szöveg

számos emberi rák érzékeny a mitotikus stresszre, ami ellenőrző pont hibákra utal. Sok olyan fehérje, amely villafej-asszociált (FHA) doméneket tartalmaz, sejtciklus-ellenőrző pontok. Az új mitotikus checkpoint gének izolálásához Scolnick és Halazonetis (2000) Egy EST adatbázisban FHA doméneket tartalmazó cDNS-eket keresett. Azonosítottak egy cDNS-t, amelyet chfr-nek neveztek a ‘checkpoint with forkhead and ring finger domains’ – nek, amely egy 664 aminosavból álló fehérjét kódol, FHA és gyűrűsujj doménekkel az N terminálisán belül. C terminálisán belül a CHFR ciszteinben gazdag régiót tartalmaz, amely nem mutatott szignifikáns hasonlóságot a GenBank adatbázisában szereplő egyetlen fehérjével sem, de erősen konzervált az emberek és az egerek között. Northern blot elemzéssel, a CHFR expresszió mindenütt jelen van a normál emberi szövetekben; azonban, 3 nak, – nek 8 a vizsgált emberi rákos sejtvonalak nem tartalmaztak CHFR mRNS-t. Ugyanezek a sejtvonalak nem expresszáltak CHFR fehérjét, amelyet immunoblot assay határoz meg. Scolnick és Halazonetis (2000) kimutatta, hogy a CHFR gén inaktiválódott hiánya miatt expresszió vagy mutáció 4 8 emberi rákos sejtvonalak vizsgált. A wildtype CHFR-t expresszáló normál primer sejtek és tumorsejtek késleltetett belépést mutattak a metafázisba, amikor a centroszóma elválasztását a mitotikus stressz gátolta. Ezzel szemben a chfr funkciót elvesztett tumorsejtvonalak késedelem nélkül beléptek a metafázisba. A wildtype chfr ektopiás expressziója helyreállította a sejtciklus késleltetését és növelte a sejtek azon képességét, hogy túléljék a mitotikus stresszt. Így Scolnick és Halazonetis (2000) arra a következtetésre jutott, hogy a CHFR egy olyan ellenőrző pontot határoz meg, amely késlelteti a metafázisba való belépést a mitotikus stressz hatására.

Toyota et al. (2003) elemezte a CHFR expressziójának mintázatát számos humán rákos sejtvonalban és primer tumorban. A Chfr expresszió CpG metiláció-függő elnémítását találták a rákos sejtvonalak 45% – ában, az elsődleges vastagbélrák 40% – ában, a vastagbél adenomák 53% – ában és az elsődleges fej-és nyakrák 30% – ában. A CHFR expressziója pontosan Korrelált mind a CpG metilezésével, mind a H3 és H4 hisztonok dezacetilezésével a CpG-ben gazdag szabályozási régióban. A CHFR metilációval rendelkező sejtek önmagukban magas mitotikus indexet mutattak, amikor mikrotubulus inhibitorral kezelték őket. Ez azt jelenti, hogy azok a sejtek, amelyekben a CHFR epigenetikusan inaktiválódott, funkcióvesztéses allélokat képeztek a mitotikus ellenőrzőpont ellenőrzéséhez. Összességében ezek az eredmények rávilágítanak arra az útvonalra, amelyen keresztül a mitotikus ellenőrző pontot megkerülik a rákos sejtekben, és arra utalnak, hogy az ellenőrző pontok génjeinek inaktiválása sokkal szélesebb körben elterjedt, mint azt korábban feltételezték.

Ahel et al. (2008) azonosított egy új poli(ADP-ribóz) kötő cinkujj (PBZ) motívumot számos eukarióta fehérjében, amelyek részt vesznek a DNS-károsodás válaszában és az ellenőrzőpont szabályozásában. A PBZ motívum a poszttranszlációs poli(ADP-ribozil)ationhoz is szükséges. Ahel et al. (2008) kimutatta a poli(ADP-ribóz) kölcsönhatását ezzel a motívummal 2 reprezentatív humán proteinben, az APLF (611035) és a CHFR-ben, és kimutatta, hogy a CHFR hatását az antefázis ellenőrzőpontban a PBZ mutációi vagy a poli(ADP-ribóz) szintézis gátlása megszünteti.

a mitotikus checkpoint fehérje expressziója a primer tumorok és tumorsejtek 20-50% – ában elvész. Annak feltárása, hogy a CHFR csökkentése közvetlenül hozzájárul-e a tumorigenesishez, Yu et al. (2005) generált Chfr knockout egerek. A Chfr-hiányos egerekről kiderült, hogy rákosak, spontán tumorok alakulnak ki, és a dimetilbenz(alfa)antracén kezelés után megnövekedett a bőrdaganatok előfordulása. A Chfr-hiány kromoszóma instabilitáshoz vezetett az embrionális fibroblasztokban, és szabályozta az aurora a (603072) mitotikus kinázt, amelyet gyakran különféle daganatokban szabályoznak. A Chfr fizikailag kölcsönhatásba lépett az aurora A-val és ubiquitinált aurora A-val mind in vitro, mind in vivo. Yu et al. (2005) arra a következtetésre jutott, hogy a CHFR tumorszuppresszor, és biztosítja a kromoszóma stabilitását a kulcsfontosságú mitotikus fehérjék, például az aurora a expressziós szintjének szabályozásával.