Celleforstyrrelse

siden 1940-tallet har høytrykk blitt brukt Som en metode for celleforstyrrelse ,særlig av den franske Trykkcellepressen,eller fransk Presse for kort. Denne metoden ble utviklet Av Charles stacy French og benytter høyt trykk for å tvinge celler gjennom en smal åpning, noe som får cellene til å lyse på grunn av skjærkreftene som oppleves over trykkforskjellen. Mens franske Presser har blitt en stift i mange mikrobiologiske laboratorier, har produksjonen i stor grad blitt avviklet, noe som fører til en gjenoppblomstring i alternative anvendelser av lignende teknologi.Moderne fysiske celleforstyrrelser opererer vanligvis via enten pneumatisk eller hydraulisk trykk. Selv om pneumatiske maskiner vanligvis er lavere kostnader, kan ytelsen være upålitelig på grunn av variasjoner i prosesseringstrykket gjennom luftpumpens slag. Det er generelt ansett at hydrauliske maskiner tilbyr overlegen lysing evne, spesielt når behandling vanskeligere å bryte prøver som gjær eller Gram-positive bakterier, på grunn av deres evne til å opprettholde konstant trykk gjennom stempelslaget. Som den franske Pressen, som drives av hydraulisk trykk, er i stand til over 90% lysis av mest brukte celletyper, blir det ofte tatt som gullstandarden i lysytelse, og moderne maskiner sammenlignes ofte mot det, ikke bare når det gjelder lyseffektivitet, men også når det gjelder sikkerhet og brukervennlighet. Noen produsenter prøver også å forbedre den tradisjonelle designen ved å endre egenskaper i disse maskinene annet enn trykket som driver prøven gjennom åpningen. Et slikt eksempel er Constant Systems, som nylig har vist at Deres Celleforstyrrende Ikke bare samsvarer med ytelsen til en tradisjonell fransk Presse, men også at de strever for å oppnå de samme resultatene med en mye lavere kraft.

Trykksyklingsteknologi («PCT»). PCT ER en patentert teknologiplattform som bruker vekslende sykluser av hydrostatisk trykk mellom omgivende og ultrahøye nivåer (opptil 90 000 psi) for å kontrollere molekylers handlinger i biologiske prøver på en sikker, praktisk og reproduserbar måte, f. eks., brudd (lysis) av celler og vev fra mennesker, dyr, planter og mikrobielle kilder, og inaktivering av patogener. PCT-forbedrede systemer (instrumenter og forbruksvarer) løser noen utfordrende problemer som ligger i biologisk prøvepreparering. PCT fordeler inkluderer: (a) ekstraksjon og gjenvinning av flere membranproteiner, (b) forbedret proteinfordøyelse, (c) differensiell lysis i en blandet prøvebase, (d) patogeninaktivering, (e) økt DNA-deteksjon og (f) utsøkt prøvepreparasjonsprosesskontroll.Mikrofluidiseringsmetoden som brukes for celleforstyrrelser, påvirker sterkt de fysisk-kjemiske egenskapene til den lyserte cellesuspensjonen, som partikkelstørrelse, viskositet, proteinutbytte og enzymaktivitet. I de senere år Har Microfluidizer-metoden blitt populær i celleforstyrrelser på grunn av brukervennlighet og effektivitet ved å forstyrre mange forskjellige typer celler. Microfluidizer-teknologien ble lisensiert fra Et firma Som heter Arthur D. Little og ble først utviklet og brukt på 1980-tallet, og startet først som et verktøy for liposomdannelse. Det har siden blitt brukt i andre programmer som celle avbrudd nanoemulsions, og solid partikkelstørrelse reduksjon, blant andre.

ved å bruke mikrokanaler med fast geometri, og en forsterkerpumpe, genereres høye skjærhastigheter som brister cellene. Denne metoden for cellelyse kan gi brudd på over 90% Av E. coli-celler.mange proteiner er ekstremt temperaturfølsomme, og i mange tilfeller kan de begynne å denaturere ved temperaturer på bare 4 grader celsius. Innenfor mikrokanaler overstiger temperaturen 4 grader celsius, men maskinen er designet for å kjøle seg raskt slik at tiden cellene blir utsatt for forhøyede temperaturer er ekstremt kort (oppholdstid 25 ms-40 ms). På grunn av denne effektive temperaturkontrollen gir Mikrofluidisatoren høyere nivåer av aktive proteiner og enzymer enn andre mekaniske metoder når proteinene er temperaturfølsomme.

Viskositetsendringer observeres også ofte når de forstyrrer celler. Hvis cellesuspensjonsviskositeten er høy, kan det gjøre nedstrømshåndtering—som filtrering og nøyaktig pipettering—ganske vanskelig. Viskositetsendringene observert Med En Mikrofluidisator er relativt lave, og avtar med ytterligere ytterligere passerer gjennom maskinen.I motsetning til andre mekaniske forstyrrelsesmetoder bryter Mikrofluidisatoren cellemembranene effektivt, men forsiktig, noe som resulterer i relativt store celleveggfragmenter (450 nm), og dermed gjør det lettere å skille celleinnholdet. Dette kan føre til kortere filtreringstider og bedre sentrifugeringsseparasjon.

Microfluidizer teknologi skalerer fra en milliliter til tusenvis av liter.

Legg igjen en kommentar

Din e-postadresse vil ikke bli publisert.