cDNS klónozás

az RNS reverz transzkripciója komplementer DNS-re (cDNS) az első lépés számos molekuláris biológiai munkafolyamatban, beleértve a valós idejű PCR-t használó génexpressziós vizsgálatokat, a génklónozást és a cDNS könyvtárak létrehozását.

a cDNS könyvtár olyan klónozott DNS-szekvenciák gyűjteménye, amelyek kiegészítik az adott sejtből vagy szövetből kivont mRNS-t. A könyvtár csak az átírt szekvenciákat képviseli egy adott mintán belül, és rengeteg információt szolgáltathat az egyes gének azonosságáról és funkcionalitásáról. a cDNS könyvtárak betekintést nyújtanak a mintában előállított RNS bőségébe is, mivel minél több mRNS expresszálódik, annál több cDNS keletkezik.

a cDNS könyvtárak felépítésekor elengedhetetlen, hogy a cDNS klónok reprezentatívak legyenek az eredeti RNS populációra, mind teljes hosszukat, mind relatív bőségüket tekintve. Ez azt jelenti, hogy az ebben a lépésben alkalmazott reverz transzkriptáz kiválasztása kritikus fontosságú. A cDNS-ek klónozásakor és a cDNS könyvtárak létrehozásakor javasoljuk az UltraScript és az UltraScript 2.0 termékcsaládot. Ezek a rendkívül aktív és termostabil enzimek képesek teljes hosszúságú cDNS-termék szintetizálására, még korlátozott mennyiségű RNS-sel, alacsony mennyiségben kifejezett vagy nagyfokú másodlagos szerkezetű RNS-sel is.