Background & obiettivi: La celiachia potrebbe essere trattata, e potenzialmente curata, ripristinando la tolleranza delle cellule T alla gliadina. Abbiamo studiato la sicurezza e l’efficacia di nanoparticelle di poli(lattide-co-glicolide) a carica negativa a 500 nm che incapsulano la proteina gliadina (TIMP-GLIA) in 3 modelli murini di celiachia. L’assorbimento di queste nanoparticelle da parte delle cellule che presentano l’antigene ha dimostrato di indurre tolleranza immunitaria in altri modelli animali di malattia autoimmune.
Metodi: Abbiamo eseguito studi con C57BL/ 6; RAG1 -/ – (C57BL / 6); e HLA-DQ8, topi transgenici huCD4 Ab0 NOD. Ai topi sono state somministrate 1 o 2 iniezioni di TIMP-GLIA o nanoparticelle di controllo. Ad alcuni topi sono state somministrate iniezioni intradermiche di gliadina in adiuvante completo di Freund (immunizzazione) o di gliadina solubile o ovalbumina (ear challenge). Ai topi RAG-/- sono state somministrate iniezioni intraperitoneali di cellule T CD4+CD62L-CD44hi da topi C57BL/6 immunizzati con gliadina e sono stati nutriti con una dieta a base di AIN-76A contenente glutine di frumento (sfida orale) o senza glutine. Le cellule della milza o del linfonodo sono state analizzate in saggi di proliferazione e secrezione di citochine o mediante citometria a flusso, sequenziamento dell’RNA o reazione a catena quantitativa in tempo reale della polimerasi. I campioni di siero sono stati analizzati mediante saggio immunoassorbente legato agli anticorpi della gliadina e i tessuti intestinali sono stati analizzati mediante istologia. Le cellule mononucleate del sangue periferico umano, o cellule dendritiche immature derivate da cellule mononucleate del sangue periferico umano, sono state coltivate in mezzo contenente TIMP-GLIA, anticorpo anti-CD3 o lipopolisaccaride (controlli) e analizzate in saggi di proliferazione e secrezione di citochine o mediante citometria a flusso. Sangue intero o plasma di volontari sani è stato incubato con TIMP-GLIA e sono stati analizzati emolisi, attivazione e aggregazione piastrinica e attivazione o coagulazione del complemento.
Risultati: TIMP-GLIA non ha aumentato i marcatori di maturazione su cellule dendritiche umane coltivate o indotto l’attivazione di cellule T da pazienti con celiachia attiva o trattata. L’ipersensibilità di tipo ritardato (modello 1), HLA-DQ8 transgenici (modello 2), e la gliadina delle cellule T memoria enteropatia (modello 3) i modelli di malattia celiaca, iniezioni endovenose di TIMP-GLIA è diminuito significativamente la gliadina specifici per la proliferazione delle cellule T (nei modelli 1 e 2), la secrezione di citochine infiammatorie (modelli 1, 2 e 3), circolanti gliadina IgG specifiche/IgG2c (nei modelli 1 e 2), orecchio gonfiore (modello 1), glutine-dipendente enteropatia (modello 3), e perdita di peso del corpo (modello 3). Nel modello 1, gli effetti sono risultati dose-dipendenti. Gli splenociti di topi transgenici HLA-DQ8 sottoposti a nanoparticelle TIMP-GLIA, ma non a nanoparticelle di controllo, hanno aumentato i livelli di FOXP3 e le firme di espressione genica associate all’induzione della tolleranza.
Conclusioni: Nei topi con sensibilità alla gliadina, l’iniezione di nanoparticelle TIMP-GLIA ha indotto mancanza di risposta alla gliadina e ridotto i marcatori di infiammazione e enteropatia. Questa strategia potrebbe essere sviluppata per il trattamento della celiachia.
