Discussione
Nel presente studio, abbiamo cercato di valutare se il CD dei topi potesse portare un tasso di fallimento che si traduceva in una preoccupazione per il benessere degli animali. Abbiamo usato il tempo per l’arresto respiratorio come nostro marcatore surrogato per il criterio AVMA di ” tempo necessario per indurre la perdita di coscienza.”1 Abbiamo riconosciuto che la separazione pulita della colonna vertebrale cervicale alta sopra C2 potrebbe indurre l’arresto respiratorio senza incoscienza, ma il trauma grossolano dei vari metodi CD sembrava improbabile che si traducesse in questo risultato.
Impostiamo il tempo di arresto respiratorio pari a 0 s come limite per definire l’eutanasia di successo. Crediamo che qualsiasi metodo di eutanasia dopo il quale i topi potrebbero continuare a respirare (indipendentemente da quanto tempo) richieda cautela. Se eseguita su topi non anestetizzati, l’eutanasia incompleta lascia un topo potenzialmente cosciente che subisce una grave lesione traumatica fino a quando un operatore non può ripetere la procedura o passare a un altro metodo di eutanasia. La completa rottura midthoracic del SNC può lasciare l’analgesico del corpo caudale, ma il tessuto danneggiato circostante e cranico alla lesione potrebbe ancora essere doloroso.17,25 Gli animali che hanno sufficiente innervazione motoria per continuare la respirazione probabilmente avrebbero sufficiente innervazione afferente per il dolore.
Nel nostro lavoro pilota, alcuni topi hanno continuato a respirare per 15 minuti prima di eutanasia con pentobarbital di sodio; questi topi probabilmente avrebbero potuto continuare a respirare anche più a lungo. Se fossero stati rimossi dall’anestesia e avessero ripreso conoscenza, con lesioni spinali multiple, la loro sofferenza avrebbe potuto essere grave. Anche in aggiunta agli agenti di eutanasia inalanti o iniettabili, se un topo si riprendesse (possibilmente all’interno di un congelatore di carcassa) da una tecnica di dislocazione mal eseguita, il potenziale di dolore o angoscia sarebbe aggravato. È essenziale che qualsiasi metodo di CD soddisfi il requisito che essenzialmente il 100% degli animali cessa definitivamente di respirare immediatamente.
Il nostro 21% percentuale non riuscita per i metodi CD, in base al tempo di arresto respiratorio, era simile alla percentuale non riuscita nei rapporti di topi sottoposti a CD ma privi di lesioni spinali cervicali radiograficamente evidenti.7,14 Gli autori di quegli studi precedenti7, 14 non dettagliano i loro metodi radiografici. Poiché non sono stati riportati eventi di eutanasia infruttuosa, 7, 14 gli autori potrebbero aver letto male topi che avevano lesioni cervicali e toraciche ma distrazione insufficiente durante la radiografia come solo lesioni toraciche.
Alla luce dei risultati precedenti,7,14 abbiamo postulato che una tensione sufficientemente forte applicata ovunque lungo il midollo spinale potrebbe indurre incoscienza e arresto respiratorio, anche quando il trauma scheletrico era caudale alla regione cervicale alta raccomandata. Il nostro tasso di insuccesso al 100% per il gruppo di dislocazione toracica non supporta questa ipotesi. Abbiamo usato la dislocazione toracica in topi anestetizzati per modellare la tecnica errata che un operatore mal addestrato potrebbe eseguire, e abbiamo verificato che la tecnica corretta è necessaria per l’eutanasia di successo dei topi.
Le linee guida AVMA hanno trattato il CD in generale, senza una descrizione specifica della procedura, riflettendo una carenza di valutazioni comparative di diverse tecniche di CD. Varie pubblicazioni descrivono tecniche assortite per eseguire la dislocazione cervicale.8,13,14,16,22 Altri, inclusi i rapporti del pannello AVMA, non distinguono tra le varie tecniche CD.3,10,12,24 Oltre ai 3 metodi che abbiamo scelto, gli autori hanno specificato che l’MCD deve essere eseguito tirando su con un angolo di 30°, nella speranza che il processo odontoide della vertebra C2 danneggi il midollo spinale e quindi aumenti l’efficacia della tecnica.7 È improbabile che la frattura di questo piccolo processo osseo in un topo sia visibile radiograficamente. Inoltre, alcuni operatori descrivono tirando fino a quando il cranio si sente di essere completamente distaccato alla colonna vertebrale, e questo è il metodo che insegniamo al nostro istituto. Questa pratica è ragionevole quando il CD viene utilizzato dopo altre tecniche di eutanasia (ad esempio, sovradosaggio anestetico), ma questa procedura più lunga e più lenta può causare dolore aggiuntivo in un animale non ancora incosciente.
La radiografia postmortem potrebbe svolgere un ruolo nel valutare il successo dell’eutanasia dopo l’evento, ma questa tecnica è laboriosa e deve essere interpretata con cautela. Eravamo preoccupati che, senza sufficiente distrazione, i legamenti intatti potessero tenere il cranio abbastanza vicino alla colonna vertebrale da mascherare la lussazione riuscita in alcuni casi. Abbiamo trovato le radiografie post mortem più facili da interpretare quando la tensione è stata applicata per allungare la carcassa, ma così facendo ha creato un divario sospetto tra i corpi vertebrali C2 e C3 che ha richiesto un’attenta valutazione. I controlli negativi di sola CO2 (Figura 2) sono stati utili per distinguere le lesioni dalla norma. Quando abbiamo impostato il tempo per l’arresto respiratorio come nostro “gold standard”, la radiografia cervicale ha portato un valore predittivo positivo di solo il 71%. Pertanto, quando la radiografia viene utilizzata come strumento di controllo della qualità o di valutazione delle competenze, alcuni casi di eutanasia non riuscita verranno persi.
Mentre tutte le eutanasie infruttuose avevano lesioni toraciche o lombari (o entrambe), così hanno fatto 50 delle 64 eutanasie riuscite. Concludiamo che la presenza di lesioni toraciche o lombari non è diagnostica di scarsa tecnica. Inoltre, nessuno degli 11 animali CD che sono andati all’endpoint 180-s aveva lesioni cervicali osservabili. Al contrario, 63 dei 64 casi di CD riusciti lo hanno fatto, e il topo che mancava di una lesione cervicale osservabile (Figura 3) potrebbe riflettere una diagnosi errata di una lesione sottile o servire come prova che un trauma distale del midollo spinale sufficientemente grave può causare l’arresto respiratorio; infatti, 2 topi nel gruppo di dislocazione toracica hanno infine raggiunto l’arresto respiratorio prima che potesse essere applicata un’altra tecnica. Inoltre, 6 topi CD sono stati sottoposti a eutanasia senza successo ma sono morti prima dell’endpoint 180-s, anche se la radiografia ha rivelato lesioni cervicali in 5 di questi topi. È possibile una diagnosi errata radiografica, così come la possibilità che le lesioni intermedie, sebbene radiograficamente evidenti, possano in definitiva essere fatali ma siano troppo prolungate per qualificare l’esito come un ‘buona morte.’
Riconosciamo alcune limitazioni al nostro studio. Non abbiamo eseguito tutte le variazioni descritte o possibili di CD nei topi. Non abbiamo fatto alcun tentativo di usare onde cerebrali o altre misurazioni per analizzare la funzione cerebrale intatta dopo la dislocazione. Non abbiamo rimosso gli animali respiratori dalla maschera di anestesia per valutare il potenziale per il ritorno alla coscienza. La presenza di un tempo di arresto respiratorio superiore a 0 s suggerisce almeno una minima funzione cerebrale intatta, uno stato che sembra incoerente con una “buona morte”; non presentiamo dati sulla qualità della morte quando il tempo di arresto respiratorio è 0 s.
L’effetto operatore che abbiamo notato richiede ulteriori esplorazioni. Con solo 2 operatori, l’effetto non può essere attribuito a differenze nell’età dell’operatore, nell’allenamento, nella forza o in qualsiasi altro fattore. Molto probabilmente, altri operatori differirebbero nei loro tassi di successo. Lo studio di follow-up per esaminare più approfonditamente l’effetto dell’operatore deve tenere conto della conoscenza dei vari operatori che venivano valutati e dell’effetto che questa conoscenza potrebbe avere sulle loro prestazioni. Il fatto che l’operatore di maggior successo non abbia ancora avuto successo nell ‘ 8,1% dei casi desta preoccupazione.
Inoltre, la diagnosi radiografica potrebbe essere soggetta ad un effetto interprete. Senza un “gold standard” per una corretta diagnosi radiografica (ad esempio, l’assenza di una lesione visibile in un’eutanasia di successo potrebbe significare che la frattura spinale o la lussazione in quel sito non sono necessarie per una morte rapida, o che il radiografo ha mancato la lesione), non potremmo esplorare la possibilità di un effetto interprete. Il lavoro pilota con radiografie a pellicola semplice ha rivelato un modesto disaccordo nella diagnosi tra diversi veterinari che hanno letto le radiografie.
Infine, tutti i topi sono stati dislocati in anestesia isoflurano per ragioni umane, perché sapevamo che avremmo tenuto vivi e respirati casi infruttuosi per diversi minuti piuttosto che ripetere immediatamente la procedura. Poiché l’anestetico ha abolito il tono muscolare, questo metodo può modellare il CD postmortem meglio di quanto modelli il CD come unico metodo di eutanasia. Poiché è un depressivo respiratorio, l’isoflurano può avere accelerato l’arresto respiratorio in alcuni casi intermedi. Come agente neuroprotettivo, l’isoflurano può aver ritardato la morte. In entrambi i casi, l’uso di isoflurano ci ha impedito di valutare la coscienza potenziale nei casi infruttuosi che respirano ancora, perché non li abbiamo mai svezzati dall’anestetico per fare quella valutazione.
Concludiamo che 3 metodi di CD possono provocare eutanasia infruttuosa in cui i topi continuano a respirare dopo la tentata dislocazione. Non possiamo affermare se la coscienza o la percezione del dolore accompagnano questo risultato. La pratica su topi anestetizzati potrebbe essere un metodo di allenamento utile, con il tempo di arresto respiratorio impostato come misura del successo del tirocinante. La radiografia è uno strumento di valutazione delle competenze ad alta intensità di lavoro che sembra non essere più informativo dell’osservazione della pratica su topi anestetizzati. Se ulteriori studi replicano i nostri risultati, le pratiche raccomandate dovranno cambiare, se non consentire CD di topi non anestetizzati, identificare un metodo CD con un tasso di successo più elevato, o sottolineare che i topi devono essere osservati attentamente dopo CD, e se ancora respirare (che può essere difficile da accertare data la scarica del motore che spesso segue CD), immediatamente trattati attraverso lo stesso o un metodo alternativo di eutanasia.
