áttekintés

a vas létfontosságú szerepet játszik a legtöbb szervezetben, mivel képes katalizálni az elektrontranszfert, amely a mitokondriumok metabolikus reakcióinak létfontosságú része az energiatermelés során. Ezenkívül emlősökben a vas a hemoglobin kulcsfontosságú összetevője, lehetővé téve az oxigén szállítását a szövetekbe a vörösvértesteken keresztül. A szabad vas potenciálisan mérgező, mivel képes katalizálni a káros szabad gyökök képződését. Emiatt a vas általában a fehérjékhez kötődik a hem csoportok vagy a vas-kén központok részeként a funkcionális aktivitás érdekében. A nem funkcionális vas kötődik a hordozó vagy tároló fehérjékhez, de lazábban kapcsolódhat más fehérjékhez labilis formában. Az emberi vaseloszlás gondos ellenőrzése nemcsak a rendelkezésre állást és a toxicitást szabályozza, hanem szerepet játszik az immunválaszban is. A fertőzés során a szervezet elkülöníti a rendelkezésre álló vasat, hogy megakadályozza annak használatát a baktériumok behatolásával, jelentősen korlátozva a növekedési és szaporodási képességüket.

a sejtekbe történő vasszállítás egyik kulcsvezérlője a CD71, más néven transzferrin receptor 1. Az 1. ábra összefoglalja annak szerepét a vas szövetfolyadékból vagy plazmából a sejtbe történő szállításában. A” szabad ” vas Fe(III) formájában kötődik a transzferrinhez, amely maga a membránhoz kötött CD71 ligandumává válik. Az Fe (III)-transzferin-CD71 komplexet ezután endoszómává teszik, amelyet ionszivattyúk hatására megsavanyítanak. A savas környezetben a komplex disszociál komponenseire. A CD71 és a transzferrin visszakerül a felszínre, míg a FE(III) A METALLOPROTEÁZ STEAP3 aktivitása révén Fe (II) – re redukálódik. A FE (II) ezután exportálható az endoszómából a dmt1 fehérjével (kétértékű fém transzporter 1). A citoplazmában az Fe(II) társulhat a ferritinnel, és tárolható későbbi felhasználás céljából; feldolgozható a mitokondriumokban hemcsoportok és fe-s vegyületek szintéziséhez; vagy a ferroportin hatására visszakerülhet az extracelluláris környezetbe. A fe(II) ferroportin általi felszabadulását negatívan szabályozza a hepcidin hormon a májból, például gyulladás során, hogy korlátozza a vas elérhetőségét a kórokozók számára. A felszabadult Fe(II) vas ezután plazmafehérjék, például ceruloplasmin segítségével átalakítható Fe(III) formává.

ábra. 1. Az 1. transzferrin receptor szerepe a vas sejtekbe történő szállításában.

vas transzport vizsgálata

A Bio-Rad számos antitestet értékesít a vas homeosztázisában részt vevő fehérjék ellen.

Target	Human	Mouse	Rat
CD71/TfR1	MCA1148, MCA2775, VMA00037	MCA1033, MCA2474	MCA155
Transferrin	9100-0004, 9100-1055, AHP081, AHP1757, AHP858, VMA00578, VPA00797	AHP081	9100-1055, AHP081
Ferritin	4420-4804, 4420-3010, 4420-3904GA, 4420-4804, AHP2179, OBT1639
Ceruloplasmin
Proerythroblasts / Erythrocytes	MCA506G	MCA6044G

Flow Cytometry Analysis of Key Iron Transport Marker CD71

Rat Anti-Mouse CD71 Antibody, clone 8D3 recognizes mouse CD71, a 763 amino acid ~95 kDa single pass type II transzmembrán glikoprotein sejtfelszín, más néven transzferrin receptor. A CD71 az eritroid vonal sejtjein expresszálódik, de az érett eritrociták többségéből hiányzik. A 8D3 klón felismeri az egér cd71 natív, oldható és denaturált formáit. A 8D3 antitest CD71-hez való kötődése nem befolyásolja a vas sejtekbe történő felvételét. Patkány anti-egér TER-119 / eritroid sejtek antitest, a ter-119 klón felismeri a TER-119-et, más néven Ly-76-ot. A TER-119 klón 52 kDa fehérjét észlel, amely a sejtfelszín expresszált glikoforin A-hoz kapcsolódik. A TER-119 egy eritroid-specifikus antigén, amelyet a korai proeritroblaszttól az érett eritrocita stádiumig expresszálnak. Ez az antigén kisebb mértékben expresszálódik a csontvelősejtek 20-25% – án és a lépsejtek 2-3% – án. Ezeket a kulcsfontosságú markereket együtt alkalmazták az áramlási citometriában (2.Ábra), hogy megmutassák a fe importhoz szükséges CD71-et a hemoglobin szintetizálásához TER-119 pozitív proeritroblasztokban.

ábra. 2. Cd71 és TER-119 egér Tron transzport markerek áramlási citometriás elemzése. A, rpe konjugált patkány anti-egér TER-119 (MCA6044PE) antitest és FITC konjugált patkány IgG2a Izotípus kontroll (MCA1212F). B, rpe konjugált patkány anti-egér TER-119 (MCA6044PE) antitest és FITC konjugált patkány anti-egér CD71 (MCA2474F) antitest. Az egér csontvelőjén végzett összes kísérlet. A ZE5-ösön szerzett adatok! cell Analyzer.