johtaa
ALDH1: n ilmentymiseen alkion ja aikuisen haimassa.
perustuen aikaisempiin tutkimuksiin, jotka dokumentoivat ALDH1-entsymaattisen aktiivisuuden korkeita tasoja hermo -, hematopoieettisissa ja maitorauhasen epiteelisolujen esiasteissa (17-19), määritimme aldh1-proteiinin ilmentymisen ajalliset ja spatiaaliset kuviot alkion ja aikuisen hiiren haimassa (Kuva. 1). Käyttämällä e-cadherinia haiman epiteelisolujen merkkinä havaitsimme, että ALDH1-proteiini on ensin havaittavissa kehittyvässä haiman epiteelissä E12.5: ssä (kuva. 1 A). Tässä vaiheessa lauseke rajoittuu haarautuvien tubulusten kärkiin, joiden on äskettäin ehdotettu edustavan multipotentiaalista progenitorial domainia (20). Samantapaista lauseketta on aiemmin raportoitu Aldh1a1-transkripteissä (21). Ilmentyminen putkimaisissa kärjissä (eikä keskusrungoissa) jatkuu läpi E14.5 (Kuva. 1 B ja B’), ja sitä säännellään myöhemmin asinaaristen solujen erilaistamisessa. Aikuisen haimassa epiteelin ALDH1 ilmentymistä havaitaan useimmin centroasinaarisissa ja terminaalisissa duktaalisissa epiteelisoluissa (Fig. 1). Mesenkymaalisia (e-cadheriini-negatiivinen) ALDH1-ilmentäviä soluja havaittiin myös endokriinisten saarten ja eksokriinisten acinien (Kuva. S1).
ALDH1-ilmentymä alkion ja aikuisen hiiren haimassa. (A-C) Aldh1-proteiinin (vihreä) Immunofluoresoiva merkintä yhdessä E-cadherinin (punainen) kanssa epiteelirakenteiden merkitsemiseksi kohdissa E12.5 (A), E14.5 (b ja B’) ja aikuisen hiiren haiman (C). Kohdassa (B’) oleva kuva kuvaa suurempaa suurennosta kohdassa (B) ilmoitetusta pinta-alasta. Huomaa aldh1-lausekkeen rajoittaminen epiteelihaarojen kärkiin (merkitty tähdellä B’) eikä enemmän-keskihaaran rungot (merkitty tähdellä). Aikuisen haimassa (C) ALDH1-ilmentymä rajoittuu e-cadheriini-positiivisten centroasinaarisolujen osajoukkoon. (D ja E) aldh1-proteiinin (ruskea) Immunohistokemiallinen osoittaminen sentroasinaaristen (nuolet) ja terminaalisten kanavasolujen (nuolenkärki) osajoukoista. (Mittakaava: 50 µM.)
ALDH1-ekspression ja ALDH1-entsymaattisen aktiivisuuden tarkentamiseksi aikuisten terminaalikanava – / centroasinaarisoluissa käytimme valmisteita, joissa oli perifeerisiä asinaariduktaaliyksiköitä, jotka oli juuri eristetty kollagenaasi-digestoidusta hiiren eksokriinisestä haimasta (22). Tärkeää on, että nämä eristetyt perifeeriset akinaariduktaaliyksiköt ovat selvästi tyhjentyneet suurista kanavista ja hormonaalisista elementeistä. Haiman kokonaispitoisuuteen verrattuna perifeeristen asinaariduktaaliyksiköiden todettiin>400-kertainen insuliinitranskriptien vaje RT-PCR: n mukaan (kuva. S2A). Kun FACS-analyysi tehtiin siirtogeenisistä Ins1: DsRed-hiiristä, jotka ilmentävät punaista fluoresoivaa proteiinia β-soluissa, vain 3 10 000 solusta (0,03%) oli positiivisia DsRed: lle.
ALDH1-proteiinin ekspression kolmiulotteinen karakterisointi suoritettiin käyttämällä eristettyjen perifeeristen asinaariduktaaliyksiköiden kokoasennettua fluoresoivaa merkintää. ALDH1-proteiini lokalisoitiin yhdessä E-cadherinin kanssa epiteelisolujen merkkiaineena ja joko FITC-konjugoituneen Dolichos biflorus agglutiniinin (DBA) tai FITC-konjugoituneen maapähkinä agglutiniinin (PNA) kanssa, duktaali-ja acinaarisolujen merkkiaineena. Monikanavainen kuvantaminen vahvisti aldh1: tä ilmentävien epiteelisolujen pääasiallisen centroasinaarisen/terminaalisen duktaalisen sijainnin aikuisen haimassa (Kuva. S3). ALDH1: tä ilmentävät solut olivat useimmiten terminaalisen duktaaliepiteelin ja perifeerisempien akinaarisolujen välissä. Lisäksi havaittiin myös yksittäisepiteelisiä ALDH1: tä ilmentäviä soluja välittömästi terminaalisen duktaaliepiteelin vieressä (kuva. S3 A ja B). Sekä DBA-positiivisia että DBA-negatiivisia ALDH1-positiivisia soluja tunnistettiin, kun taas ALDH1-positiivisia PNA-positiivisia soluja tunnistettiin vain harvoin.
Aldh1: tä ilmentävien Centroasinaarien ja terminaalisten Duktaalisolujen eristäminen.
toivoessamme aldh1: tä ilmentävien solujen eristämistä aikuisen hiiren haimasta hyödynsimme Fluorogeenista substraattia nimeltä ”Aldefluor” (StemCell Technologies), jota on aiemmin käytetty hematopoieettisten, hermostollisten ja rintarauhasen epiteelikantasolujen (17-19) eristämisessä. Ennen kuin yritimme FACS-pohjaista aldh1-ilmentävien haiman epiteelisolujen eristämistä, käytimme tätä reagenssia visualisoimaan eläviä ALDH1-ilmentäviä soluja perifeerisissä asinaaris-duktaalisissa yksiköissä (Kuva. 2). Kuten kuvassa. 2 E ja F, nämä tutkimukset vahvistivat vähäisen aldefluoripositiivisten solujen centroasinaarisen / terminaalisen duktaalisen sijainnin aikuisen hiiren haimassa. Aldefluoripositiiviset centroasinaariset / terminaaliset duktaalisolut erotettiin helposti viereisistä asinaarisoluista niiden pienen koon ja tsymogeenirakeiden puutteen vuoksi. Muita esimerkkejä elävien solujen kuvantamisesta Aldefluorireagenssilla on esitetty Fig: ssä. S4. Nämä havainnot viittasivat siihen, että anti-ALDH1-immunofluoresenssi ja Aldefluoripohjainen sytofluoresenssi merkitsivät samankaltaista centroasinaarista/terminaalista duktaalipopulaatiota, ja viittasivat edelleen siihen, että nämä solut voitaisiin onnistuneesti eristää FACS: n avulla.
FACS aldh1: tä ilmentävien centroasinaaristen/terminaalisten epiteelisolujen eristäminen Aldefluorireagenssilla. FACS-lajittelu suoritettiin yksittäissoluilla, jotka oli eristetty Umpieritys-ja isokanavaelementeistä tyhjentyneistä perifeerisistä akinaariduktaaliyksiköistä. A ja B) Aldefluoripositiivisten solujen poraaminen DEAB-herkkään ALDH1-entsymaattiseen aktiivisuuteen perustuen. y-akseli ilmaisee sivutörmäystä; x-akseli ilmaisee aldefluorisignaalin voimakkuutta (A) ja (B) ilman DEAB: tä. (B ja C) ALDH1-entsymaattisen aktiivisuuden osoittaminen (C) DEAB: n kanssa ja (D) ilman DEAB: tä yhdessä E-kadheriiniproteiinin pinnan osoittamisen kanssa. y-akseli edustaa merkintöjen intensiteettiä APC-konjugoidun anti-e-cadherinin vasta-aineen kanssa; x-akseli ilmaisee Aldefluorisignaalin intensiteetin. P2: n, P3: n, P4: n ja P5: n D: ssä osoittamat FACS-lajitellut populaatiot vastaavat vastaavasti Aldefluoripositiivisia, E-cadheriinipositiivisia (A+E -), Aldefluoripositiivisia, E− cadheriinipositiivisia (A+E+), Aldefluoripositiivisia, e-cadheriinipositiivisia (A-E+) ja Aldefluoripositiivisia, e-cadheriinipositiivisia (A-E+). (E ja F) kollagenaasi-pilkottu hiiren haima Aldefluorireagenssilla vahvistaa aldefluoripositiivisten solujen centroacinar/terminal ductal lokalisoinnin, joka on samanlainen kuin ALDH1-immunofluoresenssissa (Figs. 1 ja 2). Huomaa aldefluoripositiivisten solujen centroasinaarinen/terminaalinen sijainti ja pieni koko suhteessa suurempiin asinaarisoluihin, jotka on helppo tunnistaa apikaalisia tsymogeenirakeita vastaavista rakeisista sytoplasmoista. (Mittakaava: 50 µM.) (G) kvantitatiivinen RT-PCR− analyysi geeniekspressiosta A+E+ soluissa (punainen), A+E− soluissa (valkoinen), A+E−soluissa (sininen) ja A− E-soluissa (musta). Verrattuna A-E+ aldefluorinegatiivisiin epiteelisoluihin A+ E + aldefluoripositiiviset centroasinaariset/terminaaliset duktaaliepiteelisolut rikastetaan transkriptejä varten, jotka koodaavat Aldh1a1, Aldh1a7, Sca1, Sdf1, c-Met, Nestiini, Ptf1a ja Sox9. (Mittakaava: 50 µM.)
aldefluoripositiivisista centroasinaarisista/terminaalisista duktaalisoluista johdettujen pankreatosfäärien muodostuminen, erilaistuminen ja toiminta. A ja B) A+E+ centroasinaariset/terminaaliset duktaaliepiteelisolut, mutta eivät A−E+ epiteelisolut, muodostavat tehokkaasti pankreatosfäärejä suspensioviljelmässä. (C–G) E-kadheriini (C), insuliini C-peptidi (D), amylaasi (E), Sox9 (F) ja ALDH1 (G) ilmentyminen 7.päivänä pankreatosfäärissä, jotka muodostuvat A+E+ centroasinaarisista/terminaalisista duktaalisista epiteelisoluista. H) solujen proliferaatio 7.päivänä pankreatosfäärissä arvioituna lisäämällä edu: ta yön yli lisättynä viljelyjakson 6. päivänä. I) ELISA-pohjainen C-peptidi-insuliinin varastoidun ja erittämän insuliinin määritys sen jälkeen, kun pankreatosfäärejä tai ins-1-soluja on inkuboitu yön yli vaihtelevissa glukoosipitoisuuksissa. Huomaa, että pankreatosfäärissä on samanlainen glukoosiherkkyys kuin Ins-1-soluissa (ts., ∼2-kertainen C-peptidin erittymisen lisääntyminen vasteena 0 vs. 11 mM glukoosille). (Asteikkotangot: 100 µM.)
jatkoimme FACS-pohjaista karakterisointia ja perifeerisistä akinaariduktaaliyksiköistä irronneiden yksittäisten solujen lajittelua. Alustavana keinona aldh1-ilmentävien solujen spesifisen gatingin määrittämiseksi käytimme aldh1-entsymaattisen aktiivisuuden farmakologista estäjää (DEAB). Kuten kuvassa. 2 A-D, Tämä strategia mahdollisti vähäisen runsauden solupopulaation eristämisen, jolle oli ominaista suuri DEAB-herkän ALDH1-entsymaattisen aktiivisuuden taso (0, 9% ± 0).2% aikuisen hiiren haiman kaikista lajitelluista soluista. Käyttämällä e-cadheriini-vasta-ainetta epiteelisolujen samanaikaiseen tunnistamiseen Aldefluori ( + ) E-cadheriini ( + ) – solujen havaittiin edustavan 0,5% ± 0,13% kaikista lajitelluista soluista aikuisen hiiren haimassa (Kuva. 2D).
käyttämällä kvantitatiivista RT-PCR: ää Aldefluoripositiivisten, e-cadheriinipositiivisten (A+E+), Aldefluoripositiivisten, E-cadheriinipositiivisten (A-E+), Aldefluoripositiivisten, e-cadheriininegatiivisten (A+E -) ja Aldefluoripositiivisten, e-cadheriininegatiivisten (A−E -) populaatioiden vertailuun, löysimme A+E+-populaation rikastuvan merkittävästi transkriptien koodaukseen aldh1a1 ja aldh1a7 sekä kahden muun aldh1-isoformin, aldh1a2: n ja Aldh1a3: n, transkriptien tyhjentyminen (Kuva. 3G). Aldh8a1: tä ei havaittu yhdessäkään näytteessä. A−E+-populaatioon verrattuna A+E+-solujen transkriptiot Pdx1: ssä (p < 0, 09), Amylaasissa (p < 0, 001) ja Sytokeratiini-19: ssä (p < 0, 01) (markkereita Erilaistuneina β-soluina, Akinaarisoluina ja kanavasoluina). Sen sijaan A+E+-soluille oli ominaista ptf1a: n voimakas ilmentyminen, vaikka ne olivat tyhjentyneet sekä amylaasi-transkriptioista että amylaasiproteiinista (Fig. 3G ja Fig. S5). Lisäksi näitä soluja rikastettiin transkripteille, jotka koodaavat Sca-1, SDF1, c-Met, Nestin, Sox9, Hey1 ja Hey2-merkkiaineita, jotka aiemmin liittyivät progenitoripopulaatioihin haimassa ja muissa kudoksissa. Käyttämällä immunofluoresoivia merkintöjä FACS-lajiteltujen solujen sytospiiniprepeissä vahvistimme ALDH1-ja Sox9-proteiinin merkittävän rikastumisen ja amylaasin ehtymisen A+E+ – soluissa (Kuva. S5). Lisäksi teimme FACS-analyysin selvittääksemme, kuinka usein Aldefluori ( + )-solut olivat positiivisia myös kantasolujen markkereille, kuten CD133: lle ja Sca-1-proteiinille, ja havaitsimme, että yli 90% Aldefluori ( + ) – soluista myös ilmaisi molempia kantasolujen markkereita. Sen sijaan vain 0, 11% Aldefluorisoluista (+) oli positiivisia myös verisuonten endoteelimarkkerille PECAMILLE, kun taas 0, 08% oli positiivisia hematopoieettiselle merkkiaineelle CD45: lle. Kun FACS-analyysi tehtiin transgeenisistä Ins1-DsRed-hiiristä poimituista perifeerisistä asinaariduktaaliyksiköistä, jotka ilmentävät β-soluissa punaista fluoresoivaa proteiinia, kaikkien Aldefluori ( + ) – solujen todettiin olevan negatiivisia dsRed: lle.
Pancreatosphere Assay of Endocrine and Exocrine Progenitor Function.
progenitorimaisen aktiivisuuden alustavana seulontana määritimme aldefluori ( + )-ja Aldefluori ( – ) – solujen kyvyn muodostaa pankreatosfäärejä (Kuva. 3), samanlainen kuin neurosphere-määritys, jota käytetään yleisesti neuraalisten progenitorien tunnistamiseen (23). Näissä määrityksissä A+ E + centroasinaariset/terminaaliset duktaalisolut kykenivät ainutlaatuisella tavalla muodostamaan sfäärejä suspensioviljelmässä. A+ E+-kennot näyttivät pallonmuodostustehokkuutta >100 kertaa enemmän kuin niiden a−E + – vastineet (Kuva. 3 A ja B sekä taulukko S1). Pienemmällä tehokkuudella yksittäiset A + E + -solut pystyivät jopa muodostamaan palloja, kun ne pinnoitettiin kloonitiheydellä (yksi solu kaivoa kohti) 96-kuoppalevyissä (taulukko S1). Kummallakaan e-cadheriini-negatiivisella populaatiolla ei ollut merkittävää pallonmuodostuskykyä. Kun sitä viljellään 5-7 päivän ajan, A+E+ – soluista johdetut pankreatosfäärit ilmaisivat voimakkaasti e-cadheriinia (Kuva. 3C), vahvistaen niiden epiteeli-identiteetin, ja yksittäiset solut sfääreissä alkoivat kerätä huomattavia määriä joko amylaasia tai insuliinia ja C-peptidiä (Fig. 3 D ja E). 5 vuorokauden kuluttua ≈50% pankreatosfääreistä osoitti amylaasin ilmentymistä, kun taas noin 30% osoitti immunoreaktiivisuutta C-peptidi-insuliinille. Yksittäisistä sfääreistä löytyi yleensä joko insuliinia tai amylaasia, mutta ei molempia. Pienet osajoukot solujen sisällä pallot säilytti ALDH1 expression aikana viljelyn aikana, ja osoitti myös ydinilmaisun sox9 proteiini (Kuva. 3 F ja G), mikä viittaa itse uusiutuvan progenitoripoolin mahdolliseen ylläpitoon. Tätä ilmeistä kykyä uusiutua itsestään tuki myös se, että aldefluori ( + )-sentroasinaari-/terminaaliduktaalisolujen tuottamat pankreatosfäärit voitiin altistaa sarjalliselle entsymaattiselle dissosiaatiolle, jolloin niiden pallonmuodostuskyky säilyi vähintään kolmessa peräkkäisessä kohdassa 7 päivän välein. Lisäksi sfäärien sisällä olevat solut olivat erittäin proliferatiivisia, mikä arvioitiin lisäämällä viljelyjakson alussa tai lopussa lisättyä EdU: ta yön yli (Kuva. 3T).
A+E+ – solujen osoittamien erillisten progenitorikapasiteettien perusteella selvitimme edelleen lajiteltuja solupopulaatioita hormonaalisten progenitorisolujen merkkiaineen ngn3 ilmentymiseksi (Kuva. S2B). Aiempien tutkimusten (7) mukaisesti emme pystyneet havaitsemaan merkittävää ngn3: n ilmentymistä aikuisen haiman kokonaismäärässä tai missään vasta lajitellussa solupopulaatiossa. Kun A+ E + -solut oli kuitenkin sijoitettu viljelyyn, ne alkoivat tuottaa havaittavaa ngn3: n ilmentymistä välittömästi ennen insuliinin ilmentymisen alkamista, mikä vahvisti entisestään ALDH1: tä ilmentävien centroasinaaristen ja terminaalisten epiteelisolujen endokriinistä progenitorikapasiteettia.
Aldefluorin (+) terminaalisista Duktaali- / Centroasinaarisoluista johdetuissa Pankreatosfääreissä esiintyy glukoosiin reagoivaa insuliinineritystä.
insuliinia ja C-peptidi-insuliinia ilmentävien solujen havaitseminen viljellyissä pankreatosfääreissä antoi aiheen arvioida, kykenevätkö nämä solut glukoosiin reagoivaan insuliinineritykseen, mikä on funktionaalisille β-soluille ominaista. Positiivisena kontrollina käytimme Ins-1-soluja (klooni 832/13) ikuistettua β-solulinjaa, jota käytetään yleisesti insuliinin eritystä koskevissa tutkimuksissa vastauksena glukoosin fysiologisiin pitoisuuksiin. Joko pankreatosfäärin tai ins-1-solujen yön yli jatkuneen inkubaation jälkeen 0, 5 ja 11 mM glukoosissa kerättiin talteen sekä elatusaineen supernatantit että solulysaatit ja määritettiin C-peptidi-insuliinin erittyminen ja solumääritys ELISA-pohjaisella määrityksellä. Pankreatosfäärit, jotka on johdettu Aldefluori ( + )-sentroasinaarisista/terminaalisista duktaalisoluista, jotka erittävät C-peptidiä glukoosista riippuvaisesti ja joiden glukoosiherkkyys on samanlainen kuin Ins-1-solujen (Kuva. 3).
Aldefluori (+) Aikuiset terminaaliset Duktaali – / Centroasinaarisolut voivat edistää alkion hormonitoimintaa ja Eksokriinisiä sukusoluja.
vielä tiukempana haiman progenitoriaktiivisuustestinä me mikroinjektoimme eristetyt Aldefluori – ( + ) – ja Aldefluori – ( – ) – solut Mikroinjektioituneiksi seläselkäisiksi haimasilmuiksi, jotka on eristetty E12.5-hiiren alkioista, ja määritimme kyvyn tuottavasti edistää hormonitoimintaa ja eksokriinisiä sukusoluja (Kuva. 4). Tätä lähestymistapaa on äskettäin käytetty progenitoriaktiivisuuden dokumentointiin ngn3: a ilmentävissä soluissa, jotka syntyvät haiman kanavan ligaation jälkeen (7). Jäljittääksemme aikuisperäisten luovuttajasolujen sukujuuret ja erottaaksemme ne alkioperäisistä vastineistaan eristimme Aldefluori ( + )-ja Aldefluori ( – ) – solut hiirten haimasta, joilla on ubiquitously expressed pCAG:mCherry transgene, kuten kuvassa on kaavamaisesti kuvattu. 4A (pCAG:Mcherry-hiiret toimitti ystävällisesti Michael Wolfgang, Johns Hopkins University). Aldefluori ( – )-soluihin verrattuna Aldefluori ( + ) – soluilla oli huomattavasti suurempi potentiaali vaikuttaa kehittyvien selkänystyröiden sisäerityslinjojen syntymiseen, mikä on osoitettu mcherryn koekspressiolla joko C-peptidin kanssa (kuva. 4 B-E)tai glukagoni (Kuva. 4 F-I). Käyttämällä päällekkäistä e-cadherinin merkintää yksittäisten mcherry-positiivisten solujen laskemiseksi arvioimme kvantitatiivisesti aikuisten Aldefluorin (+) ja Aldefluorin (−) solujen kykyä päästä alkiolinjoihin. Seitsemän päivän kuluttua aldefluori ( + ) – solujen mikroinjektiosta E12: een.5 dorsaalinuput, glukagonin ilmentymistä havaittiin 11, 7%: ssa mcherry-positiivisten solujen jäännössoluista, ja C-peptidi-insuliinin ilmentymistä havaittiin lisäksi 11, 6%: ssa (Kuva. 5N). Sitä vastoin 2, 4% jäljellä olevista Mcherry-positiivisista Aldefluori ( − )-soluista ilmaisi glukagonia ja vain 0, 2% C-peptidiinsuliinia. Mielenkiintoista on, että Aldefluori ( + ) ja Aldefluori ( – ) – populaatioilla oli samanlaiset kyvyt päästä ei-endokriinisiin epiteelilinjastoihin, mikä ehkä kuvastaa sitä, että suurin osa Aldefluori ( – ) – populaatiosta koostui jo erilaistuneista asinaarisoluista. Samanlaisia e-kadheriinin, amylaasin ja PNA-positiivisuuden frekvenssejä havaittiin mcherry – positiivisissa jäännössoluissa, jotka oli johdettu joko Aldefluori ( + ) – tai Aldefluori ( – ) – populaatioista (Fig. 4 J-N).
Aldefluoripositiiviset aikuisten haimasolut siirtyvät sekä hormonitoimintaan että eksokriinisiin sukusoluihin viljellyssä alkion haimassa. (A) kaavamainen kokeilu. Aikuisten solujen sukulinjan jäljittämiseksi Aldefluori ( + ) ja Aldefluori ( – ) eristettiin aikuisen CAG:mCherry siirtogeenisen hiiren haima, mikroinjektoitu mikrotissektoituneiksi selkäevän haimasilmuiksi eristettynä E12: sta.5 ei-transgeenisiä hiiren alkioita, ja määritettiin kyky tuottavasti edistää kehittyviä hormonitoimintaa ja eksokriinisiä sukusoluja. (B–J) mcherryn ja C-peptidiinsuliinin (B–E) sekä mcherryn ja glukagonin (f–I) Yhteisekspressio vahvistaa aikuisten Aldefluori ( + ) – solujen kyvyn osallistua alkion β-ja α-solulinjaan, kun taas yksittäisten MCHERRY-positiivisten solujen merkintä FITC–konjugoidulla PNA: lla (J-M) vahvistaa kyvyn osallistua alkion asinaariseen linjaan. (N) frekvenssit, joilla mcherry-positiivisten aikuisten Aldeflouori − ( + )-ja Aldefluori-( – ) – solujen jäännösmerkinnät merkitään C-peptidi -, glukagoni -, e-kadheriini-ja PNA-insuliinille 7 päivän kuluttua mikroinjektiosta mikrotissisoituneisiin E12.5-selkäevän haimasilmuihin. Kaikki solumäärät määritettiin käyttämällä e-cadherinin merkintää yksittäisten solujen rajan hahmottamiseksi. Huomaa, että hormonitoiminnan erilaistumiskyky rajoittuu pääasiassa Aldefluori ( + ) − populaatioon, kun taas sekä Aldefluori (+) että Aldefluori ( – ) – solut voivat tuottavasti edistää eksokriinisten sukujen kehittymistä. (Mittakaava: 50 µM.)
Aldh1: tä ilmentävien centroasinaaristen ja terminaalisten duktaaliepiteelisolujen laajeneminen kroonisen tulehduksen ja regeneratiivisen epiteelin metaplasian yhteydessä. Antigeenihaun jälkeen ALDH1-proteiinia havaittiin käyttäen immunohistokemiaa normaalin aikuisen haiman (A ja B) haimakudoksessa ja haimassa, joka otettiin hiiriltä, joilla oli krooninen haimatulehdus, joka aiheutettiin kolmella viikottaisella caeruleiini–injektiolla (C-H). (A ja B) Aldh1: n Pientaajuusmerkinnät terminaaliduktaalisissa epiteelisoluissa (TD) normaalista aikuisen haimasta. (C and D) Expansion of ALDH1-expressing terminal ductal epithelium following sequential caerulein administration. (E and F) Similar expansion of ALDH1-expressing centroacinar cells (CAC) following sequential caerulein administration. (G and H) Expression of ALDH1 in caerulein-induced metaplastic type 2 (TC2; H), but not type 1 (TC1; G) tubular complexes.
Expansion of ALDH1-Expressing Centroacinar and Terminal Duct Cells Following Chronic Epithelial Injury.
arvioidaksemme ALDH1: tä ilmentävien centroasinaaristen ja terminaalisten kanavasolujen in vivo-käyttäytymistä arvioimme ALDH1: n ilmentymisen malleja kroonisen tulehduksen ja regeneratiivisen metaplasian yhteydessä, jotka johtuvat pienen caeruleiiniannoksen vaiheittaisesta annostelusta. Kuten aiemmin on raportoitu (15), aikuisten hiirten hoito kolmella caerulein-injektiolla (50 µg/kg) viikossa 3 peräkkäisen viikon ajan aiheutti kroonisen haimatulehduksen, jota seurasi lähes täydellinen uudistuminen ja korjaantuminen. Tälle prosessille on ominaista tulehdusinfiltraatit, strooman laajeneminen ja regeneratiivisten metaplastisten putkimaisten kompleksien muodostuminen, joihin kuuluvat tyypin 1 putkimaiset kompleksit, joiden on aiemmin osoitettu olevan asinaarisolusta johdettuja, ja tyypin 2 putkimaiset kompleksit (TC2), jotka on aiemmin osoitettu nonasinaarisiksi ja oletettavasti johtuvat lisääntyvistä terminaalisista kanavasoluista (15). Toisin kuin ALDH1: tä ilmentävien terminaalikanava-ja centroasinaarisolujen suhteellisen vähäinen määrä normaalilla aikuisen haimalla (Kuva. 5 A ja B), ALDH1-ilmentävä terminaalikanava (Kuva. 5 C ja D)ja centroacinar (Kuva. 5 E ja F) solut laajenivat huomattavasti caeruleiinin aiheuttaman kroonisen haimatulehduksen yhteydessä. On huomattava, että tyypin 2 putkimainen kompleksit koostuivat pääasiassa ALDH1-ilmentävistä soluista (Kuva. 5H), kun taas tyypin 1 putkimaiset kompleksit eivät osoittaneet ALDH1: n ilmentymistä (Kuva. 5G).
