eredmények
ALDH1 expresszió embrionális és felnőtt hasnyálmirigyben.
a neurális, hematopoietikus és emlő epithelialis progenitorokban (17-19) magas ALDH1 enzimaktivitást dokumentáló korábbi vizsgálatok alapján az ALDH1 fehérje expressziójának időbeli és térbeli mintáit jellemeztük embrionális és felnőtt egér hasnyálmirigyben (ábra. 1). Az E-kadherint a hasnyálmirigy hámsejtjeinek markereként használva azt találtuk, hogy az ALDH1 fehérje először kimutatható a fejlődő hasnyálmirigy-hámban az E12.5-en (ábra. 1A). Ezen a ponton az expresszió az elágazó tubulusok csúcsaira korlátozódik, amelyeket nemrégiben javasoltak egy multipotenciális progenitor domén képviseletére (20). Hasonló kifejezési mintáról korábban beszámoltak az Aldh1a1 átiratokról (21). A cső alakú csúcsokban (és nem a központi törzsekben) a kifejezés az E14.5-en keresztül is fennáll (ábra. 1 B és B’), és ezt követően az acináris sejtek differenciálásában le van szabályozva. Felnőtt hasnyálmirigyben az epithelialis ALDH1 expresszió leggyakrabban a centroacinaris és terminális ductalis epithelialis sejtekben figyelhető meg (ábra. 1 C-E). Mezenchimális (E-kadherin-negatív) ALDH1-expresszáló sejteket is kimutattak a környező endokrin szigetek és exokrin acini (ábra. S1).
ALDH1 expresszió embrionális és felnőtt egér hasnyálmirigyben. (A–C) az ALDH1 fehérje (zöld) immunfluoreszcens jelölése E-kadherinnel (piros) kombinálva az epitheliális struktúrák megjelölésére az E12.5 (A), E14.5 (B és B’) és a felnőtt egér hasnyálmirigyében (C). A (B’) kép a (B) rovatban jelzett terület nagyobb nagyítású nézetét jelenti. Megjegyzés: az ALDH1 expresszió korlátozása az epitheliális ágak csúcsaira (csillagokkal jelölve B’-ben), nem pedig a középső ágtörzsekre (csillaggal jelölve). Felnőtt hasnyálmirigyben (C) az ALDH1 expresszió az e-kadherin-pozitív centroacináris sejtek egy részhalmazára korlátozódik. (D és E) ALDH1 fehérje (barna) immunhisztokémiai kimutatása centroacináris (nyilak) és terminális csatornasejtek (nyílhegyek) részhalmazaiban. (Scale bars: 50 db.)
az ALDH1 expresszió és az ALDH1 enzimatikus aktivitás további jellemzésére felnőtt terminális csatornákban / centroacináris sejtekben perifériás acinar-ductalis egységek készítményeit használtuk frissen izolálva kollagenázzal emésztett egér exokrin hasnyálmirigyéből (22). Fontos, hogy ezek az izolált perifériás acinar-ductalis egységek jelentősen kimerültek a nagy csatornákból és az endokrin elemekből. A teljes hasnyálmirigyhez képest a perifériás acinar-ductalis egységek >400-szoros kimerülést mutattak az inzulin transzkriptumokban, RT-PCR-rel értékelve (ábra. S2A). Amikor a FACS analízist transzgenikus Ins1-ből betakarított perifériás acinar-ductalis egységeken végeztük:dsred egerek, amelyek vörös fluoreszcens fehérjét expresszálnak az Alzheimer-sejtekben, ebből a készítményből csak 3 10 000 sejt (0,03%) volt pozitív a dsred szempontjából.
az ALDH1 fehérje expressziójának további háromdimenziós jellemzését izolált perifériás acinar-ductalis egységek teljes körű fluoreszcens jelölésével hajtottuk végre. Az ALDH1 fehérjét az epiteliális sejtek markereként E-kadherinnel, ill.FITC-konjugált Dolichos biflorus agglutininnel (DBA) vagy FITC-konjugált földimogyoró agglutininnel (PNA), a ductalis és acinaris sejtek markereivel kombinálva lokalizálták. A többcsatornás képalkotás megerősítette az ALDH1-expresszáló hámsejtek túlnyomórészt centroacináris/terminális ductalis helyét a felnőtt hasnyálmirigyben (ábra. S3). Az ALDH1-expresszáló sejteket leggyakrabban a terminális ductalis epithelium és a perifériás acinaris sejtek között helyezték el. Ezenkívül egyetlen epitheliális ALDH1-expresszáló sejteket is megfigyeltünk közvetlenül a terminális ductalis epithelium mellett (ábra. S3 A és B). Mind a DBA-pozitív, mind a DBA-negatív ALDH1-pozitív sejteket azonosították, míg az ALDH1-pozitív PNA-pozitív sejteket csak ritkán azonosították.
ALDH1-expresszáló Centroacináris és terminális ductalis sejtek izolálása.
abban a reményben, hogy az ALDH1-expresszáló sejteket izoláljuk a felnőtt egér hasnyálmirigyéből, kihasználtuk az “Aldefluor” (StemCell Technologies) néven ismert fluorogén szubsztrátot, amelyet korábban a hematopoietikus, neurális és emlő epitheliális őssejtek FACS-alapú izolálásában használtak (17-19). Mielőtt megkísérelnénk az ALDH1-expresszáló hasnyálmirigy hámsejtjeinek FACS-alapú izolálását, először ezt a reagenst alkalmaztuk az ÉLŐ ALDH1-expresszáló sejtek megjelenítésére perifériás acinar-ductalis egységekben (ábra. 2). Amint az ábrán látható. 2 E és F, ezek a vizsgálatok megerősítették az alacsony abundanciájú Aldefluor-pozitív sejtek centroacináris/terminális ductalis elhelyezkedését felnőtt egér hasnyálmirigyében. Az Aldefluor-pozitív centroacinar / terminális ductalis sejtek kis méretük és a zimogén granulátum hiánya miatt könnyen megkülönböztethetők a szomszédos acinar sejtektől. Az Aldefluor reagenssel végzett élő sejtes képalkotás további példái az ábrán találhatók. S4. Ezek az eredmények azt sugallták, hogy az anti-ALDH1 immunfluoreszcencia és az Aldefluor-alapú citofluoreszcencia hasonló centroacinar/terminális ductalis populációt jelöl, és azt is sugallták, hogy ezeket a sejteket sikeresen izolálhatják a FACS-k.
ALDH1-expresszáló centroacináris/terminális ductalis hámsejtek FACS izolálása Aldefluor reagens alkalmazásával. A FACS válogatást az endokrin és nagy csatornaelemekből kimerült perifériás acinar-ductalis egységekből izolált egyetlen sejten végeztük. (A és B) Aldefluor-pozitív sejtek Kapuzása DEAB-érzékeny ALDH1 enzimaktivitás alapján. az y tengely az oldalsó szórást jelzi; az x tengely az Aldefluor jel intenzitását jelzi (A) DEAB nélkül és (B) nélkül. (B és C) ALDH1 enzimaktivitás kimutatása (C) DEAB-val és (D) DEAB nélkül, az e-kadherin fehérje felületi detektálásával együtt. az y tengely az APC-konjugált Anti-e-kadherin antitesttel történő címkézés intenzitását jelenti; az x tengely az Aldefluor jel intenzitását jelzi. A D-ben P2, P3, P4 és P5 jelzésű FACS-válogatott populációk Aldefluor-pozitívnak, E-kadherin− negatívnak (A+E -), Aldefluor-pozitívnak, E-kadherin-pozitívnak (A+E+), Aldefluor-negatívnak, E-kadherin−pozitívnak (A-E+), Aldefluor-negatívnak, E-kadherin−negatívnak (A− E+), illetve Aldefluor-negatívnak, E-kadherin-negatívnak (A-E -) felelnek meg. (E és F) a kollagenázzal emésztett egér hasnyálmirigy Aldefluor reagenssel történő képalkotása megerősíti az Aldefluor-pozitív sejtek centroacináris/terminális ductalis lokalizációját, hasonlóan az ALDH1 immunfluoreszcenciához (ábra. 1 és 2). Megjegyzés centroacináris / terminális ductalis helyzet és az Aldefluor-pozitív sejtek kis mérete a nagyobb acináris sejtekhez képest, amelyek könnyen azonosíthatók az apikális zimogén granulátumnak megfelelő szemcsés citoplazmával. (Scale bars: 50 db.) (G) a génexpresszió kvantitatív RT-PCR analízise a+e+ sejtekben (piros), A+E sejtekben (fehér), A+E sejtekben (kék) és a− e sejtekben (fekete). Az A−E+ aldefluor-negatív hámsejtekkel összehasonlítva az A+ E + aldefluor-pozitív centroacinar/terminális ductalis hámsejtek dúsulnak az Aldh1a1, Aldh1a7, Sca1, Sdf1, c-Met, Nestin, Ptf1a és Sox9 kódolású transzkriptumok számára. (Scale bars: 50 db.)
Aldefluor-pozitív centroacináris/terminális ductalis sejtekből származó pancreatospheres képződése, differenciálódása és működése. (A és B) A+E+ centroacinar/terminális ductalis hámsejtek, de nem a−E+ hámsejtek, hatékonyan pancreatospheres szuszpenziós tenyészetben. (C–G) expressziója E-kadherin (C), inzulin C-peptid (D), amiláz (E), Sox9 (F) és ALDH1 (G) a 7.napon pancreatospheres képződött A+E+ centroacinar/terminális ductalis hámsejtek. (H) sejtproliferáció a 7.napon pancreatospheres értékelve egynapos beépítése EdU adunk 6. napon tenyészidőszak. (I) a tárolt és szekretált inzulin C-peptid ELISA-alapú vizsgálata pancreatospheres vagy Ins-1 sejtek egynapos inkubálását követően, különböző koncentrációjú glükózban. Vegye figyelembe, hogy a pancreatospheres glükózérzékenységet mutat, hasonlóan az Ins-1 sejtekben megfigyelthez (pl., A szekretált C-peptid 2-szeres növekedése 0 vs.11 mM glükózra adott válaszként). (Scale bars: 100 db.)
ezután a perifériás acinar-ductalis egységektől disszociált egyes sejtek FACS-alapú jellemzését és rendezését folytattuk. Az ALDH1-expresszáló sejtek specifikus kapuzásának kezdeti eszközeként az ALDH1 enzimatikus aktivitásának (DEAB) farmakológiai inhibitorát alkalmaztuk. Ábrán látható módon. 2 A-D, Ez a stratégia lehetővé tette egy alacsony abundanciájú sejtpopuláció izolálását, amelyet a deab-érzékeny ALDH1 enzimatikus aktivitás magas szintje jellemez, amely 0,9%-ot tartalmaz! 0.A felnőtt egér hasnyálmirigyében az összes rendezett sejt 2% – a. E-cadherin antitest alkalmazásával a hámsejtek egyidejű azonosítására az Aldefluor (+) e-cadherin (+) sejtek a felnőtt egér hasnyálmirigyében az összes rendezett sejt 0,5% – át képviselik 0,13% (ábra. 2D).
kvantitatív RT-PCR-rel összehasonlítva az Aldefluor-pozitív, E-kadherin-pozitív (A+E+), Aldefluor-negatív, E-kadherin−pozitív (A+ E -), Aldefluor-pozitív, E-kadherin− negatív (A+E -) populációkat felnőtt egér hasnyálmirigyéből izolálva azt találtuk, hogy az A+E+ populáció jelentősen gazdagodott a transzkriptumok kódolásához aldh1a1 és aldh1a7, és kimerült átiratok két másik aldh1 izoformák, aldh1a2 és Aldh1a3 (ábra. 3G). Az Aldh8a1-et egyik mintában sem mutatták ki. Az A−E+ populációval összehasonlítva az A+E+ sejtek mérsékelten kimerültek a pdx1 (P < 0,09), az amiláz (P < 0,001) és a citokeratin-19 (P < 0,01) (markerek kifejezett differenciált sejtek, acinaris sejtek, illetve csatorna sejtek). Ezzel szemben az A+E+ sejteket a Ptf1a magas szintű expressziója jellemezte, annak ellenére, hogy mind az amiláz transzkriptumokból, mind az amiláz fehérjéből kimerültek (ábra. 3G és Fig. S5). Ezenkívül ezeket a sejteket dúsították az Sca-1, SDF1, c-Met, Nestin, Sox9, Hey1 és Hey2 transzkripciókkal, amelyek korábban a hasnyálmirigy és más szövetek progenitor populációihoz kapcsolódtak. A FACS-válogatott sejtek citospin Prep-jeinek immunfluoreszcens címkézésével megerősítettük az ALDH1 és Sox9 fehérje jelentős dúsulását, valamint az amiláz kimerülését az A+E+ sejtekben (ábra. S5). Ezenkívül elvégeztük a FACS analízist annak meghatározására, hogy az Aldefluor (+) sejtek milyen gyakorisággal voltak pozitívak az őssejtek markerei, például a CD133 és az Sca-1 fehérje szempontjából, és megfigyeltük, hogy az Aldefluor (+) sejtek több mint 90% – a emellett mindkét őssejt markereket együtt expresszálta. Ezzel szemben az Aldefluor (+) sejtek csak 0,11% – a volt pozitív a vascularis endotheliális marker PECAM szempontjából, míg 0,08% volt pozitív a hematopoietikus marker CD45 szempontjából. Amikor a FACS analízist transzgenikus Ins1-DsRed egerekből begyűjtött perifériás acinar-ductalis egységeken végezték, amelyek vörös fluoreszcens fehérjét expresszáltak a 6-sejtekben, az összes Aldefluor ( + ) sejt negatívnak bizonyult a dsRed szempontjából.
endokrin és exokrin Progenitor funkció Pancreatosphere vizsgálata.
a progenitor-szerű aktivitás kezdeti szűrőjeként megvizsgáltuk az Aldefluor (+) és az Aldefluor (–) sejteket a pancreatospheres képződésének képessége szempontjából (ábra. 3), hasonlóan a neurális progenitorok azonosítására általánosan használt neurosféra-vizsgálathoz (23). Ezekben a vizsgálatokban az A+E+ centroacinar/terminális ductalis sejtek egyedülállóan képesek voltak gömböket képezni szuszpenziós tenyészetben. Az A + E + cellák gömbképző hatékonyságot mutattak >100-szorosa az A-E + társaikénak (ábra. 3 A és B és S1 táblázat). Alacsonyabb hatékonysággal az egyes A + E + sejtek még gömböket is képesek voltak kialakítani, amikor klonális sűrűséggel (kútonként egy sejt) bevonják 96 lyukú lemezeken (S1 táblázat). Az E-kadherin-negatív populációk egyike sem mutatott jelentős gömbképző képességet. 5-7 napos időszak alatt tenyésztve az A+E+ sejtekből származó pancreatospheres erős expressziót mutatott E-kadherin (ábra. 3C), megerősítve epithelialis azonosságukat, és a gömbökben lévő egyes sejtek jelentős mennyiségű amilázt vagy inzulint és inzulin C-peptidet (ábra. 3 D és E). Az 5. napon a pancreatospheres 50% – a amiláz expressziót mutatott, míg mintegy 30%-uk immunreaktivitást mutatott az inzulin C-peptidre. Az egyes gömbök általában pozitívak voltak az inzulin vagy az amiláz szempontjából, de nem mindkettő. A gömbökben lévő sejtek kis részhalmazai fenntartották az ALDH1 expressziót a tenyészidőszak alatt, valamint bizonyították a Sox9 fehérje nukleáris expresszióját (ábra. 3 F és G), ami egy önmegújuló progenitor medence lehetséges fenntartására utal. Ezt a látszólagos önmegújulási képességet tovább támasztotta alá az a tény, hogy az Aldefluor (+) centroacinar/terminális ductalis sejtek által generált pancreatoszférákat soros enzimatikus disszociációnak lehet alávetni, megtartva gömbképző kapacitásukat legalább három egymást követő szakaszon keresztül, 7 napos időközönként. Ezenkívül a gömbökön belüli sejtek erősen proliferatívak voltak, amint azt a tenyészidőszak elején vagy végén hozzáadott Edu egyik napról a másikra történő beépítésével értékelték (ábra. 3 óra).
Az A+E+ sejtek által megjelenített különálló progenitor kapacitások alapján tovább vizsgáltuk a rendezett sejtpopulációkat az Ngn3 expressziójához, az endokrin progenitor sejtek markeréhez (ábra. S2B). A korábbi vizsgálatokkal összhangban (7) nem tudtuk kimutatni az Ngn3 jelentős expresszióját sem a teljes felnőtt hasnyálmirigyben, sem a frissen válogatott sejtpopulációk bármelyikében. Azonban, miután az A+E+ sejteket tenyészetbe helyezték, elkezdték kimutatni az Ngn3 expresszióját közvetlenül az inzulin expresszió kezdete előtt, tovább megerősítve az ALDH1-expresszáló centroacináris és terminális ductalis hámsejtek endokrin progenitor kapacitását.
az Aldefluor (+) terminális ductalis / Centroacinaris sejtekből származó Pancreatoszférák glükózra reagáló inzulinszekréciót mutatnak.
az inzulint és az inzulin C-peptidet expresszáló sejtek kimutatása a tenyésztett pancreatospheresekben arra késztette az értékelést, hogy ezek a sejtek képesek-e glükózra reagáló inzulinszekrécióra, ami a funkcionális sejtek jellemzője. Pozitív kontrollként az Ins-1 sejteket (832/13 klón) egy immortalizált sejtvonalat használtunk, amelyet általában az inzulinszekréció vizsgálatára használnak a glükóz fiziológiai koncentrációira reagálva. A pancreatospheres vagy Ins-1 sejtek 0, 5 és 11 mM-es glükózban történő egynapos inkubálását követően mind a táptalaj felülúszóit, mind a sejtlizátumokat begyűjtötték, és ELISA-alapú vizsgálattal megvizsgálták a szekretált és celluláris inzulin C-peptidjét. Pancreatospheres származó Aldefluor ( + ) centroacinar/terminális ductalis sejtek szekretált C-peptid egy glükóz-függő módon, a glükóz érzékenység hasonló által megjelenített Ins-1 sejtek (ábra. 3I).
az Aldefluor (+) felnőtt terminális ductalis / Centroacinaris sejtek hozzájárulhatnak az embrionális endokrin és exokrin vonalakhoz.
a hasnyálmirigy progenitor aktivitásának még szigorúbb tesztjeként izolált Aldefluor (+) és Aldefluor (–) sejteket mikroinjektáltunk az E12.5 egérembriókból izolált mikrodisszektált háti hasnyálmirigy rügyekbe, és megvizsgáltuk, hogy képesek-e produktív módon hozzájárulni a fejlődő endokrin és exokrin vonalakhoz (ábra. 4). Ezt a megközelítést nemrégiben alkalmazták a hasnyálmirigy-csatorna lekötése után keletkező Ngn3-expresszáló sejtek progenitor aktivitásának dokumentálására (7). A felnőtt eredetű donorsejtek vonalának nyomon követése és az embrióból származó társaiktól való megkülönböztetése érdekében izoláltuk az aldefluor (+) és Aldefluor (-) sejteket az egerek hasnyálmirigyéből, amelyek mindenütt expresszált pCAG – t hordoznak:mCherry transgene, az ábrán vázlatosan ábrázolva. 4A (pCAG: a mCherry egereket kedvesen biztosította Michael Wolfgang, a Johns Hopkins Egyetem). Az Aldefluor (–) sejtekkel összehasonlítva az Aldefluor (+) sejtek drámai módon fokozott potenciállal rendelkeztek, hogy hozzájáruljanak a kialakuló endokrin vonalakhoz az érlelő hátsó rügyekben, amint azt a mcherry bármelyik C-peptiddel történő együttes expressziója bizonyítja (ábra. 4 B-E) vagy glukagon (ábra. 4 F-I). Az egymásra helyezett e-kadherin címkézéssel lehetővé tettük az egyes mcherry-pozitív sejtek számlálását, kvantitatív módon értékeltük a felnőtt Aldefluor (+) és Aldefluor (−) sejtek embrionális vonalba lépésének képességét. Hét nappal az Aldefluor (+) sejtek E12-be történő mikroinjekcióját követően.5 háti rügyek, a glukagon expresszióját a maradék mcherry pozitív sejtek 11,7%-ában figyelték meg, az inzulin C-peptid expresszióját további 11,6% – ban figyelték meg (ábra. 5N). Ezzel szemben a maradék Mcherry-pozitív Aldefluor (−) sejtek 2,4%-a expresszált glukagont, és csak 0,2% – a expresszált inzulin C-peptidet. Érdekes módon az Aldefluor ( + ) és az Aldefluor ( – ) populációk egyenértékű képességeket mutattak a nemendokrin epitheliális vonalakba való bejutáshoz, talán tükrözve azt a tényt, hogy az Aldefluor ( – ) populáció nagy része már differenciált acináris sejtekből állt. Az e-kadherin, amiláz és PNA pozitivitás hasonló gyakoriságát figyelték meg az Aldefluor (+) vagy Aldefluor (-) populációkból származó maradék mcherry – pozitív sejtekben (ábra. 4 J-N).
az Aldefluor-pozitív felnőtt hasnyálmirigy-sejtek mind endokrin, mind exokrin vonalakba lépnek a tenyésztett embrionális hasnyálmirigyben. A) A kísérlet vázlata. A felnőtt sejtek származásának nyomon követésére az Aldefluor ( + ) és az Aldefluor ( – ) sejteket izoláltuk a felnőtt CAG:mcherry transzgenikus egér hasnyálmirigyéből, mikroinjekcióval az E12-ből izolált mikrodisszektált háti hasnyálmirigy rügyekbe.5 nem transzgenikus egér embriók, és azt vizsgálták, hogy képesek-e produktív módon hozzájárulni a fejlődő endokrin és exokrin vonalakhoz. (B-J) A mcherry és az inzulin C-peptid (B–E), valamint a mCherry és glukagon (F–I) együttes expressziója megerősíti a felnőtt Aldefluor ( + ) sejtek azon képességét, hogy hozzájáruljanak az embrionális és a sejtvonalhoz, míg az egyes MCHERRY – pozitív sejtek FITC-konjugált PNA-val (J-M) történő jelölése megerősíti az embrionális acináris vonalhoz való hozzájárulás képességét. (N) a maradék mcherry-pozitív felnőtt Aldeflouor ( + ) és Aldefluor ( − ) sejtek C-peptid inzulin, glukagon, E-kadherin és PNA jelölésére szolgáló gyakoriságok 7 nappal a mikrodisszektált E12.5 háti hasnyálmirigy rügyekbe történő mikroinjekció után. Az összes sejtszámot e-kadherin címkézéssel határoztuk meg az egyes sejtek határának körvonalazására. Megjegyezzük, hogy az endokrin differenciálódás képessége túlnyomórészt az Aldefluor (+) populációra korlátozódik, míg mind az Aldefluor ( + ), mind az Aldefluor (−) sejtek produktívan hozzájárulhatnak az exokrin vonalak kialakulásához. (Scale bars: 50 db.)
az ALDH1-expresszáló centroacinaris és terminális ductalis epithelialis sejtek expanziója krónikus gyulladás és regeneratív epithelialis metaplasia esetén. Az antigén kinyerését követően az ALDH1 fehérjét immunhisztokémia alkalmazásával detektálták a normál felnőtt hasnyálmirigy (A és B) és a krónikus pancreatitisben szenvedő egerekből begyűjtött hasnyálmirigy szövetein, melyeket heti három caerulein (C–H) injekció indukált. (A és B) az ALDH1 alacsony frekvenciájú jelölése a normál felnőtt hasnyálmirigy terminális ductalis (TD) hámsejtjeiben. (C and D) Expansion of ALDH1-expressing terminal ductal epithelium following sequential caerulein administration. (E and F) Similar expansion of ALDH1-expressing centroacinar cells (CAC) following sequential caerulein administration. (G and H) Expression of ALDH1 in caerulein-induced metaplastic type 2 (TC2; H), but not type 1 (TC1; G) tubular complexes.
Expansion of ALDH1-Expressing Centroacinar and Terminal Duct Cells Following Chronic Epithelial Injury.
az ALDH1-expresszáló centroacináris és terminális csatornasejtek in vivo viselkedésének értékeléséhez az ALDH1 expresszió mintáit vizsgáltuk krónikus gyulladás és regeneratív metaplasia esetén, amelyet alacsony dózisú caerulein szekvenciális beadása indukált. Amint arról korábban beszámoltunk (15), felnőtt egerek kezelése heti három caerulein injekcióval (50 Ft/kg) 3 egymást követő héten keresztül krónikus pancreatitis állapotot váltott ki, amelyet majdnem teljes regeneráció és helyreállítás követett. Ezt a folyamatot gyulladásos infiltrátumok, stromális expanzió és regeneratív metaplasztikus tubuláris komplexek kialakulása jellemzi, amelyek magukban foglalják az 1-es típusú tubuláris komplexeket, amelyekről korábban kimutatták, hogy acináris sejtekből származnak, és a 2-es típusú tubuláris komplexeket (TC2), amelyekről korábban kimutatták, hogy nonacináris származékok, és feltehetően proliferáló terminális csatornasejtekből származnak (15). Ellentétben a normál felnőtt hasnyálmirigyben megfigyelt ALDH1-expresszáló terminális csatorna és centroacináris sejtek viszonylag alacsony bőségével (ábra. 5 A és B), ALDH1-expresszáló terminál csatorna (ábra. 5 C és D) és centroacináris (ábra. 5 az e és F) sejtek jelentősen kitágultak a caerulein által kiváltott krónikus pancreatitis esetén. Megjegyzendő, hogy a 2-es típusú tubuláris komplexek túlnyomórészt ALDH1-expresszáló sejtekből álltak (ábra. 5H), míg az 1. típusú tubuláris komplexek nem mutattak bizonyítékot az ALDH1 expresszióra (ábra. 5G).
