Durante il loro in vivo invecchiamento, globuli rossi (RBC) aumento di densità e diventano sempre più piccoli. Le sottopopolazioni RBC definite per età vengono solitamente raccolte mediante centrifugazione. Un frazionamento secondo il volume RBC è stato proposto come alternativa migliorata a tale separazione di età. Poiché alcuni dati riportati in letteratura indicano alcune discrepanze tra i due metodi, i campioni di sangue sono stati separati per centrifugazione o per centrifugazione a controcorrente e sono state studiate alcune caratteristiche dell’RBC così frazionato. Le attività enzimatiche diminuiscono quando la densità aumenta o quando il volume (MCV) diminuisce. Tuttavia, il confronto di altre caratteristiche RBC suggerisce fortemente che queste due procedure non portano alla raccolta delle stesse sottopopolazioni RBC: per esempio, il contenuto di emoglobina aumenta quando il MCV aumenta, mentre rimane costante qualunque sia la densità RBC è. Con radiomarcata cellule, si è dimostrato 1) che il più denso di RBC sono recuperati in tutte le dimensioni, separati da RBC sottopopolazioni, anche se essi tendono a concentrarsi nelle frazioni con la più grande MCV, e 2) che il più piccolo RBC sono quasi equamente distribuiti in tutte le RBC sottopopolazioni, qualunque sia la loro densità, mentre il più grande RBC sono principalmente, ma non esclusivamente, presenti nelle frazioni ad alta densità. Pertanto, il frazionamento in base alle dimensioni non corrisponde alla separazione in base alla densità. Presi insieme ai risultati di esperimenti in vivo condotti su topi e al fatto che i reticolociti sono presenti in tutte le frazioni separate dalle dimensioni, questi dati suggeriscono che la centrifugazione a controcorrente può essere una procedura molto discutibile per ottenere un frazionamento RBC in base all’età e quindi che il volume RBC potrebbe non essere un criterio affidabile dell’età RBC.