a sárgarépa (Daucus carota) egy télen fűszerezett kétéves növény, amelyet ehető taprootja miatt termesztenek. Ez az egyik leginkább fogyasztott és termelt zöldség, mert az étrendi változatosság a szín, íz, rost, és a-vitamin, valamint a fogyasztás mind a nyers és szakács formában. Évente több mint 20 millió tonnát állítanak elő emberi fogyasztásra.

a szövettenyésztési gyakorlatok nagyon népszerűek voltak a növények klónozásában. A sárgarépa szövettenyészetének első vizsgálatáról 1939-ben számolt be Gautheret és Nobecourt. Azonban, Steward et al. és Reinert beszámolt a “sárgarépa embriogenezis” első tanulmányáról; megpróbálták a gyökereket sejtszuszpenzió és kallusz kultúrák segítségével termeszteni.

a szomatikus embriogenezis hatékony módszer a növényi sejttenyészet biokémiai, fiziológiai és genetikai aspektusainak megértésére és vizsgálatára.

a sárgarépa szövettenyészetével kapcsolatos számos tanulmány a sárgarépa embriogenezisének egyszerű módszerének kifejlesztéséhez vezetett. A módszer szerint a sárgarépatenyészetek növekedését a 2,4-D hormon eltávolításával lehet indukálni a sejtszuszpenziós tenyészetekből. Most a sárgarépát gyakran használják kísérleti modellként a szomatikus embriogenezis elemzéséhez különböző laboratóriumokban világszerte.

A tenyésztés létrehozásához szükséges anyagok és berendezések

sterilizált anyagok

• 5 répa morzsolódó kallusztenyészete, nem szennyezett, és 25 ft-on tartandó.
• 5 Erlenmeyer lombik (250 ml), amely 5 x 10-8 g/ml 2, 4-D táptalajt tartalmaz.
• 5 mérőhenger (100 ml) fóliakupakkal.
• 2 spatula.
• 25 lap alumínium fólia (100 x 100 mm).
• 2 db nejlon vagy rozsdamentes acél szita 250 6m porozitással, amelyek behelyezhetők a mérőhengerek nyílásába.
• 5 Petri-csészék.

nem sterilizált anyagok

• vízálló jelölőtoll
• forgó rázógép
• Bunsen égő
• 1 Erlenmeyer lombik (150 ml), amely 95% etanolt tartalmaz
• Parafilm

eljárás a tenyésztés megindítására és létrehozására

1. vegyük a kalluszkultúra csöveit, sterilizáljuk mind az 5 cső száját, és külön helyezzük át a kalluszt a petri-csészébe (5 Kalli 5 Petri-csészében).
2. Vegyünk egy 250 ml-es kanonikus lombikot, amely táptalajt és 2, 4-D-t tartalmaz.
3. helyezze át az összes 5 calli-t a Petri-csészéből 5 kanonikus lombikba, külön-külön.
4. láng / sterilizálja a lombikok száját, és fedje le őket a kupakkal. Rögzítse a kupakot parafilm segítségével.
5. helyezze a tenyészetet tartalmazó összes lombikot a forgórázó gépre sötét vagy alacsony fényerősségben 25 db-nál.
6. 7 nap elteltével vigye át a lombikokat a rázógépből egy steril helyiségbe.
7. távolítsa el a parafilm és a fólia kupakját minden lombikból, és lángolja / sterilizálja a lombikok száját.
8. Az egyes lombikok szuszpenzióját egy steril, 100 ml-es palackba helyezzük át külön-külön, szitán áthaladva.
9. hagyja a tartalmat 10 percig leülepedni, majd dobja ki a felülúszót.
10. vigyük át a mérőhengerben maradt sejtmaradványokat egy 250 ml-es lombikba, amely 60 ml friss táptalajt tartalmaz.
11. ismételje meg a 10.lépést minden tenyésztőlombik esetében.
12. tegye újra mind az öt lombikot a rázógépre.
13. 7 nap elteltével ismételje meg a korábban elvégzett eljárást (a 6-10.lépéstől). Ezúttal azonban csak a maradék sejtek 1/5-ét vegye be inokulumként.
14. ismételje meg az eljárást 3-4 alkalommal. Ezzel csak egyetlen sejt vagy kis aggregátum marad a sárgarépa szuszpenzióban.
15. a répasejtes szuszpenzió esetében a megfelelő sejtek száma 105-3 x 105 sejt/ml vagy 100-300 mg (friss tömeg) inokulum 60 ml friss táptalajt tartalmazó táptalajban és 5×10-8 g/ml, 2,4-D térfogatban.
16. 7 napos átviteli időszak szükséges ahhoz, hogy a sárgarépa a szuszpenziós tenyészetben egyetlen sejtet kapjon.

Approximate Schedule of the Culture

Event	Timing (approximate)
Initiation of cell suspension and determination of total cell number and PCV (packed cell volume)	Day 0
First transfer of cultures	Day 8
Fourth transfer of cultures	Day 29

Result

What should you observe while experimenting? Íme néhány pont, hogy emlékezzen, miközben megjegyezve az eredményeket.

• a kísérlet dátuma és időtartama.
• az alkalmazott tenyészetek és kezelések száma.
• háromhetes időközönként rögzítse a fertőzött tenyészetek morfológiáját és számát.
• határozza meg a PCV-t (csomagolt sejttérfogat) a tenyészet átvitelének kezdetén és végén.
• becsülje meg a teljes sejtszámot 3 szubkultúra után, az 1., 2., 4. és 7. napon, és ábrázoljon egy grafikont az idővel.
• tanulmányozza az inokulum sűrűsége és a növekedés mintázata közötti kapcsolatot.

a szuszpenziós tenyészet előnyt nyújt más tenyészetekkel szemben, mivel lehetővé teszi a szövet mozgását a táptalajban, amely megkönnyíti a gázcserét. Ezenkívül eltávolítja a szövet és a tápanyag gradiens polaritását a közegben és a közegben.

alkalmazása szövettenyészet sárgarépa

1. klónozni a taproots.
2. a sárgarépa mutáns formájának tanulmányozása.
3. a sárgarépa élettani reakcióinak tanulmányozása, amelyek megkönnyíthetik más növények megértését is.
4. a sárgarépa növekedésének és fejlődésének tanulmányozása egyetlen sejtből.
5. a sárgarépa stresszreakciójának tanulmányozása, amely betekintést nyújt más növények reakcióiba is.
6. több száz transzgenikus növény előállítása egyetlen sejt szuszpenziójából bármilyen kísérleti célra.

1. Reinert J. és Yeoman M. M. (1982). Növényi sejt-és szövettenyészet: laboratóriumi kézikönyv. Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, Newyork.
2. Hardegger M., Shakya R. (2004) a sárgarépa átalakulása. In: Curtis I. S. (eds) a világ transzgenikus növényei. Springer, Dordrecht. https://doi.org/10.1007/978-1-4020-2333-0_22.
3. a sárgarépasejtek növekedése és osztódása szuszpenziós tenyészetben. (1970). Növényi és Sejtfiziológia. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.pcp.a074564.
4. https://www.atzlabs.com/prodcut-info/C1955-Carrot -…