cDNA-Kloonaus

RNA: n Käänteiskopiointi komplementaariseksi DNA: ksi (cDNA) on ensimmäinen askel monissa molekyylibiologian työnkuluissa, mukaan lukien geeniekspressiotutkimukset reaaliaikaisen PCR: n avulla, geenien Kloonaus ja cDNA-kirjastojen luominen.

cDNA-kirjasto on kokoelma kloonattuja DNA-sekvenssejä, jotka täydentävät tietystä solusta tai kudoksesta eristettyä mRNA: ta. Kirjasto edustaa vain tietyn näytteen sisältämiä litteroituja sekvenssejä ja voi tarjota runsaasti tietoa tiettyjen geenien identiteetistä ja toimivuudesta. cDNA-kirjastot tarjoavat myös oivalluksia näytteessä tuotetun RNA: n runsaudesta, sillä mitä enemmän mRNA: ta ilmaistaan, sitä enemmän cDNA: ta tuotetaan.

cDNA-kirjastoja rakennettaessa on oleellista, että cDNA-kloonit edustavat alkuperäistä RNA-populaatiota sekä koko pituutensa että suhteellisen runsautensa puolesta. Tämä tarkoittaa, että tässä vaiheessa käytettävän käänteiskopioijaentsyymin valinta on ratkaisevan tärkeää. Kun kloonaat cdnoja ja luot cDNA-kirjastoja, suosittelemme UltraScript – ja UltraScript 2.0-tuotevalikoimaamme. Nämä erittäin aktiiviset ja termostabiilit entsyymit kykenevät syntetisoimaan enemmän täyspitkää cDNA-tuotetta, vaikka RNA: ta, RNA: ta ilmaistuna pieninä pitoisuuksina tai sisältäen korkean sekundaarirakenteen.