Antecedentes & objetivos: La enfermedad celíaca podría tratarse y curarse, restaurando la tolerancia de las células T a la gliadina. Investigamos la seguridad y eficacia de nanopartículas de poli(co-glicólido-lactida) con carga negativa de 500 nm que encapsulan la proteína de gliadina (TIMP-GLIA) en 3 modelos de ratón de enfermedad celíaca. La captación de estas nanopartículas por las células presentadoras de antígenos ha demostrado inducir tolerancia inmunitaria en otros modelos animales de enfermedad autoinmune.
Métodos: Se realizaron estudios con ratones transgénicos Ab0 NOD C57BL/ 6, RAG1 -/ – (C57BL / 6) y HLA-DQ8, huCD4. A los ratones se les administraron 1 o 2 inyecciones en la vena de cola de TIMP-GLIA o nanopartículas de control. A algunos ratones se les administraron inyecciones intradérmicas de gliadina en adyuvante completo de Freund (inmunización) o de gliadina soluble u ovoalbúmina (desafío auditivo). A los ratones RAG-/- se les administraron inyecciones intraperitoneales de células T CD4+CD62L-CD44hi de ratones C57BL/6 inmunizados con gliadina y se les alimentó con una dieta a base de AIN-76A que contenía gluten de trigo (exposición oral) o sin gluten. Las células del bazo o de los ganglios linfáticos se analizaron en ensayos de proliferación y secreción de citoquinas o mediante citometría de flujo, secuenciación de ARN o reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa en tiempo real. Las muestras de suero se analizaron por inmunoabsorción enzimática de anticuerpos de gliadina y los tejidos intestinales se analizaron por histología. Se cultivaron células mononucleares de sangre periférica humana, o células dendríticas inmaduras derivadas de células mononucleares de sangre periférica humana, en medio que contenía TIMP-GLIA, anticuerpos anti-CD3 o lipopolisacárido (controles) y se analizaron en ensayos de proliferación y secreción de citoquinas o por citometría de flujo. Se incubó sangre total o plasma de voluntarios sanos con TIMP-GLIA y se analizaron hemólisis, activación y agregación plaquetaria y activación o coagulación del complemento.
Resultados: La TIMP-GLIA no aumentó los marcadores de maduración en células dendríticas humanas cultivadas ni indujo la activación de células T de pacientes con enfermedad celíaca activa o tratada. En los modelos de hipersensibilidad de tipo retardado (modelo 1), transgénico HLA-DQ8 (modelo 2) y enteropatía de células T con memoria de gliadina (modelo 3) de enfermedad celíaca, las inyecciones intravenosas de GLIA-TIMP disminuyeron significativamente la proliferación de células T específicas de gliadina (en los modelos 1 y 2), secreción inflamatoria de citoquinas (en los modelos 1, 2 y 3), IgG/IgG2c específica de gliadina circulante (en los modelos 1 y 2), hinchazón de oídos (en el modelo 1), dependencia del gluten enteropatía (en el modelo 3) y pérdida de peso corporal (en el modelo 3). En el modelo 1, se demostró que los efectos dependían de la dosis. Los esplenocitos de ratones transgénicos HLA-DQ8 a los que se les dieron nanopartículas TIMP-GLIA, pero no nanopartículas de control, tenían niveles elevados de FOXP3 y firmas de expresión génica asociadas con la inducción de tolerancia.
Conclusiones: En ratones con sensibilidad a la gliadina, la inyección de nanopartículas TIMP-GLIA indujo falta de respuesta a la gliadina y redujo los marcadores de inflamación y enteropatía. Esta estrategia podría desarrollarse para el tratamiento de la enfermedad celíaca.
