CPZはTRPV1とは独立して大腸炎を減衰させる
CPZ浣腸が実験的大腸炎を減衰させるメカニズムに挑戦するために、我々は野生型(WT)およびTRPV1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1-trpv1欠損マウス（各群ｎ＝８）。 競合する報告が存在するが、TRPV1欠損マウスは、我々が以前に公開していたTNBS大腸炎のモデルからの結果に準拠して、私たちの研究室でcongenic WTマウスと同程度にDSS大腸炎と体重減少を開発しました7,8,9,10,11,12. CPZ浣腸治療のために、我々は以前にrats8でdss（5％）大腸炎を減衰させることが報告されていたCPZ（531μ M）の同じ濃度を使用しました。 大腸炎の経過は、体重測定および内視鏡検査によって毎日監視された。 ＣＰＺ（５ ３ １μ Ｍ）浣腸の１日２回の適用は、ＷＴおよびＴＲＰＶ１−／−マウスの両方においてＤＳＳ大腸炎を同程度に減衰させ、これは、改善された内視鏡スコアおよび体重の減少によ 1A-C–。 H&E7日間のDSS実験の終わりに遠位結腸からの汚れは、コントロールの結腸に多数の浸潤免疫細胞を有する破壊された粘膜組織アーキテク これは、広く無傷の粘膜および両方の遺伝子型のＣＰＺ処置マウスの結腸における有意な免疫細胞浸潤の不在とは全く対照的であった（図１ ０Ａ）。 1D）。 これらの知見によれば、両方の遺伝子型のＣＰＺ処置マウスにおいて組織学的スコアが強く低下した（図１ ０Ａ）。 1E）。
CPZはTRPA1を活性化
CPZ浣腸が効果的にTRPV1ヌル変異マウスにおける大腸炎を阻害することをin vivoでの観察は、CPZのTRPV1非依存性神経効果に問 TRPA1はcolitis6、12、14を含む炎症の様々なモデルで重要であることが示されていたので、我々はCPZがTRPA1に作用するかどうかをテストしました。
htrpa1を介してCPZ誘導イオン電流
パッチクランプ実験は、組換えhtrpa1を発現するHek293T細胞（htrpa1-Hek293T細胞）の電圧クランプモードで行った。 −６ ０ｍＶの保持電位で、ＣＰＺ（１ ０μ Ｍ）は、選択的ＴＲＰＡ１アンタゴニストＨ Ｃ−０ ３ ０ ０ ３ １（Ｈ Ｃ、１ ０μ Ｍ）によってほぼ完全に阻害された（９ ３％阻害、ｎ＝５）内向き電流を誘導した（図１ ０）。 2A）。 CPZ誘導内向き電流が記録されたすべての細胞では、カルバクロール（100μ m）確立されたTRPA1アゴニストは、また、htrpa1の機能発現を示す、同じ保持電位で大きな内向き電流を誘発した。 これらのＨＴＲＰＡ１−ＨＥＫ２ ９ ３セルも、４秒毎に４ ０ ０ｍ ｓ持続時間の−１ ０ ０〜＋１ ０ ０ｍＶの電圧ランプに供した（図１ ０Ａ）。 2B）。 CPZ誘起の電流-電圧関係は、わずかに外側に整流され、反転電位は0mVに近いことを示しました（図。 2C）。 CPZ（10μ m）によって誘発される電流は、HC（10μ m）によって阻害された。 この効果は、負の電位（89％±5％阻害-80mV、平均±SD、n=7）で正の電位（80％±9％阻害+80mV）よりも顕著であった。
カプサゼピン（CPZ）は、異種発現ヒトTRPA1を活性化します。
(A)CPZ(10μ m)トランスフェクトHek293t細胞におけるhtrpa1媒介電流を呼び起こす。 選択的ＴＲＰＡ１アンタゴニストＨ Ｃ０ ３ ０ ０ ３ １（Ｈ Ｃ、１ ０μ Ｍ）による電流の完全な阻害に注目する。 （Ｂ）ＨＴＲＰＡ１トランスフェクトされたＨＥＫ２ ９ ３セルにおいて、４秒毎に印加される−１ ０ ０〜＋１ ０ ０ｍＶの４ ０ ０ｍｓ電圧ランプによって誘発される代表的なランプ電流。 ＣＰＺ誘起電流はＨ ｃによって強く阻害された。 （Ｃ）Ｂ中の充填された記号および数字に対応する個々のランプ電流の例。（Ｄ）ＣＰＺ（５ ０μ Ｍ、１ ０秒）は、ＨＴＲＰＡ１−ＨＥＫ２ ９ ３細胞中の大きなカルシウム過渡現象を呼び起こす（黒トレース、ｎ＝１ ２ ８）。 HC(20μ m;赤のトレース、n=209)とA-967079(10μ m;青のトレース、n=140)完全にCPZへの応答を阻害しました。 データは、平均（直線）±Ｓｅｍｓ（点線）を表す。 （Ｅ）ＣＰＺ（１ ０μ Ｍ）によるＨＴＲＰＡ１の活性化は、濃度依存性である。 黒色の痕跡：ＨＴＲＰＡ１−ＨＥＫ２ ９ ３細胞（ｎ＝５ ２）は、３分間隔で２ ０秒のＣＰＺの濃度を増加させることによって刺激された。 灰色の痕跡：未移入のＨＥＫ２ ９ ３細胞（ｎ＝１ ０ １）を、同じＣＰＺ濃度に供した。 （F）cpz（1μ m）によるhtrpa1の活性化は、チャネルのN末端に三つの重要なシステインを含みます。 黒の跡: ＣＰＺ（１μ Ｍ）、カルバクロール（１ ０ ０μ Ｍ）およびアリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ、５ ０μ Ｍ）の連続的な適用に対するｗｔ Ｈ ＴＲＰＡ１を発現するｎ＝１ ２ ３のＨＥＫ２ ９ ３細胞の応答。 灰色の痕跡：同じ一連の刺激に対する突然変異体ＨＴＲＰＡ１−３Ｃを発現するｎ＝１ ６ ５個のＨＥＫ２ ９ ３細胞の応答。 ＨＴＲＰＡ１−３ｃ変異体のＣＰＺおよびＡＩＴＣに対する応答の実質的な減少に注目するが、カルバクロールに対する応答の実質的な減少には注目しない。 （G）遺伝子型間のCPZ感度の差は、100μ m CPZで廃止された。 （Ｈ）ｃｐｚによるｈｔｒｐａ１の活性化は、捕捉剤Ｎ-アセチルシステイン（ＮＡＣ）によって防止することができる。 黒の跡: 対照実験では、ＨＴＲＰＡ１−ＨＥＫ２ ９ ３細胞をＣＰＺ（５ ０μ Ｍ；６ ０秒；ｎ＝７ ４）で挑戦した。 赤色の痕跡：別の実験において、細胞を最初にＣＰＺ（５ ０μ Ｍ）およびＮＡＣ（１ ５ｍ Ｍ）の組み合わせに３ ０秒間曝露し、直後にＣＰＺ単独でさらに３ ０秒間曝露した（ｎ＝８ ３）。
htrpa1を介してCPZ誘導カルシウム流入
TRPA1上のCPZの選択的作用は、カルシウムマイクロフルオロメトリー技術を用い ＨＴＲＰＡ１−ＨＥＫ２ ９ ３細胞を、５分間隔で１ ０秒間ＣＰＺ（５ ０μ Ｍ）の２回の適用によって刺激した（図２Ｂ）。 2D）。 選択的アンタゴニストＨ Ｃ（２ ０μ Ｍ）およびＡ−９ ６ ７ ０ ７ ９（１ ０μ Ｍ）を、最初のＣＰＺチャレンジの前および最中に１分間適用した。 ＣＰＺ応答は両アンタゴニストによって完全に廃止された。 Ｈ Ｃの除去は、おそらく残存ＣＰＺ作用によるカルシウム流入をもたらしたが、このオフ効果は、よりゆっくりと脱離する可能性のあるＡ−９ ６ ７ ０ ７ ９の場合には 2D）。 次に，ＣＰＺ効果の濃度依存性を解析した。 増加したＣＰＺ濃度（１ ０ ０ｎＭ、５ ０ ０ｎＭ、５μ Ｍおよび５ ０μ Ｍ）を、ＨＴＲＰＡ１−ＨＥＫ２ ９ ３細胞にそれぞれ２ ０秒間、３分間隔で適用した。 100nMから始めて、CPZのすべての濃度は、ますます大きな振幅を有するカルシウム過渡を誘発した（図10B）。 2E）。 カルバクロール（100μ m）は、機能TRPA1発現を制御するために実験の終わりに適用されたが、50μ m CPZ後のカルバクロール応答は、交差脱感作を示唆し、顕著に小さかった。 未転写HEK293細胞は、同じCPZアプリケーションに供され、唯一の最高濃度（50μ m）は、カルシウムの最小限の増加を誘導したテストしました。 ＣＰＺは求電子性化合物であるため，チャネルのＮ末端ドメインにおける三つの重要なシステイン残基に係合することを期待した。 ＷＴ Ｈ ＴＲＰＡ１を発現するＨＥＫ２ ９ ３細胞および三重システイン変異体Ｈ ＴＲＰＡ１−３Ｃを発現する細胞（Ｃ６ ２ １Ｓ、Ｃ６ ４ １Ｓ、Ｃ６ ６ ５Ｓ）を、ＣＰＺ施用（１μ Ｍ、２ ０ｓ）に供し、続いて非求電子アゴニストカーバクロール（１ ０ ０μ Ｍ、２ ０ｓ）および高度求電子性ＡＩＴＣ（５ ０μ Ｍ、３ ０Ｓ）を行った。 実験の最後にイオノマイシンを陽性対照として適用した。 １μ ＭのＣＰＺによって誘発されたカルシウム一過性の振幅は、ＷＴ Ｈ ＴＲＰＡ１を発現する細胞と比較して、ＨＴＲＰＡ１−３Ｃを発現する細胞において実質的に減少した（＜ｄｉｖ ｉｄ＝「３ｂ９ ５ｂ１ｅ２ａ１」＞＜／ｄｉｖ＞８ ０％）。 一方、遺伝子型間のＣＰＺ感受性の差は、１ ０ ０μ ＭのＣＰＺ濃度で廃止された（図２Ｆ）。 2G）。 カルバクロールは、WTと3C変異体の両方で大きなカルシウムイオン過渡を誘発したのに対し、AITC応答は、変異細胞で減少した。 まとめると、これらの細胞応答は、CPZの比較的高い効力が三つの重要なシステインに依存することを示している。 しかし、ＣＰＺの濃度が１ ０ ０倍高い場合、他の結合部位がＨＴＲＰＡ１の活性化を引き継ぐ。 この高濃度の親油性CPZは、以前にリポ多糖の脂質A成分について示されているように、細胞脂質膜と相互作用し、間接的にTRPA1を活性化する可能性もあ また、求電子性スカベンジャー n-アセチルシステイン（NAC）の存在下で飽和濃度（15mM）50μ m CPZは、任意の応答を引き出すことができませんでした。 ＮＡＣを除去すると、ＣＰＺは、ＨＴＲＰＡ１形質移入Ｈ Ｅｋ２ ９ ３ｔ細胞において大きなカルシウム一過性を誘発した（図１ ０Ｂ）。 2H)CPZがhtrpa1の求電子アゴニストとして作用することを確認する。
CPZはAITC感受性後根神経節（DRG）ニューロンの亜集団を活性化する
DRGニューロンは、初代培養で維持され、カルシウムマイクロフルオロメトリーによっ 細胞をＣＰＺ（５ ０μ Ｍ、２ ０秒）、続いてＡＩＴＣ（１ ０ ０μ Ｍ、３ ０秒）、カプサイシン（ＣＡＰ、１μ Ｍ、１ ０秒）およびＫｃｌ（６ ０ｍ Ｍ、３ ０秒）によって刺激した。 図3Aは、これらの4つの刺激すべてに応答するDRGニューロンの例を示しています。 DRGニューロンの典型的な画分は、TRPA1の機能的発現を示すAITC（301の906ニューロン、33％、n=8マウス）によって活性化された。 これらのAITC感受性ニューロンの亜集団はまた、CPZ（185の301ニューロン、61％）によって活性化された。 ＣＰＺに対する感受性はＡＩＴＣ応答性ニューロンにほぼ完全に制限されていた。 完全に２ ０ ０個のＣＰＺ感受性ニューロンのうち、１ ８ ５個（９ ３％）もＡＩＴＣによって活性化され、ＣＰＺおよびＡＩＴＣに対する感受性の強い一致を示した（図１ ０Ａ）。 3). ＨＴＲＰＡ１を発現するＨＥＫ２ ９ ３細胞の場合と同様に、ＤＲＧニューロンにおけるＣＰＺによって誘発されるカルシウム一過性は、濃度依存性であり、ＥＣ５ ０値は３ ０μ Ｍ ＣＰＺと推定され、１ ０ ０μ Ｍ ＣＰＺ後の小さなＡＩＴＣ応答は、再び交差脱感作を示唆した（図１ ０Ａ）。 3B、C）。 図3Dは、与えられた濃度でのWT DRGニューロンにおけるCPZ、CAPおよびAITC応答性の重複を示しています：DRGニューロンの14％がAITCに応答したが、CAPに応答しなかった（125/906）、16％がCAPに応答したが、AITCに応答しなかったのに対し、CPZはaitcとCAPの両方に応答したニューロンの78％（137の176）でカルシウム過渡を誘導した。 観察された効果の特異性を実証するために、ＴＲＰＶ１−／−およびＴＲＰＡ１−／−ＤＲＧニューロンを上記のプロトコールに曝露した。 ＡＩＴＣ感受性であったＴＲＰＶ１欠損ＤＲＧニューロンの約９ ０％はまた、ＣＰＺ（５ ０ ９／５ ７ ２細胞）に応答したが、試験した４ ４ ８個のＴＲＰＡ１欠損ＤＲＧニューロンのどれも、ＣＰＺ（１ ０ ０μ Ｍ）に応答してカルシ 3E,F.
カプサゼピン（CPZ）は、後根神経節ニューロンにおけるマウスTRPA1を活性化します。
(A)CPZ(50μ m)AITC(100μ m)感受性マウス後根神経節(DRG)ニューロンの亜集団を活性化します。 CPZによって活性化された三つの異なるAITCとカプサイシン（キャップ、1μ m）感受性DRGニューロンからの個々の応答。 CPZは20秒、30秒のためのAITCおよび10秒のための帽子のために4分の間隔で適用され回復を許可しました。 培養されたニューロンの生存率を確保するために、実験の最後にＫＣｌ（６ ０ｍ Ｍ）を適用した。 （Ｂ）３つの異なる濃度のＣＰＺ（２ ５、５ ０、１ ０ ０μ Ｍ、それぞれ２ ０秒）に対するｎ＝１ ３ ５のＡＩＴＣ感受性ニューロンの平均応答。 Ca2+トランジェントの振幅の濃度依存性に注意してください。 直線トレースは平均を表し、点線トレースはSEMsを表します。 （C）KCl（60mM）と脱分極刺激に正規化されたAITC感受性DRGニューロンにおけるCPZ誘導iの濃度依存的な増加。 ≦３ ０μ ＭのＥＣ５ ０を、用量応答関数に適合させることによって計算した。 データは、２組の実験の代表であり、平均±ＳＥＭを示す；ＣＰＺ１、１ ０、２ ５μ Ｍの場合：ｎ＝１ ６ ９、ＣＰＺ２ ５、５ ０、１ ０ ０μ Ｍの場合：ｎ＝１ ３ ８である。 （Ｄ）ＣＰＺ−、ＡＩＴＣ−およびＣＡＰ−感受性ＤＲＧニューロンの集団およびそれらの重複を説明する。 合計９ ０ ６個の撮像ニューロン（Ｋｃｌに対するそれらの応答によって選択）において、２ ０ ０（２ ２％）がＣＰＺ（５ ０μ Ｍ）によって活性化され、３ ０ １（３ ３％）がＡＩＴＣ（１ ０ ０μ Ｍ）によって活性化され、３ ２ ３（３ ６％）がＣＡＰ（１μ Ｍ） (E)CPZ(100μ m,20s)TRPV1欠損マウスからAITC(100μ m,20s)感受性DRGニューロンを活性化します。 CPZによって活性化された異なるAITC感受性ニューロンからの個々の応答。 AITC感受性であったTRPV1欠損DRGニューロンの約90％（509/572細胞）はCPZに応答していた。 キャップ（1μ m、10s）TRPV1−/−ニューロンにおけるCa2+トランジェントを誘導しなかった。 （Ｆ）ＴＲＰＡ１欠損ＤＲＧニューロンにおけるＣＰＺ（１ ０ ０μ Ｍ）誘導Ｃａ２＋流入の欠如。 CPZもAITC（10μ m）によって活性化されなかった異なるCAP（1μ m）感受性DRGニューロン（テストされた448ニューロンのうち）からの個々の応答。
TRPA1を介した全身脱感作は痛みを減衰させる
CPZが強力なTRPA1アゴニストであることを発見した後、最初のCPZ浣腸（一日二回）がWTマウスで明らかに痛みを伴う理由を理解した。 次に、腹筋壁の統合筋電図（EMG）を介して身もだえ反応をカウントし、内臓運動反射応答（VMRs）を記録することにより、健康な動物（各n=6）におけるCPZ（531μ m）浣腸誘発nocifensive行動を定量化した（図。 4A、B）。 毎日二回CPZ治療を繰り返す過程で、我々はTRPA1ノックアウトはいつでも痛みに関連した行動を示さなかったことに注意しました。 さらに、WTマウスは、両方のnocifensiveパラメータで最終的に完全な脱感作につながった3日目の周りに急激な減少と最初に強い痛み応答の進行性の減少を提 そうでなければ正常なマウスにおける結腸痛知覚のこの損失は、浣腸がCPZに全身性痛覚低下を誘導するのに十分な薬力学的量を送達したかもしれな この仮説を試験するために、本発明者らは、ＡＩＴＣ（１ ０ ０μ Ｍ）およびＣＡＰ（１ｍｍ）を用いた眼拭き試験を用いた（図１）。 4C,D)(n=6)。 両方のテストはCPZの浣腸と扱われたWTのマウスの目ワイプの計算の明瞭な減少を示しました（テストの前の12-16hまで）。 なぜなら、ＴＲＰＶ１欠損マウスは、ｗｔマウスと同程度に眼へのマスタード油（ＡＩＴＣ、１ ０ ０μ Ｍ）の点眼に鈍感であったからである（図１）。 4C）。 逆に、ＣＰＺ浣腸は、これらのマウスが眼へのＣＡＰ点眼によって刺激されたとき、ＴＲＰＡ１−／−マウスでは効果がなかった（図１ ０Ｂ）。 4D）。
カプサゼピン浣腸は、局所および遠隔の痛みの応答を脱感作します。
(A)適用後の最初の5分間のCPZ(531μ m)浣腸に応答した急性の身もだえ反応。 繰り返しＣＰＺ浣腸（一日二回）は身もだえ応答の漸進的な減少につながった。 劇的なステップ減少は、WTマウスで5浣腸後に観察された。 対照的に、TRPA1−/−CPZ（531μ m）で処理したマウスまたはビヒクル（PBS）浣腸で処理したWTマウスは、最初の30秒以内に発生したわずかな身もだえを示した（各n=6）。 （Ｂ）ＣＰＺ浣腸に対する内臓運動応答（Ｖｍｒｓ）。 ＣＰＺ浣腸は一日二回，ｗｔマウスにおけるＶｍｒｓの連続的な減少をもたらした。 車両に応答してVMRsはTRPA1−/−（両方のn=6）のCPZ浣腸にそれらと有意に異ならなかった。 （Ａ、Ｂ）ｗｔｃｐｚ基をビヒクル基と比較した。 （C）反復CPZ浣腸は、AITC（100μ m）に目拭き動作を減衰させる。 WTとTRPV1−/-cpz浣腸で処理されたマウスの両方がビヒクル（両方のn=6）と比較して目拭きカウントの深遠な減少を示した。 対照は、眼内へのビヒクル（ＰＢＳ）滴を受容する浣腸を伴わないＷ Ｔマウスであった。 （D）CPZの浣腸は帽子（1つのmM）に目ワイプの行動を減弱させます。 ビヒクルおよびTRPA1−/−で処理されたWTマウスは、7dのために毎日二回CPZ浣腸で処理されたマウスは、最後のCPZ浣腸の後に12時間をテストし、目にキャップ点 ＣＰＺ浣腸で処理したＷＴマウスは，眼拭き数の大幅な減少を示した。 （E）飲料水を介した経口CPZ（531μ m）またはAITC（500μ m）投薬の過程における両方の後肢の熱的および（F）機械的離脱閾値。 （Ｅ）ビヒクル処理群と比較して１ ０ｄを超えるＣＰＺおよびＡＩＴＣは、放射熱刺激に対する離脱潜時において３〜５ｄの間に漸進的な増加を誘発し、これは、ウォッシュアウ （F）電気力学的フォンFreyフィラメントによる刺激に対する機械的閾値は、両方の化合物（それぞれのn=6）の下で体系的な傾向を示さなかった。 (C,D)Mann Whitney U検定を除いて、すべての反復測定ANOVAおよびDunnettの事後検定。繰り返し浣腸は不快な投与経路であるため、飲料水中の経口CPZ（531μ m）の可能性のある抗侵害受容効果を試験した。 10日にわたる飲む養生法は起こる明らかな悪影響とよく容認されませんでした。 連続経口CPZ投与の過程で、放射熱刺激に対する足離脱潜時（Hargreaves法）は、両後足で徐々に増加した（図。 4E）。 許容時間は7日目に約倍増し、2日目から10日目に有意に上昇したままであった。 純粋な飲料水での回復の2週間後、撤退潜時はベースラインレベルに戻っていた。 電気力学的なｖｏｎｆｒｅｙフィラメントの直線的に増加する力による刺激に対する機械的応答性は、ＣＰＺ飲酒の十日間に有意に影響されなかった（図。 4階）。 問題は、熱および化学的痛覚低下がTRPA1アゴニストの脱感作のクラス効果を表すかどうか、またはそれがCPZに特異的であったかどうかを生じた。 従って、本発明者らは、飲料水を介して、同様で十分に許容される濃度（５ ０ ０μ Ｍ）でＡＩＴＣを投与した。 ＣＰＺについて記載されたのと同じａｉｔｃの用量レジメンは、ＣＰＺによって誘導されるものよりも有意に小さかった放射熱刺激に対する足離脱潜時の漸進的な増加をもたらした（図１）。 4E）。 機械的応答性は、ＡＩＴＣ飲用レジメンでは変化しなかった（図１）。 4階）。
CPZは、ペプチド感覚ニューロンを発現するTRPA1/TRPV1の持続的な脱感作を引き起こします
我々は、CPZによる動物全体の脱感作が細胞レベルで再現 この目的のために、我々は、対照マウスから得られた単離されたDRGニューロンとCPZ浣腸で一日二回7日間処理された動物からカルシウムイメージング実験を行 これらのニューロンは、必然的にNGFの存在下で、16-24時間培養中に保持された。 コントロールマウスから399ニューロンと浣腸処理マウスから584ニューロンの合計Fura-2をロードし、aitc、carvacrol、キャップとKClリッチ溶液によって誘発されたカルシウムトランジェントが記録されました。 これらのＴＲＰＡ１（ＡＩＴＣおよびｃａｒｖａｃｒｏｌ）およびＴＲＰＶ１（ＣＡＰ）アゴニストに対する応答は、対照動物および浣腸処置動物由来のＤＲＧニューロンにおいて有意に異ならなかった（図 S1）。 しかし、ＴＲＰＡ１ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ）は、最終ＣＰＺ注腸直後に調製された腰仙ＤＲＧにおいて約２倍上方制御された（図１ ０Ａ）。 S2）TRPA1発現の変化は、最終的な浣腸後にin vivoで24時間が経過したときに検出されなかったのに対し。 TRPV1mRNAは、両方の状況下で変更されませんでした。 したがって、TRPA1遺伝子発現の転写アップレギュレーションは、複数のCPZ浣腸のために行われていたが、CPZ供給が中止されたときに急速に逆転した。 ＤＲＧ培養条件下では，同じエピジェネティックな逆転が起こった可能性が高く，残留ＣＰＺはすべて洗い流されたため，残留脱感作は実際には期待できなかった。 細胞モデルは、IN vivoでの動物全体の長持ちCPZ誘導脱感作を反映していなかったので、我々は驚くべき全身効果の別の強力な指標を探しました。 侵害受容ニューロンの大部分は、主にカルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）と物質P（SP）15,17を発現する、ペプチド性である。 Kclおよびカルシウム流入によるように、電圧ゲートカルシウムチャネルの活性化による脱分極時に、これらの神経ペプチドは、準遠心機能（神経原性炎症） 一方、活性化TRPチャネルは、それ自体で非常に良好なカルシウム導体であり、CGRP18の小胞エキソサイトーシスを呼び起こすために、任意の電圧ゲートナトリウ したがって、CGRPの刺激放出は、（ペプチド性）侵害受容体活性化の指標として役立ち得る。 同じトークンによってvasoactive neuropeptidesは発火プロセス自体に対するさまざまな効果をもたらし、peptidergic感覚的なニューロンの人口の枯渇か減感作はcolitis19、20、21を減弱させるために示されています。 CPZ(531μ m)浣腸TRPA1を介して脱感作するかどうかを決定するには、ローカルおよび全身、単離されたマウス結腸と皮膚の準備を採用しました。 健康なＣ５ ７ＢＬ／６マウス（ｎ＝８）の結腸を、大量のＣＧＲＰ放出を誘導したＣＰＺ（１ ０ ０μ Ｍ）に曝露した（図１ ０Ａ）。 ＣＰＺの５分後または１ ５分後のＡＩＴＣ（１ ０ ０μ Ｍ）のその後の適用（図５）。 5A、B）はもはやCGRP放出を誘導することができず、TRPA1アゴニストに対する深遠な急性の機能的交差脱感作を示唆している。 この効果は、その後のKCl（60mM）応答が正常であったため、枯渇によるものではありません。 繰り返しCPZ（531μ m）浣腸in vivoで治療されていたマウスからのコロンは、7dのために一日二回単離され、最後の浣腸の後に12-16時間をテストしました。 ＣＰＺ（１ ０ ０μ Ｍ）もＡＩＴＣ（１ ０ ０μ Ｍ）も、この状態でＣＧＲＰ放出を誘導しなかった（図１）。 特に、ＣＡＰ（３ ０ｎＭ）誘導ＣＧＲＰ放出は、強く減少したが、廃止されなかった（図５Ｃ、Ｄ）。 5E）。 対照的に、非特異的脱分極によるKCl（60ミリメートル）誘導CGRPリリースは、unreducedが、実際にCPZ浣腸後に強化されただけではなかった。 これは、結腸神経線維がCGRPの枯渇ではなく、むしろ過剰充填された、まだ本質的にTRPA1だけでなく、TRPV1（n=6）を介して化学的活性化に持続的な方法で脱感作 最後に、最後のCPZ浣腸の12〜16時間後に単離された皮膚調製物も、行動試験で観察された全身脱感作に従って、AITC（100μ M）およびCAP（1μ M）誘発CGRP放出が強く減少 図5f、G、図5f、図5fを参照してください。 （Ｎ＝６）。
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）の放出の変化によって示されるカプサゼピン（CPZ）によるペプチド性感覚神経の局所および全身脱感作。
(A)CPZによって誘導されたWTマウスの単離された結腸調製物からの急性CGRP放出(100μ m);その後のマスタード油(AITC,100μ m)曝露はCgrp放出を誘導することができな データは平均＋Ｓｅｍｓ（ｎ＝８）である。 （B–D）CPZ（100μ m）-とAITC（100μ m）誘導結腸cgrpリリースは、CAP（1μ m）誘導結腸cgrpリリースが強く減少したが、コントロールと比較して、これらのマウスでは廃止されなかったのに対し、7dのために一日二回CPZ浣腸で前処理したマウスで廃止された。 (**P<0.01,***P<0.001,Mann Whitney U-test,each n=6)。 （E）同様に、AITC（100μ m）誘導CGRP放出は、CPZ浣腸で前処理マウスの後肢から単離された皮膚製剤で廃止されました。 （Ｆ）対照的に、ＣＡＰ（１μ Ｍ）誘導ＣＧＲＰ放出は、対照と比較して、これらのマウスの皮膚から強く減少した。 (**P<0.01,***P<0.001,Mann Whitney U-test,each n=6)。 すべてのKCl（60ミリメートル）応答が不完全に脱感作キャップ刺激のKCl応答に対し、脱感作cpzとAITC応答以下の正常な（B、C、E）であったことに注意してください、ニュー
