Poiché le immunoterapie diventano sempre più importanti nel trattamento di vari tumori, anche il monitoraggio della risposta immunitaria per riflettere l’efficacia della terapia diventa sempre più importante. In precedenza, le risposte umorali antigene-specifiche del tumore in pazienti che ricevevano vaccini per linfoma follicolare di basso grado (FL) erano correlate agli esiti clinici, tra cui regressione tumorale, remissione molecolare, sopravvivenza libera da progressione (PFS) e sopravvivenza globale (OS). Al contrario, le risposte immunitarie delle cellule T sono state difficili da convalidare. I saggi di proliferazione delle cellule T, principalmente, misurano le risposte delle cellule T CD4; mentre le cellule T CD8 possono essere gli effettori importanti generati dalle immunoterapie. Tuttavia, saggi progettati per misurare le cellule T CD8, vale a dire i test CTL a rilascio di cromo e i test ELISPOT IFN-γ e citometria a flusso intracellulare sono difficili da rendere riproducibili. Per affrontare questo problema, i PBL sono stati ottenuti da pazienti FL, crioconservati e scongelati, quindi utilizzati per progettare un metodo standardizzato per il rilevamento di IFN-γ intracellulare mediante citometria a flusso. Lo stimolo combinato di anticorpi anti-CD3 e anti-CD28 solubili fornisce una stimolazione robusta, tipicamente circa il 5% delle normali cellule T PBL CD8+ rispondono. Utilizzando un pannello di linee cellulari irradiate di linfoma a cellule B come stimolatori, abbiamo dimostrato che, in media, 1 – 2% di queste cellule T erano in grado di montare una risposta in questo test. Sorprendentemente, le cellule T CD8+ PBL di diversi pazienti con FL sono state più reattive alla stimolazione combinata anti-CD3 e anti-CD28 e allo allo-stimolazione, rispettivamente 15 – 22% e 2 – 6%. Questa risposta è stata accompagnata dall’espressione superficiale di CD107, un marker surrogato per la degranulazione CTL, nella stessa popolazione di cellule dimostrata dalla citometria a flusso multicolore. Sia la risposta IFN-γ che quella CD107 sono state inibite da un anticorpo anti-classe I, W6/32, suggerendo una risposta mediata dal recettore delle cellule T ristretta di classe I. Inoltre, in momenti successivi, queste cellule T hanno anche regolato CD137 sulla loro superficie. Questa molecola di attivazione è upregulated sulle cellule T CD8 in risposta al riconoscimento specifico dell’antigene e fornisce un segnale anti-apoptotico alle cellule. In conclusione, la competenza immunitaria delle cellule T CD8 isolate dai pazienti FL può essere valutata attraverso allo-stimolazione da un pannello di linee cellulari di linfoma a cellule B. Ancora più importante, la correlazione mediante citometria a flusso di 3 indicatori indipendenti di risposta (IFN-γ, CD107 e CD137) all’interno di singole popolazioni di cellule sia allo-stimolazione che al bersaglio specifico, può portare a una migliore comprensione del ruolo delle cellule T nella risposta immunitaria. In definitiva, queste risposte dovranno essere convalidate con i risultati dei pazienti negli studi clinici sui vaccini nel linfoma.