Esta es la primera de una serie de tres partes sobre la transformación de E. coli. Al final de esto, usted debe ser un experto en la transformación de E. coli y en qué cepas elegir para diferentes aplicaciones. Si ya eres un experto, espero que sea un refresco agradable para ti. En cualquier caso, por favor, comente a continuación si tiene algo que agregar.

Utilizando electricidad para la transformación

Se puede introducir ADN extraño en E. coli competente mediante electroporación o transformación química. Al usar electroporación, aplica una corriente eléctrica a través de la célula. Se cree que la corriente crea «poros» momentáneos en las membranas celulares, lo que fuerza el ADN cargado negativamente a las células mediante un efecto de tipo electroforesis. Para hacer E. coli electro-competente, lave bien las células para eliminar todas las sales del medio. Esto garantiza que la carga no se realice a través del medio. Además, realice la electroporación a 0°C para minimizar el daño por calor a las células.

Productos químicos: También funcionan

Para fabricar células químicamente competentes, resuspender E. coli en una solución de CaCl2 a 0°C. En estas condiciones, se cree que el ion Ca2+ crea poros en la membrana, ayuda a la unión del ADN a la membrana celular y enmascara la carga negativa en el ADN. Juntos, estos facilitan el paso del ADN a través de la membrana celular hidrofóbica. Fuerza el ADN en las células aplicando un breve choque térmico de 42 ° C, que da como resultado una corriente térmica que barre el ADN en las células.

Los Pros y los Contras de cada electroporación

es menos engorrosa que la transformación química y generalmente da mayores eficiencias de transformación (medidas en colonias formadas por microgramo de ADN). Sin embargo, es más caro. Requiere un aparato especializado para entregar la carga y cubetas para transferir la carga a la suspensión celular. La electroporación es sensible a la sal: puede perder muestras preciosas si el exceso de sal se transfiere a la cubeta.

Personalmente, prefiero la transformación química. Aunque tarda alrededor de media hora más, encuentro que los resultados son más predecibles y me gusta el hecho de que se puede agregar un mayor volumen de ADN si la concentración es demasiado baja. No se puede aumentar el volumen de ADN con electroporación debido al riesgo de agregar demasiada sal a la solución. Aunque el inconveniente comúnmente citado de la transformación química es su menor eficiencia, ahora puede comprar células ultra competentes, como el XL10-gold de Stratagene, por lo que esto ya no es un problema.

Artículos de esta serie:

• Electroporación de E. coli vs Transformación química (este artículo)
• E. coli competente: ¿Comprar o no comprar?
• Elegir Una Cepa Competente de E. coli

Publicado originalmente el 18 de septiembre de 2007. Revisado y actualizado el 11 de julio de 2016.