これは、大腸菌の形質転換に関する三部シリーズの最初のものです。 これの終わりまでに、あなたは大腸菌の形質転換の専門家でなければならず、どの株が異なる用途のために選択されるべきか。 あなたがすでに専門家であれば、私はそれがあなたのための楽しい復習になることを願っています。 いずれの場合も、追加するものがあれば以下にコメントしてください。

形質転換のための電気を使用して

外国のDNAは、電気穿孔または化学変換を使用して有能な大腸菌に導入することができます。

エレクトロポレーションを使用する場合は、セル全体に電流を印加します。 電流は、電気泳動型効果によって負に帯電したDNAを細胞に強制する細胞膜に瞬間的な”細孔”を作成すると考えられている。 電気的に有能な大腸菌を作るために、細胞を徹底的に洗浄してすべての培地塩を除去する。 これにより、電荷が媒体を介して伝導されないことが保証される。 また、細胞への熱損傷を最小にするために0°Cで電気穿孔法を行って下さい。化学物質：彼らは化学的に有能な細胞を作るためにも働き、0℃のCacl2溶液中に大腸菌を再懸濁させる。

化学物質：彼らはまた、

化学的に有能な細胞 これらの条件下では、Ca2+イオンは膜内に細孔を作り、DNAの細胞膜への結合を助け、DNA上の負電荷を隠すと考えられている。 一緒に、これらは疎水性細胞膜を通るDNAの通過を容易にする。 短い42℃の熱ショックを印加することによってDNAを細胞に強制し、その結果、DNAを細胞に掃引する熱電流が生じる。それぞれの長所と短所

エレクトロポレーションは、化学変換よりも面倒ではなく、一般的に（DNAのマイクログラムごとに形成されたコロニーで測定）高 しかし、それはより高価です。 それは特別な器具が細胞の懸濁液に充満を移すために充満およびキュベットを提供するように要求します。 電気穿孔法は塩に敏感である–余分な塩がキュベットに運ばれれば貴重なサンプルを失うことができる。P>

個人的には、私は化学変換を好みます。 それは約半時間かかりますが、私は結果がより予測可能であることがわかり、私は濃度が低すぎる場合、DNAのより多くのボリュームを追加することがで あなたが原因で溶液にあまりにも多くの塩を追加する危険性のエレクトロポレーションでDNAの量を増やすことはできません。 化学的変換の一般的に引用されている欠点は効率が低いことですが、StratageneのXL10-goldなどの超有能なセルを購入できるようになったため、これはもはや

このシリーズの記事：

• 大腸菌エレクトロポレーション対化学変換（この記事）
• 有能な大腸菌：購入するか購入しないか？
• 有能な大腸菌株を選択する

もともとSeptember18,2007に公開されました。 改訂され、July11、2016に更新されました。p>