while experimenting? Her er noen poeng å huske mens du noterer resultatene dine.

• dato Og varighet av eksperimentet.
• antall kulturer og behandlinger som brukes.
• Registrer morfologi og antall infiserte kulturer med et intervall på tre uker.
• Bestem PCV (pakket cellevolum) i begynnelsen og slutten av overføringen av kulturen.
• Estimerer det totale celletallet etter 3 subkulturer, på dag 1, 2, 4 og 7, og plotter en graf mot tiden.
• Studer forholdet mellom tettheten av inokulum og vekstmønsteret.suspensjonskulturen gir en fordel over andre kulturer, da det tillater bevegelse av vevet i kulturmediene som letter gassformig utveksling. Videre fjerner det enhver polaritet av vev og næringsgradient i og på media.
  

  Anvendelse Av Vevskultur For Gulrot

  1. for å klone taproots.
  2. for å studere mutantformen av gulrøtter.
  3. å studere de fysiologiske responsene til gulroten som kan lette forståelsen av andre planter også.
  4. for å studere veksten og utviklingen av gulrot fra en enkeltcelle.
  5. å studere stressresponsen til gulroten som gir et innblikk i svarene til andre planter også.
  6. å generere hundrevis av transgene planter fra suspensjonen av enkeltceller for eksperimentelle formål.
  1. Reinert j. Og Yeoman M. M. (1982). Plantecelle-Og Vevskultur: en laboratoriehåndbok. Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, New York.
  2. Hardegger M., Shakya R. (2004) Transformasjon Av Gulrot. I: Curtis I. S. (eds) Transgene Avlinger Av Verden. Springer, Dordrecht. https://doi.org/10.1007/978-1-4020-2333-0_22.
  3. Vekst Og deling av gulrotceller i suspensjonskultur. (1970). Plante-Og Cellefysiologi. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.pcp.a074564.
  4. https://www.atzlabs.com/prodcut-info/C1955-Carrot-…

  Har DU NOEN PCT-historie å dele?
  Vi vil gjerne høre din tilbakemelding og forslag!
  Utvalgte PCT produkt historier vil bli omtalt på vår hjemmeside også. For ikke å glemme, kan noen godbiter finne en vei til ditt hjem sammen med den.
  Del dine forslag & historie med meg på [email protected]