細胞単離

共焦点顕微鏡を用いて撮影した単離された成人心筋細胞の画像

循環細胞編集

単離された細胞を得るために必要な技術は、必要な細胞の種類によって異なります。 血液細胞またはいくつかの腫瘍細胞などの循環細胞は、血液サンプルを採取することによって単離することができる。 血液サンプルには多くの異なる細胞タイプの混合物が含まれているため、細胞を異なるタイプに分離する方法を使用する必要があります。 これのための最も一般的な方法は自動化された検光子が細胞の狭い流れを点検する流れのcytometryである。 この技術の一つのバージョンでは、光が細胞の流れに輝いており、分析器は、この情報を使用して関心のある細胞を収集室に迅速に操縦する前に、反射光

固体組織編集

固体組織を扱う場合、細胞単離のための組織を得ることはより困難である可能性があります。 例えば、右心房付属器の標本は、冠動脈バイパス手術などの開心手術中に切除され、廃棄されることが多い。 膵臓または膀胱のサンプルなどの他の組織を生検として採取することができる。 あるいは、動物からの組織は、しばしば、動物を犠牲にすることによって得られる。

組織標本が得られた後、細胞を生きたままにするために必要な塩および栄養素を含む適切な温度で溶液で囲まれまたは灌流されなければならない。

これは、溶液中に組織を単に沈めることによって行われてもよく、またはランゲンドルフ灌流のようなより複雑な配置を伴うことがある。 一般的に使用される溶液には、Tyrodeの溶液またはKrebsおよびHenseleitの溶液の改変が含まれていますこれらの溶液は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リン酸塩、塩化物、およびグルコースを含む正確な濃度の電解質を含む。 これらの電解質の濃度は、浸透圧に注意を払って慎重にバランスをとる必要があります。 溶液の酸性度は、しばしばHEPESなどのpH緩衝液を使用して調節する必要があります。 いくつかの組織からの細胞の単離は、溶液を酸素化することによって改善され得る。 初期段階では、カルシウムを含まない溶液で組織を灌流することは、特に心筋細胞を単離する場合に有用であり、カルシウムの不在は、挿入された円板の分離を引き起こすので、有用である。その後、タンパク質分解酵素を溶液に添加することができる。

コラーゲンを消化する酵素(コラゲナーゼ)は、心臓や膀胱から細胞を単離するときによく使用されます。 多くの種類のタンパク質(プロテアーゼ)を消化する汎用酵素も使用することができる。 脳組織から細胞を単離する場合、DNAを分解する他の酵素(Dnaase)が必要になることがあります。

これらの酵素は、細胞外マトリックスを消化することに加えて、関心のある細胞が機能するために不可欠な他の重要なタンパク質を消化するこ 細胞がこれらの酵素にあまりにも長い間暴露されると、細胞死が生じるが、十分に長い間酵素に暴露されないと、細胞外マトリックスの消化は完全ではない。 酵素を含まない第二の溶液で組織を灌流することによって酵素を組織から除去した後、細胞を機械的に分離または解離させることができる。 細胞を解離するための簡単な技術は、ピペットを使用して溶液中の塊を攪拌する前に、組織を小さな塊に切断することを含む。

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