a Coxsackievirus B3 (CVB3) egy enterovírus a Picornaviridae családban. A coxsackievirushoz és az adenovírus receptorhoz (6, 64) való kötődést követően a vírus RNS belép a citoplazmába, ahol a gazdaszervezet transzlációs gépezete egyetlen poliproteinné alakítja át. A poliproteint ezután proteolitikusan feldolgozzák a vírus proteázok, hogy előállítsák az összes vírus szerkezeti és nem szerkezeti fehérjét. A vírus által kódolt RNS-függő RNS-polimeráz átírja a negatív szálú vírusos RNS-eket, amelyek sablonként szolgálnak több utódgenom szintéziséhez. A víruscsomagolást követően a vírus felszabadul, potenciálisan a vírus által kódolt 2B fehérje (67) hatása alatt. A replikációs folyamat és a vírus utódok felszabadulása során a citopátiás hatás (CPE) bekövetkezik, és a gazdasejt megsérül, az életképesség esetleges elvesztésével.

Több gazdasejtes folyamat megváltozik a pikornavírus parazitizációja során. A 2apro vírusfehérje közvetlenül hasítja az eukarióta iniciációs faktor 4 gammát (eIF4G). Ennek a transzlációs iniciációs tényezőnek a hasítása nemcsak megszünteti a kap-függő mRNS-transzlációt (19); úgy gondolják, hogy a hasítási termékek stimulálják a nem zárt mRNS transzlációját, például a nem sejtes pikornavírus genomot (43), amely új belső riboszóma belépési mechanizmust használ a fehérje transzláció megkezdéséhez (31, 76). Kimutatták, hogy a 2apro és a 3cpro poliovírus fehérjék hasítják a TATA-kötő fehérjét, a 3Cpro pedig leállítja az I, II és III RNS polimerázok transzkripcióját (11, 72, 74). A tfiiic (10), a CREB (73) és az Oct-1 (75) transzkripciós faktorokat a 3cpro szintén hasítja a picornavirus fertőzés során. Kimutatták, hogy a CVB3 protein 2B módosítja az endoplazmatikus retikulumot és a plazmamembrán permeabilitását (14), ami növeli a citoszolos szabad kalciumkoncentrációt (28, 67) és a membrán léziókat, ami elősegítheti a vírus utódok felszabadulását. Az ionos gradiensek összeomlanak (40, 52), és a foszfolipáz aktivitás megváltozik (24, 29). A HeLa sejtek CVB3 fertőzése két sejtfehérje tirozin-foszforilációját eredményezi 4 órával a fertőzés után, és ezeknek a foszforilációknak a gátlása jelentősen csökkenti a vírus utódtermelését (27). Nyilvánvaló, hogy a fertőzés egy dinamikus sejtfolyamat, amelyben a vírus és a gazdafehérjék közötti időszerű kölcsönhatások határozzák meg mind a vírus, mind a gazdasejtek kimenetelét.

most már világos, hogy a kaszpáz enzimcsalád cisztein proteázai kulcsfontosságú effektor molekulák az apoptotikus sejthalálban. Aktiválás után a kaszpázok specifikus szubsztrátokat hasítanak, beleértve a poli (ADP-ribóz) polimerázt (PARP) (35), a DNS fragmentációs faktort (DFF) (37), a gelsolint (34), a lamin A-t (58), a szterin-szabályozó elem-kötő fehérjéket (68), A Ft-fodrint (12, 66), a fokális adhéziós kinázt (71) és az mdm2-t (18), többek között. Az ilyen hasítási események fontos változásokat eredményeznek a normál homeosztatikus sejtfolyamatokban és a megfelelő sejtmorfológiai-szerkezeti változásokban.

számos vírus rendelkezik biokémiai mechanizmusokkal az apoptózis elkerülésére és/vagy indukálására azokban a sejtekben, amelyekben tartózkodnak (a felülvizsgálatokért lásd a 49.és 60. hivatkozást). Különböző vírusok kölcsönhatásba lépnek az apoptotikus halálút különböző szakaszaiban. A vírusok olyan stratégiákat fejlesztettek ki, amelyek a FAS ligandum-Fas vagy tumor nekrózis faktor alfa (TNF-ons)–TNF receptor jelátviteli komplexet, a Bcl-2 szabályozók családját vagy a kaszpáz hóhérok családját célozzák meg (49, 60). A cvb3-fertőzött sejtek halálának mechanizmusait még meg kell határozni; azonban korlátozott morfológiai bizonyíték áll rendelkezésre az apoptózis indukciójára vonatkozóan pikornavírussal fertőzött sejtekben. A Theiler egér encephalitis vírusával (32, 65) és poliovírussal (63) nyert bizonyítékok azt mutatták, hogy a pikornavírussal fertőzött sejtek apoptózison mennek keresztül, morfológiai kritériumok alapján, beleértve a nukleáris kondenzációt és a DNS fragmentációját.

annak megállapításához, hogy a kaszpázok aktiválódnak-e és felelősek-e a Cvb3 fertőzést követően megfigyelt CPE-ért, HeLa sejtek (American Type Culture Collection, Rockville, Md.) vagy fertőzöttek voltak, a többszörös fertőzés (MOI) 5, CVB3-mal (nagylelkűen Charles Gauntt, Texasi Egyetem Egészségtudományi Központ, San Antonio) vagy színlelt minimális esszenciális közeggel (MEM) kezelték, amelyből hiányzik a magzati szarvasmarha szérum (FBS) 45 percig. A sejteket foszfátpufferelt sóoldattal (PBS) mostuk, majd 10% FBS-t tartalmazó teljes MEM-et szubsztituáltunk. A pozitív apoptózis kontroll HeLa sejtekből állt, amelyeket a fotoszenzibilizáló benzoporfirin származék monoacid gyűrűvel (BPD-MA) kezeltek 1 órán át, majd látható fénynek voltak kitéve, amint azt korábban leírtuk (22, 23). A kultúrákat megvizsgálták és betakarították 0, 1, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12 órával a fertőzés után. A sejteket kétszer mossuk hideg PBS-ben , és lizáljuk 1 ml lízis pufferben (20 mM Tris, 137 mM NaCl, 10% glicerin, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenilmetil-szulfonil-fluorid, 0,15 e aprotinin / ml) 75 cm2-es tenyészfelületenként. 20 perces jégen történő inkubálás után a felülúszókat 10 000 g-on végzett centrifugálás után összegyűjtöttük, és -20 C-on tároltuk további biokémiai elemzések céljából.

a cvb3 vírusfehérjék, az utódvírus termelődésének időbeli mintázatát, valamint a HeLa-sejtek degeneratív morfológiai változásainak evolúcióját a gazdasejt-halál fehérjék vizsgálatával együtt vizsgálták. A sejtlizátum mintákat nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézissel választottuk el. A fehérjéket nitrocellulózba (Hybond ECL nitrocellulóz membránok; Amersham) vittük át. A membránokat inkubáltuk 1 órán át szobahőmérsékleten blokkoló pufferben (PBS 0,1% Tween 20 és 5% porított zsírmentes tej). Két mosás után mosópufferben (PBS 0-val.1% Tween 20), a membránokat cvb3 elleni antitesttel inkubáltuk (nyúl poliklonális anti-CVB3, 1:1000; pontos vegyi anyagok). A membránokat háromszor mostuk mosópufferben, majd inkubáltuk egy szamárellenes nyúl immunglobulin szekunder antitesttel (Amersham). A membránokat háromszor mostuk, a torma peroxidáz-konjugált szekunder immunglobulinokat fokozott kemilumineszcencia módszerrel (ECL, Amersham) detektáltuk, és Hiperfilm (Amersham) autoradiográfiás filmnek vetettük alá. A vírusfehérje-szintézis jelentős növekedése kimutatható volt a fertőzés utáni 3 és 5 óra között (ábra.1B). A vírus proteázok hasítják a vírust, valamint a gazdafehérjéket a fertőzés korai szakaszában. Az egér monoklonális anti-eif4g-vel végzett immunoblot-elemzéssel (1: 1000; transzdukciós laboratóriumok) azt találták, hogy az eIF4G-t a 2A vírusproteáz hasítja 1 órán belül postinfekció, a 220-kDa fehérje kimutatásának további elvesztésével 5 h postinfekcióval (ábra. 1C). A cvb3 mennyiségét a sejt felülúszóban (felszabadult vírus) a HeLa sejtek egyrétegein határoztuk meg a korábban leírt agar overlay plakk vizsgálati módszerrel (3). Röviden, a minta felülúszóját sorozatosan 10-szer hígítottuk, a hígításokat a HeLa sejtek 90-95%-os összefolyó egyrétegére hatkútlemezen (Costar) fedtük, és a ráhelyezett sejteket 1 órán át inkubáltuk (5% CO2, 37 Kb). A nem kötődő vírust tartalmazó táptalajt eltávolítottuk, és minden kútba 0,75% agart tartalmazó meleg teljes MEM-et fedtünk. A lemezeket 36-48 órán át inkubáltuk (5% CO2, 37 Ft), carnoy fixálószerével rögzítettük (95% etanol–ecetsav ), és 1% kristály ibolyával festettük. Az utódvírus a felülúszóban 1 és 5 óra közötti bazális szinten volt jelen. 6 órával a fertőzés után a felülúszóvírus szintje kimutatható növekedést mutatott, és az exponenciális vírustermelés a plakkvizsgálatokkal meghatározott 9 órával a fertőzés után kezdődött (ábra. 1A). A HeLa sejtek jelentős változásokat mutattak a morfológiában, beleértve a sejtes kondenzációt, a kerekítést és a tenyésztési egyrétegből való felszabadulást a fertőzést követő 6 és 7 óra között, amint azt kontrasztmikroszkópos vizsgálat is megállapította (ábra. 1D).

annak megállapításához, hogy a gazdasejt-halálozási gép aktiválódik-e a CVB3 fertőzés után, a meghatározott időpontokban összegyűjtött lizátum immunoblot elemzését végezték. A kaszpáz 3, amely a sejtekben 32 kDa molekulatömegű prekurzor fehérjeként van jelen, egy primer molekula, amely részt vesz a sejthalál végrehajtásában. Egér monoklonális anti-kaszpáz 3 (1:1000; transzdukciós laboratóriumok) alkalmazásával megállapítottuk, hogy a nem fertőzött sejtek tartalmazzák a 32 kDa prekurzor fehérjét. A CVB3 fertőzést követően a 32 kDa prekurzor fehérje szintje 7 és 8 óra között csökkenni kezdett, és 12 óra után szinte teljesen kimutathatatlan volt (ábra.2). Annak meghatározására, hogy a kimerült pro-kaszpáz-3 proteolitikusan feldolgozásra került-e egyláncú zimogénből annak aktív kétláncú enzimévé, HeLa-sejt lizátumokat inkubáltunk kaszpáz-3 fluoreszcens szubsztrátokkal az előzőekben leírtak szerint (23). Röviden, sejtes lizátumokat inkubáltunk reakciópufferrel (20 mM-es trisz , 137 mM-es NaCl, 1% Nonidet P-40, 10% glicerin), amely 100-at tartalmazott 6%-os számú kaszpáz–3 szubsztrát acetil-Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-metil-kumarin (Ac-DEVD-AMC) (Calbiochem, Cambridge, Mass.) vagy Z-Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-trifluor-metil-kumarin (Z-DEVD-AFC) (enzimrendszerek termékei, Livermore, Kalifornia.). A reakcióelegyet 37 6CC-N 2 órán át inkubáltuk, az AMC vagy AFC fluoreszcens gerjesztését pedig 380, illetve 400 nm-en 460, illetve 505 nm-en mértük Citofluor 2350 citofluorométerrel (Perseptive Biosystems, Burlington, Ontario, Kanada). Ezzel a megközelítéssel a kaszpáz 3 aktivitása nyilvánvaló volt 5 órával a fertőzés után. A növekedés a kaszpáz 3 aktivitás 7-10 h postinfection, amikor a maximális aktivációs szintet elérte, tartottuk keresztül 12 h postinfection (ábra. 2). Ez a proteázvizsgálat kimutatta, hogy a kaszpáz-3 aktív formában van a fertőzött sejtekben, és képes más kaszpázok és szubsztrátok proteolitikus feldolgozására.

a kaszpáz-3 specifikus szubsztrátokat hasít aszparaginsav-maradékoknál (42). Kimutatták, hogy a PARP, a DNS-javításban részt vevő nukleáris fehérje (13, 69) szubsztrátja az aktivált kaszpáz-3-nak, valamint más kaszpázoknak (35). Az apoptotikus sejtekben a PARP egy 116 kDa-s fehérjéből hasad le, ami 85, illetve 25 kDa-s fragmentumokat eredményez, amelyeket a fehérje amino -, illetve karboxil-végtermékeinek antitestjeivel határoznak meg. A CVB3-fertőzött HeLa sejtekben a PARP lebomlása egy 85-kDa fragmentum megjelenésével 9 h postinfekcióval volt kimutatható, a 116-kDa peptid szintjének további csökkentésével 10 és 12 h postinfekcióval, az egér monoklonális anti-PARP-vel végzett immunoblot analízissel (1:2000; Biomol) (ábra. 3).

a DFF egy citoszolos fehérje, amelyet a kaszpáz 3 (37) hasít. A hasítás után ez a fehérje endonukleázt szabadít fel, amely a magba vándorol, ahol az internukleoszomális helyeken hasíthatja a DNS-t, ami DNS-fragmentációt eredményez (16). Korábban kimutatták, hogy az internukleoszomális DNS lebomlása a picornavirus fertőzés sejtjellemzője (32). A nyúl poliklonális anti-DFF alkalmazásával (Xiaodong Wang, University of Texas Southwestern Medical School, Dallas) a DFF-t egy 45 kDa-s fehérjéből hasítják le, 30 kDa-s fragmentumot hozva létre 9 órával a fertőzés után, a 45 kDa-s fehérje folyamatos feldolgozásával és elvesztésével 10 és 12 óra között a fertőzés után (ábra. 3).

annak meghatározására, hogy a kaszpázok közvetlenül termelik-e a jellegzetes CPE-t, amely a pikornavírusfertőzés után következik be, vagy a morfológiai változások után aktiválódnak, a sejteket az Általános kaszpáz inhibitorral, benziloxikarbonil-Val-Ala-Asp-fluorometilketonnal (ZVAD.fmk). A zvad törzsoldata (100 mM dimetil-szulfoxidban).az fmk-t (Bachem) teljes MEM-ben hígítottuk 0-tól 200-ig terjedő koncentrációra 60 percig sejtekkel inkubáltuk fertőzés vagy fénykezelés előtt. A cvb3 fertőzés után a sejteket PBS-sel mostuk, és 10% FBS-t és friss ZVAD-ot tartalmazó teljes MEM-et.az fmk-t (0-200 MHz) ezután helyettesítették. Kimutatták, hogy ez a peptid gátolja a morfológiai változások indukcióját több apoptotikus ingerrel (46, 54). ZVAD.az fmk 50, 100 és 200 MHz-es koncentrációban blokkolta mind a kaszpáz aktivitást, mind a PARP és a DFF hasadását a BPD – MA-és a fénykezelt HeLa sejtekben (pozitív kontroll az apoptózisra) (ábra. 4). CVB3-fertőzött HeLa sejtekben a PARP és a DFF hasadását az inhibitor részlegesen megakadályozta 50 és 100 MHz koncentrációban (ábra. 4). Az inhibitor legmagasabb koncentrációjánál (200 6m) nem volt bizonyíték PARP vagy DFF hasítási fragmentumokra a cvb3-mal kezelt sejtekben a fertőzést követő 10 órán belül. A strukturális fehérjék, például az aktin, a gelsolin, a lamin B és a fokális adhéziós kináz kaszpázhasadása felelős az apoptózis indukcióját követően megfigyelt morfológiai változásokért (42, 45). A BPD-MA fotoaktivációját követő 2 órán belül a HeLa sejtek kondenzálódtak, kiterjedt membrán-blabbing volt, és felszabadultak az egyrétegből (ábra.5). Növekvő koncentrációban ZVAD.fmk, ez az apoptotikus fenotípus nem volt nyilvánvaló, a sejtek a kontroll sejtekhez hasonló morfológiát tartottak fenn (ábra. 5). A CVB3-fertőzött HeLa sejtek kondenzálódtak és felszabadultak az egyrétegű rétegből, de a fertőzést követő 10 órán belül nem mutattak membránfehérítést (ábra. 5). A kaszpáz aktivitás zvad általi blokkolása.az fmk 200 MHz-ig terjedő koncentrációban nem változtatta meg a citopátiás fenotípust, annak ellenére, hogy a szubsztrátok (DFF és PARP) hasadása gátolt volt.

a Picornaviridae család vírusainak klasszikus jellemzője a fertőzést követő sejtes CPE. A poliovírus szaporodására szolgáló extraneurális sejttenyésztési technika felfedezése óta (17) a sejtmorfológia degeneratív változásait figyelték meg. Először Robbins et al. (48) 1950-ben ezek a citopátiás változások magukban foglalják a mag zsugorodását, a kromatin kondenzációját, a sejtek kerekítését és az egyrétegű felszabadulását, végül acidofil citoplazmává, nukleáris pyknózissá és a nukleáris kromatin fragmentációjává (karyorrhexis) (47).

a sejthalál mechanizmusainak legújabb megértése megalapozza a gazdasejthalál fehérjék vizsgálatát és azok lehetséges szerepét a CVB3 fertőzés CPE-jében. Számos vírus gátolja vagy aktiválja a sejthalált, olyan stratégiákat, amelyek a sejtkárosodás, a gyulladásos válaszok vagy a vírus perzisztencia megkülönböztető aspektusait közvetítik. Mint fentebb megjegyeztük, a korábbi picornavirus vizsgálatok kimutatták az apoptotikus sejthalál morfológiai jellemzőit, beleértve a sejtek zsugorodását, a DNS fragmentációját és a nukleáris kondenzációt (21, 32, 47).

a kaszpáz 3, egy cisztein proteáz, amely homológiával rendelkezik a theCaenorhabditis elegans protein Ced-3-mal (77), a sejthalál végrehajtási szakaszában részt vevő egyik kulcsfontosságú fehérje. A több inger, köztük a Fas, a TNF, az etopozid, a sztauroszporin, a fotodinamikai terápia, az ionizáló sugárzás és a növekedési faktor megvonása által kiváltott apoptózis magában foglalja a pro-kaszpáz-3 feldolgozást és az azt követő aktiválást (15, 23, 30, 33, 51). 7-8 órával a CVB3-mal történő fertőzés után a pro-kaszpáz-3 kimerül, és a kaszpáz aktivációs vizsgálatok kimutatták, hogy ez a fehérje aktív formájába hasad. Számos fehérje képes aktiválni a kaszpáz-3-at, beleértve a kaszpáz-8-at (a TNF vagy Fas receptorokon keresztül történő jelátvitel révén) (55), a citotoxikus limfocitákból származó granzyme B-T (62) és a kaszpáz-9-et (a mitokondriális citokróm c felszabadulása és az apoptotikus proteáz aktiváló faktorok összeszerelése révén) (36). Aktiválás után a kaszpáz-3 lebonthatja a specifikus szubsztrátokat, ami viszont szerkezeti változásokat és a sejtfolyamatok homeosztatikus szabályozásának elvesztését eredményezi. Számos fehérjéről kimutatták, hogy az aktivált kaszpázok hasítják. A kaszpáz-3 aktiválódásával összhangban mind a PARP, mind a DFF hasad a CVB3 fertőzés után. A kaszpáz aktiváció és a DNS fragmentáció közvetlenül kapcsolódik a DFF hasításán keresztül (37). A DFF egy humán citoszol faktor, amely két 45 és 40 kDa-os alegységből áll, amelyek közül a nagyobbik a kaszpáz-3 által kisebb polipeptidekké bomlik. Az enari et al. (16) egér limfóma sejtek felhasználásával endonukleázt, kaszpáz-aktivált Dnázt (CAD) izoláltunk. Izoláltuk a DFF fehérje egér-ekvivalensét, amelyet CAD-inhibitornak (50) nevezünk. A CAD inhibitor (dff) kaszpáz-3 hasítása lehetővé teszi a CAD nukleáris transzlokációt és a DNS lebomlását. DFF hasítjuk kezdve 9 h postinfection, ami egy 30-kDa fragmentum (ábra. 3), amely tovább feldolgozható egy 11 kDa-s fragmentummá (37). A PARP a sejtmagban helyezkedik el, és részt vesz a DNS javításában. A PARP hasítása a fertőzést követően 9 órakor kezdődik, ami arra utal, hogy ha a kaszpázok aktiválódnak a citoszolban, képesek hozzáférni a mag lokalizált szubsztrátjaihoz.

Megjegyzendő, hogy a kaszpáz gátlása az Általános kaszpáz inhibitorral, a ZVAD-val.az fmk nem akadályozta meg a cvb3 által a fertőzést követően kiváltott CPE-t. 6 és 7 óra között a fertőzés után a CPE kontrasztmikroszkóppal vált nyilvánvalóvá a CVB3 fertőzési modellünkben. A kontrasztmikroszkópos vizsgálat szerint a fertőzés és a CPE megjelenése közötti idő a ZVAD-nál azonos volt.az fmk-koncentráció 50-200 MHz. Amellett, hogy nem befolyásolja a CPE idejét, ZVAD.az fmk kezelés olyan sejteket eredményezett, amelyek morfológiai megjelenése hasonló a kezeletlen, fertőzött sejtekéhez (ábra. 5). BPD-MA és light kezelést alkalmaztunk alternatív módszerként az apoptózis kiváltására HeLa sejtekben (22, 23). A kaszpáz aktiváció gátlása a zvad inhibitorral.az fmk megakadályozta az apoptotikus fenotípust (ábra. 5). Ezekből az eredményekből azt a következtetést vonjuk le, hogy a kaszpáz aktivitás és a szubsztrátok hasadása nem a pikornavírus fertőzéshez kapcsolódó jellegzetes CPE-t, hanem a morfológiai változásokat követően aktiválódnak.

a vírusreplikációs ciklus metszéspontját és a gazdasejt halálozási útvonalának aktiválódását még meg kell határozni. A Picornavirus fertőzés hamarosan gátolja a sejtes RNS-t és a fehérjeszintézist (19, 74). A pikornavírus által indukált metabolikus változások és a vírus által indukált CPE közötti összefüggések korai vizsgálata azt mutatta, hogy a fehérje-és RNS-szintézis gátlása nem kapcsolódik közvetlenül a sejtmorfológiai változásokhoz (4). A fehérje-és RNS-szintézis gátlók késleltették a sejthalált, de a sejtek kevesebb morfológiai változást mutattak, mint a pikornavírussal fertőzött sejtek (5). A protein-és RNS-szintézis gátlása több szer bármelyikével, például aktinomicin D-vel, puromicinnel és diphtheria toxinnal apoptózist eredményez (39). A poliovírus-fertőzési rendszerekben végzett korai vizsgálatok azt mutatták, hogy a puromicin, amely gátolja a vírus és a gazdafehérjék transzlációját, késlelteti a citopátiás változások kialakulását, ami arra utal, hogy bizonyos vírusfehérjék közvetlenül citotoxikusak lehetnek (4). A MOI növelése a CPE gyorsabb megjelenéséhez vezet (publikálatlan megfigyelések), bár szinte az összes gazdafehérje-transzláció 3 órán belül leáll egy viszonylag alacsony MOI-nál (25), mint amilyet ebben a tanulmányban használtak (MOI = 5). A közelmúltban kimutatták, hogy a coxsackievirus és a poliovírus által kódolt 2B fehérje a sejtmembrán frakciókhoz kapcsolódik, beleértve a plazmalemmát és az endoplazmatikus retikulumot, és megzavarja az ionmozgást, beleértve a Ca2+ mozgását a citoszolhoz (1, 67). Ca2 + beáramlás apoptózisban fordul elő (7, 44), de nem világos, hogy a beáramlás a kaszpáz aktiválása előtt vagy után következik-e be. A kaszpázok ionszükségletének vizsgálatával megállapítottuk, hogy a kalciumion-koncentráció kevés hatással van a kaszpáz aktivitására (56). A coxsackievirus fertőzést követő korai kalciumbeáramlás a 2B fehérje membrán permeabilitásra gyakorolt hatásából eredhet, és a megfigyelt nagy késői kalciumbeáramlás (>6 h postinfection) (67) a kaszpáz aktiváció downstream hatása lehet.

a fertőzés korai szakaszában előnyös lenne, ha a vírus gátolná a gazdasejt pusztulását, ezáltal lehetővé téve a vírus utódainak maximális termelését. A vírus életciklusának késői szakaszában az is előnyös lenne, ha a vírus apoptózist indukálna, nem pedig nekrózist. A halál ilyen mechanizmusa a gazdaszervezet immunrendszerének a vírus általi kijátszásának lehetséges eszköze a környező szövetekbe történő felszabadulása során. Az apoptózist az érintett sejtek gyors fagocitózisa jellemzi proinflammatorikus citokinek felszabadulása nélkül (53).

kimutatták, hogy a vírusok kölcsönhatásba lépnek az apoptotikus út különböző szintjein. Számos gammaherpesvírus (beleértve a Kaposi-szarkómához kapcsolódó humán herpeszvírust 8), valamint a tumorigén molluscum contagiosum vírus FLICE-gátló fehérjéket tartalmaz, amelyek kölcsönhatásba lépnek a Fas adapter Fadd fehérjével, és versenyeznek a kaszpáz 8 toborzás és az azt követő aktiváció gátlásáért (61). A cowpox vírus Serpin crma expressziója gátolja a kaszpázok kaszpáz-8-mediált aktiválódását a downstream kaszpázokban, mint például a kaszpáz-1 és kaszpáz-3 (55). Az IAP (az apoptózis inhibitorai számára) fehérjék alkotják a baculovírusok által expresszált fehérjék családját, amelyek blokkolják a vírusfertőzés vagy a kaszpáz 1 által kiváltott apoptózist (78). Ezenkívül a Bcl-2 fehérjecsalád számos vírusos homológját fedezték fel (2, 8, 20, 70). Az adenovírus (9, 20, 57), Az afrikai sertéspestis vírus (41) és az Epstein-Barr vírus (26, 41, 59) olyan fehérjéket kódol (E1B-19k, LMWS-HL és bhrf1), amelyek szekvenciahomológiát mutatnak a Bcl-2 család túlélést elősegítő génjeivel.

az apoptózist közvetlenül indukáló vírusfehérjék azonosítása nincs olyan széles körben dokumentálva, mint a sejthalált gátló vírusfehérjéké. A lentivírusok humán immundeficiencia vírus és az 1-es típusú humán T-sejt leukémia vírus kódolja a tat és a Tax transzkripciós szabályozókat, amelyekről kimutatták, hogy növelik a Fas ligandum expresszióját, miközben csökkentik a Bcl-2 családtagok expresszióját (79, 80). Az emberi adenovírus által kódolt E1A, E3 és E4 géntermékek sejtpusztulást okoznak a sejttenyészetben történő expresszió után. Az adenovírus halálát okozó gének a fertőzési ciklus végén expresszálódnak, és végül túlterhelik a vírus által kódolt halálgátló géneket (38).

adataink azt mutatják, hogy a kaszpáz-3 aktiváció inkább követi, mint megelőzi a cvb3 által kiváltott degeneratív morfológiai változásokat a fertőzött HeLa sejtekben. Az aktivált kaszpázok specifikus szubsztrátokat dolgoznak fel, beleértve a PARP-t és a DFF-t is. A kaszpáz aktivitás gátlása azonban nem szünteti meg a vírussal fertőzött sejtek morfológiai megjelenését (CPE), amelyet kontrasztmikroszkóppal határoztak meg. A kaszpáz-feldolgozás és a szubsztrátok hasítása fontos lehet a fertőzött sejtekben a normális homeosztatikus folyamatok végső megváltoztatásában, és elősegítheti a vírussal fertőzött sejtek végső clearance-ét. A 2A, 3C és 3CD vírusproteázok hasíthatják a specifikus szerkezeti fehérjéket, ami a CPE-nek megfelelő morfológiai változásokat eredményez, hasonlóan a kaszpázok hatásához, amelyek különálló szubsztrátumokat hasítanak, hogy különálló apoptotikus fenotípust érjenek el.

• Copyright 1998 amerikai Mikrobiológiai Társaság

2.

1. Ambrosini G., Adidas C., Altieri D. C.

az új anti-apoptózis gén, survivin, rákban és lymphomában kifejezve.Nat. Med.31997917921

3.6. o. Anderson D. R.,

Wilson J. E.,

Carthy C. M.,

Yang D.,

Kandolf R.,

McManus B. M.

a coxsackievirus B3 közvetlen kölcsönhatása a myocarditisre fogékony vagy rezisztens egerek léprekeszében lévő immunsejtekkel.J. Virol.70199646324645

4.

1. Bablanian R.,
2. Eggers H.,
3. Tamm I.

tanulmányok a poliovírus által kiváltott sejtkárosodás mechanizmusáról. I. a poliovírus által kiváltott metabolikus és morfológiai változások közötti kapcsolat a tenyésztett sejtekben.Virológia 261965100113

5.xhamsteren,

Bablanian R.,

Eggers H. J.,

Tamm I.

tanulmányok a poliovírus által kiváltott sejtkárosodás mechanizmusáról. II. a poliovírus növekedése és a vírus által kiváltott morfológiai változások közötti kapcsolat a sejtekben.Virológia 261965114121

6.GmbH,

Bergelson J. M.,

Cunningham J. A.,

Droguett G.,

Kurt-Jones E. A.,

Krithivas A.,

Hong J. S.,

Horwitz M. S.,

Crowell R. L.,

> Finberg R. W.

a Coxsackie B vírusok és az adenovírusok közös receptorának izolálása 2 és 5.Tudomány275199713201323

7.6. rész

1. Bian X.,
2. Hughes F. M. Jr.,
3. Huang Y.,
4. Cidlowski J. A.,
5. Putney J. W. Jr.

a citoplazmatikus Ca2+ és intracelluláris Ca2+ tárolók szerepe az apoptózis indukciójában és elnyomásában az S49-ben cells.Am. J. Physiol.2721997C1241C1249

8.6. évfolyam: Cheng E. H.,

Nicholas J.,

Bellows D. S.,

Hayward G. S.,

Guo H. G.,

Reitz M. S.,

Hardwick J. M.

a Bcl-2 homológ, amelyet a Kaposi-szarkómával társult vírus, a humán herpeszvírus 8 kódol, gátolja az apoptózist, de nem heterodimerizálódik Bax-szal vagy Bak-val.Proc. NAT. Acad. Sci. USA941997690694

9.

1. Chiou S.-K.,
2. Tseng C.-C.,
3. Rao L.,
4. White E.

az adenovírus E1B 19 kilodalton fehérje funkcionális kiegészítése Bcl-2-vel a fertőzött sejtek apoptózisának gátlásában.J. Virol.68199465536566

10.6. rész: Clark M. E.,

Hammerle T.,

Wimmer E.,

Dasgupta A.

a poliovírus proteináz 3C a IIIC transzkripciós faktor aktív formáját inaktív formává alakítja: a gazdasejt polimeráz III transzkripciójának poliovírus általi gátlásának mechanizmusa.EMBO J. 10199129412947

11.GmbH,

Lieberman P. M.,

Berk A. J.,

Dasgupta A.

a humán TATA-kötő fehérje közvetlen hasítása poliovírus proteáz 3C-vel in vivo és in vitro.Mol. Cella. Biol.13199312321237

12.

1. Cryns V. L.,
2. Bergeron L.,
3. Zhu H.,
4. Li H.,
5. Yuan J.

a FAS-és a tumor nekrózis faktor által kiváltott apoptózis során bekövetkező specifikus hasítást a poly(ADP – ribóz) polimeráz proteáz.J. Biol. Kémia.27119963127731282

13.xhamsterként,

De Murcia J. M.,

Niedergang C.,

Trucco C.,

Ricoul M.,

Dutrillaux B.,

Mark M.,

Oliver F. J.,

Masson M.,

Dierich A.,

LeMeur M.,

Walztinger C.,

Chambon P.,

De Murcia G.

a poli(ADP-ribóz) polimeráz követelménye az egerek és sejtek DNS-károsodásából való felépülés során.Proc. NAT. Acad. Sci. USA94199773037307

14.xhamsteren,

Doedens J. R.,

Kirkegaard K.

A 2b és 3a poliovírus fehérjék sejtfehérje-szekréciójának gátlása.EMBO J. 141994894907

15.6. o.,

Hug H.,

Nagata S.

jégszerű proteáz részvétele a Fas által közvetített apoptózisban.Nature37519957881

16.xhamsteren,

17.6. évfolyam:

1. Enders J. F.,
2. Weller T. H.,
3. Robbins R. C.

a poliomyelitis vírus Lansing törzsének termesztése különböző emberi embrionális szövetek kultúráiban.Tudomány10919498587

18.GmbH,

Erhardt P.,

Tomaselli K. J.,

Cooper G. M.

az MDM2 onkoprotein azonosítása a CPP32-szerű apoptotikus proteázok szubsztrátjaként.J. Biol. Kémia.27219971504915052

19.

1. Etchison D.,
2. Milburn S. C.,
3. Edery I.,
4. Sonenberg N.,
5. Hershey J. W.

a HeLa-sejt fehérjeszintézisének poliovírus fertőzést követő gátlása korrelál egy 220 000 dalton-polipeptid proteolízisével, amely az eukarióta iniciációs 3-as faktorral és egy cap-kötő fehérje komplexszel társul.J. Biol. Kémia.25719821480614810

20.6.évfolyam:

1. Farrow S. N.,
2. White J. H.,
3. Martinou I.,
4. Raven T.,
5. Pun K. T.,
6. Grinham C. J.,
7. Martinou J. C.,
8. Brown R.

egy bcl klónozása-2 homológ az E1B 19K adenovírussal való kölcsönhatás révén.Nature3741995731733

21.5196667110akadémia PressNew York, N. Y

Godman G. C. az enterovírus fertőzés citopatológiája a kísérleti patológia nemzetközi áttekintéserichter G. W., Epstein M. A. 5196667110.

23.6. a fotodinámiás terápia kaszpáz-3 aktivációt indukál a HL-60 sejtekben.A Sejthalál Különbözik.41997623629

24.6. o., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L., L.

a foszfolipáz C és a foszfolipáz A2 aktivitásának módosítása poliovírus fertőzés során.J. Biol. Kémia.26419892192321927

25.helentjaris T.,

Ehrenfeld E.

a gazdasejt fehérjeszintézisének gátlása UV-inaktivált poliovírus által.J. Virol.211977259267

26.

1. Henderson S.,
2. Huen D.,
3. Rowe M.,
4. Dawson C.,
5. Johnson G.,
6. Rickinson A.

az Epstein-Barr vírus által kódolt BHRF1 fehérje, a Bcl-2 vírusos homológja védi az emberi B-sejteket a programozott sejthaláltól.Proc. NAT. Acad. Sci. USA90199384798483

27.GmbH,

Selinka H.-C.,

Kandolf R.

tirozin foszforilációs események a coxsackievirus B3 replikációja során.J. Virol.711997595600

28.xhamsteren A.,

Arroyo J.,

Alvarez A.,

Carrasco L.

fokozott intracelluláris kalciumkoncentráció poliovírus fertőzés során.J. Ferrule.69199551425146

29.xhamsteren A., Perez L., Carrasco L.

a foszfolipáz aktivitás fokozása poliovírus fertőzés során.Ferrule Tábornok.74199310631071

30.6. a Ced-3 / ICE-család proteázainak szerepe a sztauroszporin által indukált programozott sejthalálban.J. Sejt Biol.133199610411051

31.6. o., Davies M. V., Kaufman R. J.,

Wimmer E.

a fehérjeszintézis megkezdése a riboszómák belső belépésével az encephalomyocarditis vírus RNS 5′ nem transzlált régiójába in vivo.J. Virol.63198916511660

32.

1. Jelachich M. L.,
2. Lipton H. L.

Theiler egér encephalomyelitis vírusa apoptózissal megöli a korlátozó, de nem megengedő sejteket.J. Virol.70199668566861

33.6. o.,

Desnoyers S.,

Ottaviano Y.,

Davidson N. E.,

Poirier G. G.

a poli(ADP-ribóz) polimeráz specifikus proteolitikus hasítása: a kemoterápia által kiváltott apoptózis korai markere.Rák res. 53199339763985

34.

1. Kothakota S.,
2. Azuma T.,
3. Reinhard C.,
4. Klippel A.,
5. Tang J.,
6. Chu K.,
7. McGarry T. J.,
8. Kirschner M. W.,
9. Koth K.,
10. Kwiatkowski D. J.,
11. Williams L. T.

a gelsolin kaszpáz-3 által generált töredéke: az apoptózis morfológiai változásának effektorja.Science2781997294298

35.GmbH, Desnoyers S., Putrefy G. G., Earnshaw W. C.

a poli(ADP-ribóz) polimeráz hasítása olyan tulajdonságokkal rendelkező proteináz által, mint a jég.Nature3711994346347

36.

1. It P., Nijhawan D., Budihardjo I., Srinivasula S. M.,
2. Ahmad M., Alnemri E. S.,
3. Wang X.

az Apaf-1 / kaszpáz-9 komplex citokróm C és dATP-függő képződése és apoptotikus proteáz kaszkád.Cell911997479489

37.

1. Liu X.,
2. Zou H.,
3. Slaughter C.,
4. Wang X.

DFF, egy heterodimer fehérje, amely a kaszpáz-3 után a DNS fragmentációját váltja ki az apoptózis során.Cell891997175184

38.

1. Liu Y.,
2. Kitsis R. N.

DNS-szintézis és apoptózis indukálása szívizomsejtekben az E1A onkoprotein által.J. Sejt Biol.1331996325334

39.

1. Martin S. J.,
2. Lennon S. V.,
3. Bonham A. M.,
4. Cotter T. G.

apoptózis (programozott sejthalál) indukálása humán leukémiás HL-60 sejtekben az RNS vagy a fehérjeszintézis gátlása révén.J. Immunol.145199018591867

40.mno

1. Nair C. N.

poliovírussal fertőzött HeLa sejtek monovalens kation metabolizmusa és citopátiás hatásai.J. Virol.371981268273

41.6. o. Neilan J. G.,

Lu Z.,

Afonso C. L., Kutish G. F., Sussman M. D., Rock D. L.

az afrikai sertéspestis vírus génje, amely hasonló a bcl-2 proto-onkogénhez és az Epstein-Barr vírus bhrf1 génjéhez.J. Ferrule.67199343914394

42.6. évfolyam: Nicholson D. W., Thornberry N. A.

kaszpázok: gyilkos proteázok.Trendek Biochem. Sci.221997299306

43.6. o., Rau M.,

Pain V., Morley S.

az eukarióta fehérjeszintézis iniciációs faktor (eIF) 4G C-terminális doménje elegendő a cap-független transzláció támogatásához eIF4E hiányában.EMBO J. 15199613711382

44.6.a kalciumion és a sejthalál.

1. Orrenius S.,
2. Nicotera P.

a kalciumion és a sejthalál.J. Neurális Transzm. Suppl.431994111

45.6. fejezet

1. Porter A. G.,
2. Ng P.,
3. Janicke R. U.

a halál hordozói életre kelnek.Bioessays191997501507

46.enterprises G. J. Pronk G. J.,

Ramer K.,

Amiri P.,

Williams L. T.

jégszerű proteázra van szükség az apoptózis és a ceramid Reaper általi kiváltásához.Science2711996808810

47.

1. Reissig M.,
2. Howes D. W.,
3. Melnick J. L.

poliovírussal fertőzött epiteliális sejttenyészetek morfológiai változásainak sorrendje.J. Felh. Med.1041956289309

48.6. rész: Robbins F. C.,

Enders J. F.,

Weller T. H.

a poliomyelitis vírusok “in vitro” citopatogén hatása az emberi embrionális szövetekre.Proc. Soc. Felh. Biol. Med.751950370

49.

1. Rudin C. M.,
2. Thompson C. B.

apoptózis és betegség: a programozott sejthalál szabályozása és klinikai jelentősége.Annu. Rev. Med.481997267281

50.GmbH,

Szakahira H.,

Enari M.,

Nagata S.

CAD inhibitor hasítása CAD aktiválás és DNS lebomlás során apoptózis során.Nature39119989699

51.

1. Sarin A.,
2. Wu M. L.,
3. Henkart P. A.

különböző interleukin-1 béta-konvertáló enzim (ICE) család proteáz követelmények a T-limfociták apoptotikus halálához, amelyet különféle ingerek váltanak ki.J. Felh. Med.184199624452450

52.xhamstersch A.,

k Oncohne J.,

Zibirre R.,

Koch G.

poliovírus által kiváltott változások a HeLa sejtmembrán funkcióiban.J. Virol.441982444449

53.6. évfolyam: Schwartzman R. A.,

Cidlowski J. A.

apoptózis: a programozott sejthalál biokémiája és molekuláris biológiája.Endocr. Rev. 141993133151

54.

1. Slee E. A.,
2. Zhu H.,
3. Chow S. C.,
4. MacFarlane M.,
5. Nicholson D. W.,
6. Cohen G. M.

Benziloxikarbonil-Val-Ala-Asp (OMe) fluorometilketon (Z-vad.FMK) gátolja az apoptózist azáltal, hogy blokkolja a CPP32 feldolgozását.Biochem. J. 31519962124

55.6. o.,

Ahmad M.,

Fernandes-Alnemri T.,

Litwack G.,

Alnemri E. S.

a Fas-apoptotikus út molekuláris rendezése: a Fas/APO-1 proteáz az Mch5 egy CrmA-gátló proteáz, amely több Ced-3/ICE-szerű cisztein proteázt aktivál.Proc. NAT. Acad. Sci. USA9319961448614491

56.GmbH,

Salvesen G. S.

a kaszpáz-3, -6, -7 és -8 biokémiai jellemzői.J. Biol. Kémia.27219972571915723

57.

1. Subramanian T.,
2. Tarodi B.,
3. Chinnadurai G.

funkcionális hasonlóság az adenovírus E1B 19-kDa fehérje és a Bcl-2 proto-onkogén és az Epstein-Barr vírus BHRF1 gén által kódolt fehérjék között.Curr. Felső. Mikrobiol. Immunol.1991995153161

58.

1. Takahasi A.,
2. Alnemri E. S.,
3. Lazebnik Y. A.,
4. Fernandes-Alnemri T.,
5. Litwack G.,
6. Moir R. D.,
7. Goldman R. D.,
8. Poirier G. G.,
9. Kaufmann S. H.,
10. Earnshaw W. C.

a Lamin a hasítása az Mch2 Alfa által, de nem Cpp32: több interleukin 1 béta-konvertáló enzimhez kapcsolódó proteázok különálló szubsztrátfelismerési tulajdonságokkal aktívak az apoptózisban.Proc. NAT. Acad. Sci. USA93199683958400

59.mno

1. Tarodi B.,
2. Subramanian T.,
3. Chinnadurai G.

az Epstein-Barr vírus bhrf1 fehérje védelmet nyújt a DNS-károsító szerek által kiváltott sejthalál és a heterológ vírusfertőzés ellen.Virológia 2011994404407

60.xhamsteren,

1. Teodoro J. G.,
2. Branton P. E.

az apoptózis szabályozása virális géntermékekkel.Vir71199717391746

61.

1. Thome M.,
2. Schneider P.,
3. Hofmann K.,
4. Fickenscher H.,
5. Meinl E.,
6. Neipel F.,
7. Mattmann C.,
8. Burns K.,
9. Bodmer bod Schroter M.,
10. scaffidi C.,
11. Krammer P.,
12. Peter M. E.,
13. tschopp.Nature3861997517521

62. 6. rész: Thornberry,

Peterson E. P.,

Rasper D. M.,

Timkey T.,

Garcia-Calvo M.,

Houtzager V. M.,

Nordstrom P. A.,

Roy S.,

Vaillancourt J. P.,

Chapman K. T.,

Nicholson D. W.

a kombinatorikus megközelítés meghatározza a kapszáz család és a Granzyme B tagjainak sajátosságait.az apoptózis kulcsfontosságú mediátorai számára létrehozott funkcionális kapcsolatok.J. Biol. Kémia.27219971790717911

63.6. évfolyam:

1. Tolszkaja E. A.,
2. Romanova L. I.,
3. Kolesznyikova M. S.,
4. Ivannikova T. A.,
5. E. Smirnova A.,
6. Raikhlin N. T.,
7. Agol V. I.

a poliovírus apoptózist indukáló és apoptózist megelőző funkciói.J. Virol.69199511811189

64.GmbH és MCAR: a C alcsoportba tartozó adenovírusok és a B csoportba tartozó coxsackievírusok humán és egér sejtreceptorai.Proc. NAT. Acad. Sci. USA94199733523356

65.6. szám: C. Kurtz I.,

Fujinami R. S.

apoptózis a Theiler egér encephalomyelitis vírusa által kiváltott akut és krónikus központi idegrendszeri betegségben.Virológia 2281997388393

66.GmbH,

Vanags D. M.,

Pron-Ares M. I.,

Coppola S.,

Burgess D. H.,

Orrenius S.

proteáz érintettség a fodrin hasításában és foszfatidilszerin expozíció apoptózisban.J. Biol. Kémia.27119963107531085

67.6. évfolyam: van Kuppeveld F. J.,

Hoenderop J. G.,

Smeets R. L.,

Willems P. H.,

Dijkman H. B.,

Galama J. M.,

Melchers W. J.

a Coxsackievirus protein 2B módosítja az endoplazmatikus retikulum membránt és a plazmamembrán permeabilitását, és megkönnyíti a vírus felszabadulását.EMBO J. 16199735193532

68.6. o.

1. Wang X.,
2. Zelenski N. G.,
3. Yang J.,
4. Sakai J.,
5. Brown M. S.,
6. Goldstein J. L.

a szterin szabályozó elemet kötő fehérjék (SREBP-k) CPP32 általi hasítása apoptózis során.EMBO J. 15199610121020

69.D. O., Stingl L., Morrison C., Jantsch M.,

Los M., Schulze-Osthoff K., Wagner E. F.

a PARP fontos a genomiális stabilitás szempontjából, de apoptózisban nélkülözhető.Gének Dev.11199723472358

70.6. o.

1. Wattre P., Bert V., Hober D.

apoptózis és humán vírusfertőzések.Ann. Biol. Pislogj.541996189197

71.6. o., Fahrni J. A., Troie S., Guan J. L.,

Orth K.,

Rosen G. D.

a fokális adhéziós kináz kaszpázok általi hasítása apoptózis során.J. Biol. Kémia.27219972605626061

72.mno

1. Yalamanchili P.,
2. Banerjee R.,
3. Dasgupta A.

a poliovírussal kódolt proteáz 2apro hasítja a TATA-kötő fehérjét, de in vitro nem gátolja a gazdasejt RNS polimeráz II transzkripcióját.J. Virol.71199768816886

73.6. o.,

Datta U.,

Dasgupta A.

a gazdasejt transzkripciójának gátlása poliovírus által: a CREB transzkripciós faktor hasítása poliovírus által kódolt proteáz 3Cpro.J. Virol.71199712201226

74.

1. Yalamanchili P.,
2. Harris K.,
3. Wimmer E.,
4. Dasgupta A.

a bazális transzkripció gátlása poliovírus által: egy vírus által kódolt proteáz (3cpro) gátolja a TBP-TATA box komplex képződését in vitro.J. Virol.70199629222929

75.6. o.,

Jalamancsili P.,

Weidman K.,

Dasgupta A.

az Oct-1 transzkripciós aktivátor hasítása poliovírussal kódolt proteáz 3Cpro.Virológia 2391997176185

76.xhamsterként,

77.++

1. Yuan J.

a programozott sejthalál genetikai útvonalának evolúciós megőrzése.J. Sejt Biochem.601996411

78.6. évfolyam:

1. Yuan J.

Élet és halál Jelátvitele.Curr. Opin. Sejt Biol.91997247251

79.6. o.,

Zauli G.,

Gibellini D.

az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1) Tat fehérje és a Bcl-2 gén expressziója.Leuk. Lymphoma231996551560

80.6. o. zauli G.,

Gibellini D.,

Caputo A.,

Bassini A.,

Negrini M.,

Monne M.,

Mazzoni M.,

Capitani S.

a humán immundeficiencia vírus 1-es típusú Tat fehérje szabályozza a Bcl-2 gén expresszióját a Jurkat T-sejtvonalakban és a primer perifériás vér mononukleáris sejtjeiben.Blood86199538233834