Clonazione di cDNA

La trascrizione inversa di RNA a DNA complementare (cDNA) è il primo passo in molti flussi di lavoro di biologia molecolare, inclusi studi di espressione genica che utilizzano PCR in tempo reale, clonazione genica e nella creazione di librerie di cDNA.

Una libreria cDNA è una raccolta di sequenze di DNA clonato che sono complementari al mRNA che è stato estratto da una data cellula o tessuto. La biblioteca rappresenta solo le sequenze trascritte all’interno di un campione specifico e può fornire una ricchezza di informazioni sull’identità e la funzionalità di geni specifici. Le librerie di cDNA forniscono anche informazioni sull’abbondanza di RNA prodotto in un campione perché più un mRNA viene espresso, più cDNA verrà prodotto.

Quando si costruiscono librerie di cDNA è essenziale che i cloni di cDNA siano rappresentativi della popolazione di RNA originale, sia in termini di lunghezza totale che di abbondanza relativa. Ciò significa che la scelta della trascrittasi inversa utilizzata in questo passaggio è di importanza critica. Durante la clonazione di CDNA e la creazione di librerie cDNA consigliamo la nostra gamma di prodotti UltraScript e UltraScript 2.0. Questi enzimi altamente attivi e termostabili sono in grado di sintetizzare più prodotto cDNA a lunghezza intera, anche con quantità limitate di RNA, RNA espresso in bassi livelli o contenente un alto grado di struttura secondaria.