Ez az első az E. coli transzformációjáról szóló három részből álló sorozatban. Ennek végére szakértőnek kell lennie az E. coli transzformációban, és mely törzseket kell választani a különböző alkalmazásokhoz. Ha már szakértő vagy, remélem, hogy élvezetes frissítő lesz az Ön számára. Bármelyik esetben, kérjük, kommentálja alább, ha van valami hozzáfűznivalója.

villamos energia felhasználása transzformációhoz

idegen DNS-t elektroporációval vagy kémiai transzformációval lehet bevinni az illetékes E. coliba. Elektroporáció használata esetén elektromos áramot alkalmaz a cellán. Úgy gondolják, hogy az áram pillanatnyi “pórusokat” hoz létre a sejtmembránokban, amelyek elektroforézis típusú hatással kényszerítik a negatív töltésű DNS-t a sejtekbe. Az elektro-Kompetens E. coli előállításához alaposan mossa le a sejteket az összes közepes só eltávolításához. Ez biztosítja, hogy a töltés ne a közegen keresztül történjen. Ezenkívül hajtsa végre az elektroporációt 0CC-n, hogy minimalizálja a sejtek hőkárosodását.

vegyi anyagok: ők is működnek

kémiailag Kompetens sejtek előállításához, az E. coli-t CaCl2 oldatban reszuszpendálják 0 6CC-nél. Ilyen körülmények között úgy gondolják, hogy a Ca2+ ion pórusokat hoz létre a membránban, segíti a DNS kötődését a sejtmembránhoz, és elfedi a DNS negatív töltését. Ezek együttesen megkönnyítik a DNS átjutását a hidrofób sejtmembránon keresztül. Kényszerítse a DNS-t a sejtekbe egy rövid alkalmazásával 42cc hősokk, ami hőáramot eredményez, amely a DNS-t a sejtekbe söpör.

mindegyik előnye és hátránya

az elektroporáció kevésbé nehézkes, mint a kémiai átalakulás, és általában nagyobb transzformációs hatékonyságot eredményez (mikrogramm DNS-enként képződött kolóniákban mérve). Ez azonban drágább. Speciális berendezésre van szükség a töltés leadásához, a küvettákra pedig a töltés átviteléhez a sejtszuszpenzióhoz. Az elektroporáció érzékeny a sóra-értékes mintákat veszíthet, ha a felesleges sót átviszik a küvettába.

személy szerint én inkább a kémiai átalakítást részesítem előnyben. Bár körülbelül fél órával tovább tart, úgy találom, hogy az eredmények kiszámíthatóbbak, és szeretem azt a tényt, hogy nagyobb mennyiségű DNS adható hozzá, ha a koncentráció túl alacsony. Elektroporációval nem növelheti a DNS térfogatát, mert fennáll annak a veszélye, hogy túl sok sót ad az oldathoz. Bár a kémiai transzformáció gyakran idézett hátránya az alacsonyabb hatékonyság, most már vásárolhat ultra-Kompetens sejteket, mint például a Stratagene XL10-gold, így ez már nem annyira probléma.

cikkek ebben a sorozatban:

• E. coli elektroporáció vs kémiai átalakulás (ez a cikk)
• illetékes E. coli: vásárolni vagy nem vásárolni?
• kiválasztása illetékes E. coli törzs

eredetileg megjelent szeptember 18, 2007. Felülvizsgált és frissített július 11, 2016.