Resumen

Se informa del desarrollo de un proceso de centrifugación continua de dos etapas para la eliminación de células de hibridoma y desechos celulares del caldo de cultivo. El objetivo era generar sobrenadante, que se puede usar directamente para ultrafiltración o cromatografía sin pasos de filtración.

El primer paso de centrifugación para la eliminación de células de hibridoma de la fermentación repetida por lotes en escala de 100 L se realizó mediante un separador de pila de discos mejorado. La centrifugadora estaba equipada con un sistema de alimentación hidrohermética, que permitía una separación de las células sin daños mediante una fuerza centrífuga moderada.

La clarificación para células de mamíferos en este paso estuvo en el rango de 99 a 99,9 %. La cantidad de partículas subcelulares en la fase líquida clarificada se redujo hasta el 50% del contenido de partículas en la corriente de alimentación.

En una segunda etapa de centrifugación se llevó a cabo la eliminación de la cantidad restante de residuos celulares y otras partículas pequeñas. Se realizó con fuerzas centrífugas de hasta 18000 * g en una centrífuga de alta velocidad equipada con un sistema de flujo continuo.

Los anticuerpos monoclonales en el sobrenadante resultante se concentraron directamente mediante métodos de ultrafiltración y cromatografía. En este proceso no se observó ensuciamiento de las membranas UF ni de las membranas cromatográficas.

Los costos de reemplazo de membrana se pueden reducir drásticamente mediante el uso del proceso de centrifugación de dos etapas.