Sirkulerende cellerrediger

teknikkene som kreves for å oppnå isolerte celler varierer avhengig av celletypen som kreves. Sirkulerende celler som blodceller eller noen tumorceller kan isoleres ved å ta en blodprøve. Da blodprøver inneholder en blanding av mange forskjellige celletyper, må en metode for å skille ut celler i forskjellige typer brukes. Den mest brukte metoden for dette er flowcytometri, hvor en automatisert analysator inspiserer en smal strøm av celler. I en versjon av denne teknikken, er et lys skinte på strømmen av celler, og analysatoren oppdager reflektert lys eller fluorescens før du bruker denne informasjonen til å raskt manøvrere cellene av interesse i en samling kammer.

Solid vevrediger

når det gjelder fast vev, kan det være mer utfordrende å skaffe vev til celleisolasjon. Overskudd menneskelig vev kan noen ganger oppnås ved planlagt kirurgi, for eksempel prøver av høyre atrial appendage blir ofte skåret ut og kassert under åpen hjertekirurgi som koronar bypass kirurgi. Andre vev som prøver av bukspyttkjertelen eller blæren kan tas som en biopsi. Alternativt blir vev fra dyr ofte oppnådd ved å ofre dyret.

etter at en vevsprøve er oppnådd, må den omgis eller perfuseres av en løsning ved en passende temperatur som inneholder salter og næringsstoffer som kreves for å holde cellene i live. Dette kan utføres ved ganske enkelt å senke vevet i løsningen, eller kan innebære mer komplekse arrangementer som Langendorff perfusjon. Disse løsningene inneholder nøyaktige konsentrasjoner av elektrolytter, inkludert natrium, kalium, kalsium, magnesium, fosfat, klorid og glukose. Konsentrasjonene av disse elektrolyttene må være nøye balansert og ta hensyn til osmotisk trykk. Surheten i løsningen må reguleres, ofte ved bruk av en pH-buffer som HEPES. Isolering av celler fra enkelte vev kan forbedres ved å oksygenere løsningen. I begynnelsen er perfusjon av vevet med en løsning som ikke inneholder kalsium, spesielt nyttig når man isolerer hjerte-myocytter, da fraværet av kalsium forårsaker separasjon av de interkalerte diskene.

Proteolytiske enzymer kan deretter tilsettes til løsningen. Enzymer som fordøyer kollagen (kollagenaser) brukes ofte når man isolerer celler fra hjertet eller blæren. Generelle enzymer som fordøyer mange slags protein (proteaser) kan også brukes. Ved isolering av celler fra hjernevev, kan andre enzymer som bryter NED DNA (Dnaaser) være påkrevd.Disse enzymene, I tillegg til å fordøye den ekstracellulære matrisen, kan også fordøye andre viktige proteiner som er essensielle for at cellene av interesse skal fungere. Hvis cellene blir utsatt for disse enzymene for lenge, resulterer celledød, men hvis de ikke blir utsatt for enzymer for lenge nok, vil fordøyelsen av den ekstracellulære matrisen ikke være fullført. Etter at enzymer er fjernet fra vevet ved å perfusere det med en andre løsning som ikke inneholder enzymer, kan celler separeres mekanisk eller dissosieres. En enkel teknikk for dissosierende celler innebærer å kutte vevet i liten del før du omrører biter i en løsning ved hjelp av en pipette.