ニンジン（Daucus carota）は、食用 それは、色、風味、繊維、およびビタミンAの食餌療法の多様性、ならびに生および調理された形態の両方での消費のために、最も消費され生産された野菜 人間の消費のために毎年2,000万トン以上が生産されています。

組織培養の実践は、植物のクローニングで非常に人気がありました。 ニンジン組織培養の最初の研究は、1939年にGautheretとNobecourtによって報告されました。 しかし、Ｓｔｅｗａｒｄ ｅ ｔ ａ ｌ． そしてReinertは”にんじんのはい形成”の最初の調査を報告しました;彼らは細胞懸濁液およびカルス文化を使用して根を育てることを試みました。体細胞胚形成は、植物細胞培養の生化学的、生理学的、および遺伝的側面を理解し、調査するための効率的な方法です。

体細胞胚形成は、植物細胞培養の

ニンジン組織培養に関する多くの研究は、ニンジンにおける胚形成の簡単な方法の開発につながった。 この方法によれば、ニンジン培養物の成長は、細胞懸濁培養物からホルモン2,4-Dを除去するだけで誘導することができる。 現在、ニンジンは、世界中の様々な実験室で体細胞胚発生の分析のための実験モデルとしてよく使用されています。

培養の確立に必要な材料および装置

滅菌材料

• ニンジンの5砕けやすいカルス培養、汚染されていない、および25℃で維持。
• 5Erlenmeyerフラスコ（250ml）、5×10-8g/ml2、4-Dの培地を含む。
• 5測定シリンダー（100ml）箔キャップ付き。
• 2つのヘラ。
• 25枚のアルミ箔（100x100mm）。
• ナイロンの2個、または測定シリンダーの開口部に挿入することができる250μ mの気孔率を有するステンレス鋼のふるい。
• 5ペトリ料理。

非滅菌材料

• 防水マーキングペン
• 回転振とう機
• ブンセンバーナー
• 1Erlenmeyerフラスコ（150ml）95％エタノールを含む
• パラフィルム

培養の開始および確立のための手順

1. カルス培養のチューブを取り、5本のチューブすべての口を滅菌し、カルスをペトリ皿に別々に移す（5本のペトリ皿に5本のカルス）。
2. 培養培地と2,4-Dを含む250mlの標準フラスコを取る。
3. ペトリ皿から5つのカルスすべてを5つの標準フラスコに別々に移します。
4. フラスコの口を炎/滅菌し、キャップで覆う。 パラフィルムを使用してキャップを固定します。
5. 培養物を含むすべてのフラスコを回転式振とう機に25℃の暗所または低光強度で置きます。
6. 7日後、フラスコをシェーカーから滅菌室に移します。
7. 各フラスコからパラフィルムと箔キャップを取り除き、フラスコの口を炎/滅菌します。
8. 各フラスコの懸濁液を滅菌した100mlシリンダーにふるいに通すことによって別々に移します。
9. コンテンツを10分間沈降させ、上清を破棄します。
10. 測定シリンダーに残った細胞の残渣を250mlの新鮮な培地を含む60mlのフラスコに移します。
11. 各培養フラスコに対してステップ10を繰り返します。
12. 再びシェーカーの上にすべての五つのフラスコを置きます。
13. 7日後前に行った手順を繰り返します（手順6-10）。 但し、今回は接種物として残りの細胞の1/5だけを取ります。
14. この手順を約3-4回繰り返します。 そうすることによって、単一の細胞または小さな凝集体のみがニンジン懸濁液中に残るであろう。
15. ニンジン細胞懸濁液の場合、適切な細胞の数は105-3×105細胞/mlまたは100-300mg（新鮮重量）の接種物の間の範囲であり、培地を含む新鮮な培地の60mlおよび5×10-8g/ml、2,4-Dの容量である。
16. ニンジンが懸濁培養中に単一細胞を得るためには、7日間の移動期間が適切である。

Approximate Schedule of the Culture

Event	Timing (approximate)
Initiation of cell suspension and determination of total cell number and PCV (packed cell volume)	Day 0
First transfer of cultures	Day 8
Fourth transfer of cultures	Day 29

Result

What should you observe while experimenting? ここにあなたの結果に注意している間覚えておくべきあるポイントはある。

• 実験の日付と期間。
• 適用された培養および処理の数。
• 三週間の間隔で感染した培養物の形態および数を記録する。
• 培養物の移送の開始時および終了時にPCV（充填細胞体積）を決定する。
• 3つのサブカルチャーの後の合計セル数を1、2、4、および7日目に推定し、時間に対してグラフをプロットします。
• 接種物の密度と成長パターンとの関係を研究する。懸濁培養は、気体交換を容易にする培養培地中の組織の移動を可能にするので、他の培養物よりも利益を提供する。

懸濁培養は、気体交換を容易に なお、それは媒体の内のそしてでティッシュおよび栄養勾配の極性を取除きます。

ニンジンのための組織培養の適用

1. タプルのクローンを作成します。
2. ニンジンの変異体の形を研究する。
3. ニンジンの生理学的応答を研究し、他の植物の理解を促進する可能性があります。
4. 単細胞からニンジンの成長と発展を研究します。
5. ニンジンのストレス応答を研究し、他の植物の応答についての洞察を提供します。
6. 任意の実験目的のための単一細胞の懸濁液からトランスジェニック植物の数百を生成します。
7. 任意の実験目的のための単一細胞の懸濁液

1. Reinert J.とYeoman M.M.(1982)。 植物細胞および組織培養：実験室マニュアル。 シュプリンガー＝ヴェルラグ、ベルリン-ハイデルベルク、ニュイヨーク。
2. Hardegger M.、Shakya R.（2004）ニンジンの変換。 で:カーティスI.S.(eds)世界のトランスジェニック作物. シュプリンガー、ドルドレヒト https://doi.org/10.1007/978-1-4020-2333-0_22。
3. 懸濁培養におけるニンジン細胞の増殖および分裂。 (1970). 植物および細胞生理学。 ドイ:10.1093/オックスフォードジャーナルズ.pcp.074564
5. https://www.atzlabs.com/prodcut-info/C1955-Carrot-。../li>

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