kiertävät solut edit
eristettyjen solujen saamiseksi tarvittavat tekniikat vaihtelevat solutyypistä riippuen. Kiertävät solut, kuten verisolut tai jotkin kasvainsolut, voidaan eristää ottamalla verinäyte. Koska verinäytteet sisältävät monien eri solutyyppien sekoitusta, on käytettävä menetelmää, jolla solut erotetaan eri tyyppeihin. Yleisimmin käytetty menetelmä tähän on virtaussytometria, jonka aikana automatisoitu analysaattori tarkastaa kapean soluvirran. Tämän tekniikan eräässä versiossa valo loistaa soluvirrassa, ja analysaattori havaitsee heijastuneen valon tai fluoresenssin ennen kuin käyttää tätä tietoa kiinnostavien solujen nopeaan siirtämiseen keräyskammioon.
kiinteiden kudosten edit
kiinteiden kudosten käsittelyssä kudoksen saaminen solueristystä varten voi olla haastavampaa. Ihmisen ylijäämäkudosta voidaan joskus saada suunnitellun leikkauksen yhteydessä, esimerkiksi oikean eteisen lisäkkeet poistetaan usein ja heitetään pois avosydänleikkauksen, kuten sepelvaltimon ohitusleikkauksen, aikana. Koepala voidaan ottaa myös muista kudoksista, kuten haiman tai virtsarakon näytteistä. Vaihtoehtoisesti eläimestä saadaan usein kudosta uhraamalla eläin.
kun kudosnäyte on saatu, se on ympäröitävä tai perfusoitava sopivassa lämpötilassa olevalla liuoksella, joka sisältää solujen elossa pitämiseksi tarvittavat suolat ja ravintoaineet. Tämä voidaan tehdä yksinkertaisesti upottamalla kudos liuokseen, tai siihen voi liittyä monimutkaisempia järjestelyjä, kuten Langendorff-perfuusio. Yleisesti käytetyt liuokset sisälsivät muutoksia Tyroden liuoksesta tai Krebs: stä ja Henseleitin liuoksesta nämä liuokset sisältävät tarkkoja pitoisuuksia elektrolyyttejä, kuten natriumia, kaliumia, kalsiumia, magnesiumia, fosfaattia, kloridia ja glukoosia. Näiden elektrolyyttien pitoisuudet on tasapainotettava huolellisesti kiinnittäen huomiota osmoottiseen paineeseen. Liuoksen happamuutta on säädeltävä, usein käyttämällä pH-puskuria, kuten HEPESIÄ. Solujen eristämistä joistakin kudoksista voidaan parantaa hapettamalla liuosta. Alkuvaiheessa kudoksen perfusointi liuoksella, joka ei sisällä kalsiumia, on hyödyllistä erityisesti sydämen myosyyttien eristämisessä, koska kalsiumin puuttuminen aiheuttaa välilevyjen irtoamisen.
proteolyyttisiä entsyymejä voidaan sitten lisätä liuokseen. Entsyymejä, jotka pilkkovat kollageenia (kollagenaaseja) käytetään usein eristettäessä soluja sydämestä tai virtsarakosta. Myös yleiskäyttöisiä entsyymejä, jotka sulattavat monenlaisia proteiineja (proteaaseja), voidaan käyttää. Kun eristetään soluja aivokudoksesta, muita entsyymejä, jotka hajottavat DNA: ta (Dnaasit) voidaan tarvita.
nämä entsyymit voivat solunulkoisen matriisin pilkkomisen lisäksi sulattaa myös muita tärkeitä proteiineja, jotka ovat tärkeitä solujen toiminnalle. Jos solut altistuvat näille entsyymeille liian kauan, seurauksena on solukuolema, mutta jos ne eivät altistu entsyymeille riittävän pitkään, solunulkoisen matriisin pilkkoutuminen ei ole täydellistä. Kun entsyymit on poistettu kudoksesta perfusoimalla se toisella liuoksella, joka ei sisällä entsyymejä, solut voidaan mekaanisesti erottaa tai dissosioida. Yksinkertainen tekniikka solujen dissosioimiseksi sisältää kudoksen leikkaamisen pieneksi lohkoksi ennen palojen sekoittamista liuoksessa pipetillä.
