Paul Barberによって貢献
Chelexを介したDNA抽出
Chelexは、安価で簡単であるほど気まぐれであることで有名です。 ここによい増幅のためのある先端はある:1。 時にはサンプルすぐに使用する場合は最高の仕事、時にはそれを使用する前に一晩待つ方が良いです。 実験し、あなたの種のために働くものを見つけなさい。 結果は分類群によって異なる場合があります。2. 最初のPCRsをするとき、型板の連続希薄をして下さい。ＰＣＲで使用されるキレックスＤＮＡ抽出の量は、ＰＣＲの容積の半分程度の高さであり得るか、または１：１ ０，０ ０ ０希釈の１マイクロリットル程度の低さであり得る。 私は1:1の1マイクロリットルがほとんどの適用のためによいことが分る。3. あなたのPCRからchelexのエキスとの増幅を最初に得なければ、渦、回転、孵化、渦、回転、上で記述されている一晩のプロシージャを坐らせて下さい繰り返して下さ 多くの場合、これは否定的なPCR作業を行います。
方法†
- 漂白剤で、乾燥した試薬スパチュラと小さな磁気攪拌棒を滅菌します。
- Chelex100樹脂（Biorad部）の5-10重量％スラリーを調製する143- 3832,100-200 メッシュキレックス、ナトリウム形態）および紫外線殺菌したHPLC水。 これをする最も効果的な方法は小さいビーカーの中のスケールの50のmlの生殖不能の隼の管、場所を取り、スケールをゼロにすることである。 それからChelexの5グラムを加え、水が付いている50ml印に満たして下さい。
精度は重要ではありません。 滅菌技術はです。
- 滅菌stirbarをチューブに置き、磁気stirrerに置きます。 Chelexはすぐに解決する従ってスラリーがよく混合されなければ、あなたの集中および結果は可変的である。 スラリーをよく混合して、0.6か1.6ml eppendorfの管にaliquot300-500microリットル（再度、生殖不能）保ち、すぐに帽子をかぶせて下さい。 層流のフードへのアクセスがあれば、それはこれすべてをするよい場所である。 スケールの下で拭きたいと思う場合もあり、10%の漂白剤の解決とスターラーおよび/または紫外線は使用前に殺菌します。
- 加熱ブロックをオンにします。 95℃に設定します。
- 滅菌鉗子（滅菌するためにアルコールバーナーを数回にわたって炎）を使用して、あなたのサンプルから組織の小片を削除します。 組織のこの部分は、目に見えるように十分な大きさでなければなりませんが、簡単に目に見えるようにそれほど大きくはありません。 標準的なステープルの0.2mmセクションを切ることを想像しなさい。 これはたくさん大きいです。 あまりにも多くの組織は、あなたの反応を阻害する可能性があります。
サンプル間の鉗子を滅菌します。
- 終了したら、chelexのスラリーの管にあなたの殺菌した鉗子を浸すことによって否定的なChelex制御をして下さい。
- 渦サンプルと10-15秒間キレックススラリー。
開始する前に蓋がしっかりとスナップされていることを確認してください。
- マイクロ遠心分離で高速で簡単にサンプルをスピン
- サンプルを20分間95℃でインキュベート
*この手順を実行すると、ブロック温度がわずかに低下することがあります。 このドロップは正常です。 Ensurethatのふたがぽんと鳴っていないために孵化している間管を点検しなさい。*
- 渦は10-15秒間再びサンプルします。蒸気が遠心分離機管のふたをぽんと鳴らすかもしれないのでBecareful。
蓋を押したままにします。
- マイクロ遠心で再び高速でチューブをスピンします。
- サンプルを使用する準備ができています。
PCR反応には上酸塩のみを使用してください。 ChlexビーズはTaqを不活性化します！
このメソッドは、許可を得て、ここで利用可能な元のプロトコルに基づいています。
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