表2

カンジダアルビカンスに関連付けられている病原因子。カンジダ症の種類にかかわらず、カンジダ種が健康な個体の粘膜表面に持続する能力は、その病原性に寄与する重要な要因である。 これは、生物が食道に向かって唾液の比較的一定の流れの機械的洗浄作用に抵抗しなければならない口腔において特に重要である。

カンジダのための単一の優勢な病原性の要因は伝染プロセスの促進で関係したいくつかの要因があるが確認されません。 これらには、口腔表面へのカンジダの接着に関与する属性（例えば、相対的な細胞表面疎水性および特定のアドヘシン分子の存在）、宿主免疫防御機構（例えば、 宿主細胞への損傷を誘導することができる）。

3. 口腔カンジダ症

Samaranayakeは、口腔カンジダ症病変が二つの主要なグループに細分された分類を提案した：グループI、または皮膚または他の粘膜の関与のない口腔に限局した病変に限定された一次口腔カンジダ症;グループIIまたは二次口腔カンジダ症、病変が皮膚などの口腔および口腔外の部位に存在する（表3）。 グループIの病変は、古典的な三つ組—偽膜性、紅斑性、および過形成性の変異体からなり、いくつかは、プラーク様および結節型に後者のさらなる細分化を示唆している。Tr>

一次口腔カンジダ症（グループI） 二次口腔カンジダ症（グループII） 二次口腔カンジダ症（グループII） 二次口腔カンジダ症（グループII） 二次口腔カンジダ症（グループII） “プライマリトライアド”: Condition Subgroup Pseudomembranous (mainly acute) Familial chronic mucocutaneous candidosis 1 Erythematous (acute/chronic) Diffuse chronic mucocutaneous candidosis 2 Hyperplastic (mainly chronic) Candidosis endocrinopathy syndrome 3 (i) Plaque-like Familial mucocutaneous candidosis 4 (ii) Nodular/speckled Severe combined immunodeficiency 5a Candida-associated lesions Di George syndrome 5b Denture stomatitis Chronic granulomatous disease 5c Angular cheilitis Acquired immunodeficiency syndrome 6 Median rhomboid glossitis — — Linear gingival erythema — —

Isolation method Advantages Disadvantages Culture of whole saliva Sensitive; viable organisms isolated Problems may occur with collection of sample; not site specific Concentrated oral rinse Quantitative; viable cells isolated Some patients have difficulty in using rinse; not site specific Swab Simple to use; viable cells isolated; site specific Difficult to standardize Smear Simple to use; not reliant on culture Viable cells not determined; species identity not readily confirmed Imprint culture Quantitative; viable cells isolated; site specific Some sites difficult to sample Biopsy Essential for chronic hyperplastic candidosis Invasive; カンジダ症の他の形態には適していません

Table 5

Morphological features of Candida species.病変部位から採取した塗抹標本を顕微鏡スライドに固定し、グラム染色または周期的酸シッフ（PAS）技術によって染色する。 これらの方法を使用すると、カンジダ菌糸および酵母は濃い青色（グラム染色）または赤色/紫色（PAS）のいずれかに見える。

慢性過形成性カンジダ症の場合、PASまたはGomoriのメテナミン銀染色のいずれかを用いた組織学的染色による侵入カンジダのその後の検出には、病変の生検 組織内の真菌要素のデモンストレーションは、これらの汚れによって深く染色されるときに行われます。 Blastosporesおよび菌糸またはpseudohyphaeの存在は病理組織学者がカンジダの種として菌類を識別し、他の病理組織学的な特徴の存在を与えられて、慢性のhyperplastic candidosisの診断をする

7. 実験室培養

7.1。 スワブ

病変部位のスワブは、成長を検出する比較的簡単な方法であり、カンジダの半定量的推定を得ることができる。 見本抽出のアプローチは穏やかにlesionalのティッシュ上の生殖不能の綿棒を摩擦し、次にSabouraudの右旋糖の寒天(SDA)のような第一次分離媒体に接種することを含7.2.

7.2. 濃縮オーラルリンス

オーラルリンス技術は、患者が10mLの滅菌リン酸緩衝生理食塩水（0.01M、pH7.2）を口の中に1分間保持することを含む。 次いで、溶液を遠心分離によって（１ ０倍）濃縮し、既知の容積、通常は５ ０μ ｌを、螺旋めっきシステムを使用して寒天培地に接種する。 ３ ７℃での２ ４〜４ ８時間のインキュベーションの後、増殖をコロニーの列挙によって評価し、リンスの１ｍＬ（ｃｆｕ ｍＬ−１）当たりの単位を形成するカンジダルコローニー（ｃａｎｄｉｄａｌ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔｓ）7.3.

インプリント培養

インプリント法は、使用直前にSabouraud’s brothなどの適切な液体培地に予め浸した既知のサイズ（通常は2.5cm2）の滅菌フォームパッドを利 次いで、パッドを標的部位（粘膜または口腔内プロテーゼ）上に３ ０秒間置き、次いで培養のために寒天に移す。

8. 培養培地

カンジダのための最も頻繁に使用される一次単離培地は、カンジダの成長を可能にするが、その低いpHのために口腔細菌の多くの種 典型的には、SDAは37℃で24-48時間好気的にインキュベートされる。 カンジダは、sda上のクリーム、滑らかな、ペースト状の凸状のコロニーとして開発し、種間の分化はめったに可能ではありません。 複数のカンジダ種が経口サンプルの約10％で発生し、近年ではnonalbicans種を検出する能力がますます重要になっていると推定されています。

近年、初代培養後のコロニーの外観および色に基づいて特定のカンジダ種を同定することを可能にする他の差動培地が開発されている。 このような培地の利点は、単一の感染における複数のカンジダ種の存在を決定することができることであり、これは後続の治療選択肢を選択する これらの例としては、Ｐａｇａｎｏ−Ｌｅｖｉｎ寒天または市販の発色寒天、すなわちＣｈｒｏｍａｇａｒ Ｃａｎｄｉｄａ、Ａｌｂｉｃａｎｓ ＩＤ、Ｆｌｕｒｏｐｌａｔｅ、またはＣａｎｄｉｃｈｒｏｍ ａｌｂｉｃａｎｓが挙げられる。

Pagano-Levin agarは、塩化トリフェニルテトラゾリウムの還元に基づいてカンジダ種を区別する。 他のカンジダ種のコロニーは、ピンクの着色の様々な程度を示す一方で、培地は、C.albicansの淡い色のコロニーを生成します。 Pagano Levinの寒天にSDAに同じような感受性がありますが、サンプル、CHROMagarカンジダの複数の種の検出のために優秀ですc.albicans、C.を識別します。 コロニーの色と外観に基づいてtropicalis、およびC.krusei、Albicans IDとFluroplateはC.albicansの推定同定に有益であることが証明されています。 同一証明の特定性はCHROMagarカンジダのための95%およびAlbicans IDおよびFluroplateの寒天のための98.6%であるために報告されます。 Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓから新しく記載されたＣ．ｄｕｂｌｉｎｉｅｎｓｉｓの識別を可能にするアプローチとして，一次単離寒天としてのＣｈｒｏｍａｇａｒｃａｎｄｉｄａの使用が挙げられている。 Ｃ．ｄｕｂｌｉｎｉｅｎｓｉｓはｃ．ａｌｂｉｃａｎｓと比較してより暗い緑色のコロニーとして発達すると報告されている。 しかし、クロマガーを用いたこれら二つの種の区別は、継代培養および分離株の貯蔵時に低下するように見える。 45℃の高いインキュベーション温度で寒天培地上で成長するC.dubliniensisの失敗は、最近、これら二つの種を区別するための代替試験として提案されています。

9. カンジダ種の同定

一次培養培地に基づく酵母の同定は、伝統的に形態学的（表5）および分離株の生理学的特性に基づく様々な補足試験によって確

9.1。 形態学的基準

胚芽管試験は、C.albicansを同定するための標準的な実験室法です。 テストは2-4時間37°Cの馬の血清で継代培養されたとき菌糸のoutgrowths（生殖管）の誘導を含みます。 C.albicansの分離株の約95％は胚芽管を産生し、c.stellatoideaとC.dubliniensisも共有している。

C.albicansおよびC.dubliniensisは、クラミドスポアとして知られる形態学的特徴を産生する能力に基づいて、他の種から同定することもできる。 クラミドスポアは、コーンミール寒天のような栄養価の低い培地上で分離株を培養した後、菌糸の末端に生成される屈折性の球状構造である。 分離株は、寒天上のクロスハッチパターンで接種され、滅菌カバースリップで覆われています。 寒天は24-48時間37°Cで孵化し、次にクラミドスポアの存在のために顕微鏡的に検査されます。 9.2.

生理学的基準/生化学的同定

カンジダ種の生化学的同定は、主に炭水化物の利用に基づいています。 伝統的な試験は、炭素源を欠いている基礎寒天上の試験分離株の培養を関与していたであろう。 次いで、炭水化物溶液は、播種された寒天のウェル内に、または寒天表面上に位置する濾紙ディスク上に配置される。 炭素源付近の成長は利用を示すであろう。 商業システムは同じ主義に基づいているが、テスト炭水化物はテストストリップにあるプラスチック井戸で収容される。 各井戸の成長はある特定のキットシステムの濁り度または色の変更の変更によって読まれる。 試験結果から得られた数値コードを用いて，データベース比較に基づいて試験生物を同定した。9.3.

血清学

血清学的検査は、カンジダ種分離株の臨床的意義を確認するために頻繁に使用されます。 Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓに対するｌｇｇ抗体の力価の上昇は，免疫担当者における侵襲性カンジダ症を反映している可能性がある。 IgAおよびIgM抗体の検出は、急性感染を同定するために重要である。 免疫抑制された個体はしばしば抗体産生の変動性を示し、そのような場合には抗原検出試験の使用が推奨される。 酵素によってつながれるimmunosorbentの試金(ELISA)および無線の免疫学の試金(RIA)のようなテストはcandidial抗原の検出のために、細胞壁のmannanまたは細胞質の要素今利用で

血清学的診断はしばしば遅延し、検査は依然として感度および特異性を欠いている。

血清学的診断はしばしば遅延し、検査は依然として さらに、免疫不全患者における抗体産生は可変であり、診断は複雑である。 これは、真菌抗原および代謝産物がしばしば循環から急速に除去され、抗体の存在が常にカンジダ感染を意味するとは限らず、特に重篤な基礎疾患

血清学的検査は、通常、口腔カンジダ症の診断ツールではありません。 しかし、このような検査は、抗真菌療法に不十分に反応する重度の口腔カンジダ症の患者における予後の手段であり得る。9.4.

分子ベースの同定方法

遺伝的変動の分析による同定は、表現型基準に基づく方法を使用するよりも安定したアプローチです。 遺伝的変異に基づくカンジダの同定には，ゲル電気泳動またはＤＮＡ-ＤＮＡハイブリダイゼーションを用いた電気泳動核型の違いおよび制限断片長多型（Ｒｆｌｐｓ）の解析がある。

種特異的PCRアプローチはまた、カンジダ種の同定のために使用されています。 これらの最も頻繁に増幅されたリボソームRNAオペロンの配列であるが、いくつかの標的遺伝子は、カンジダ種の識別のために報告されている。 同定は、ゲル電気泳動分解後に得られたPCR産物サイズ、または直接配列決定または制限エンドヌクレアーゼを用いたPCR配列の切断後の制限断片分析

ペプチド核酸法（PNA Fish）と蛍光in situハイブリダイゼーションは、生きているC.albicansの豊富なrRNAにおける高度に保存された種特異的配列を標的とする新しい検 個々の細胞は、増幅を必要とせずに直接検出することができる。 この技術は98.7–100％の感度を達成し、100％の特異性を持ち、表現型的に類似したC.dubliniensisからC.albicansの識別を可能にする。

分子ベースの技術は、パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）、ランダム増幅多型DNA（RAPD）分析、およびリピート配列増幅PCR（REP）などの技術の使用は、主に口腔カンジダ症10.

10. 結論

近年、ヒト臨床サンプルからのカンジダ種の信頼性の高い同定のために、より大きな重点が与えられている。 カンジダの分離と同定のための概略図を図1に示します。 カンジダは常駐微生物叢であるため、適切な分離方法は、その数と一緒に口の中の存在を確認するために必要とされます。 カンジダ種の分離株は、感染を引き起こす能力と抗真菌剤に対する感受性の両方において、広く異なるため、カンジダの感染株を同定することも重要 様々な表現型技術は、形態学的培養試験、差動寒天培地、および生化学的同化試験を使用することを含む単離されたカンジダを同定するために利用可能で これらの方法には、疫学調査のために主に予約されている最近の分子技術が補足されています。