keringő sejtekszerkesztés
az izolált sejtek előállításához szükséges technikák a szükséges cellatípustól függően változhat. A keringő sejtek, például a vérsejtek vagy egyes tumorsejtek vérmintával izolálhatók. Mivel a vérminták sokféle sejttípus keverékét tartalmazzák, a sejtek különböző típusokra történő elválasztásának módszerét kell alkalmazni. Ennek leggyakrabban alkalmazott módszere az áramlási citometria, amelynek során egy automatizált analizátor szűk sejtáramot vizsgál. Ennek a technikának az egyik változatában fény ragyog a sejtáramon, és az analizátor érzékeli a visszavert fényt vagy fluoreszcenciát, mielőtt ezt az információt felhasználná az érdekes sejtek gyors mozgatására egy gyűjtőkamrába.
szilárd szövetekszerkesztés
ha szilárd szövetekkel foglalkozunk, a sejtek izolálására szolgáló szövetek megszerzése nagyobb kihívást jelenthet. A tervezett műtét idején néha többlet emberi szövet nyerhető, például a jobb pitvari függelék mintáit gyakran kivágják és eldobják a nyitott szívműtét során, mint például a koszorúér bypass műtét. Más szöveteket, például hasnyálmirigy-vagy hólyagmintákat lehet biopsziának venni. Alternatív megoldásként az állatokból származó szövetet gyakran az állat feláldozásával nyerik.
a szövetmintát a sejtek életben tartásához szükséges sókat és tápanyagokat tartalmazó megfelelő hőmérsékletű oldattal kell körülvenni vagy perfundálni. Ezt úgy hajthatjuk végre, hogy a szövetet egyszerűen az oldatba merítjük, vagy összetettebb elrendezéseket, például Langendorff perfúziót foglalhatunk magában. Az általánosan használt oldatok közé tartozott a Tyrode oldat vagy a Krebs és a Henseleit oldat módosítása ezek az oldatok pontos elektrolit-koncentrációkat tartalmaznak, beleértve a nátriumot, a káliumot, a kalciumot, a magnéziumot, a foszfátot, a kloridot és a glükózt. Ezen elektrolitok koncentrációját gondosan ki kell egyensúlyozni, ügyelve az ozmotikus nyomásra. Az oldat savasságát szabályozni kell, gyakran pH-puffer, például HEPES alkalmazásával. A sejtek izolálása egyes szövetekből javítható az oldat oxigénellátásával. A kezdeti szakaszokban a szövet perfúziója olyan oldattal, amely nem tartalmaz kalciumot, különösen akkor hasznos, ha a szív myocytáit izoláljuk, mivel a kalcium hiánya az interkalált lemezek elválasztását okozza.
ezután proteolitikus enzimeket adhatunk az oldathoz. A kollagént emésztő enzimeket (kollagenázokat) gyakran használják a sejtek szívből vagy hólyagból történő izolálásakor. Általános célú enzimek, amelyek sokféle fehérjét (proteázokat) emésztenek, szintén használhatók. A sejtek agyszövetből történő izolálásakor más enzimekre lehet szükség, amelyek lebontják a DNS-t (Dnaázokat).
Ezek az enzimek az extracelluláris mátrix emésztése mellett más fontos fehérjéket is emészthetnek, amelyek nélkülözhetetlenek az érdekes sejtek működéséhez. Ha a sejtek túl sokáig vannak kitéve ezeknek az enzimeknek, akkor sejthalál következik be, de ha nem elég hosszú ideig vannak kitéve az enzimeknek, akkor az extracelluláris mátrix emésztése nem lesz teljes. Miután az enzimeket eltávolították a szövetből egy második, enzimeket nem tartalmazó oldattal történő perfúzióval, a sejtek mechanikusan elválaszthatók vagy disszociálhatók. A sejtek disszociálásának egyszerű technikája magában foglalja a szövet apró darabokra vágását, mielőtt a darabokat egy pipettával oldatban keverné.
