Células circulanteseditar
Las técnicas necesarias para obtener las celdas varían según el tipo de celda requerido. Las células circulantes, como las células sanguíneas o algunas células tumorales, se pueden aislar tomando una muestra de sangre. Como las muestras de sangre contienen una mezcla de muchos tipos de células diferentes, se debe usar un método para separar las células en diferentes tipos. El método más utilizado para esto es la citometría de flujo, durante la cual un analizador automatizado inspecciona un flujo estrecho de células. En una versión de esta técnica, se ilumina una luz en el flujo de células, y el analizador detecta la luz reflejada o la fluorescencia antes de usar esta información para maniobrar rápidamente las células de interés en una cámara de recolección.
Tejidos sólidoseditar
Cuando se trata de tejidos sólidos, obtener tejido para el aislamiento celular puede ser más difícil. El tejido humano excedente a veces se puede obtener en el momento de la cirugía planificada, por ejemplo, las muestras de la orejuela auricular derecha a menudo se extirpan y desechan durante la cirugía a corazón abierto, como la cirugía de derivación de arteria coronaria. Otros tejidos, como muestras de páncreas o vejiga, se pueden tomar como biopsia. Alternativamente, el tejido de los animales se obtiene con frecuencia sacrificando al animal.
Una vez obtenida una muestra de tejido, debe estar rodeada o perfundida por una solución a una temperatura adecuada que contenga las sales y nutrientes necesarios para mantener vivas las células. Esto se puede realizar simplemente sumergiendo el tejido en la solución, o puede implicar arreglos más complejos como la perfusión de Langendorff. Las soluciones de uso común incluyeron modificaciones de la solución de Tyrode o de la solución de Krebs y Henseleit Estas soluciones contienen concentraciones precisas de electrolitos, incluidos sodio, potasio, calcio, magnesio, fosfato, cloruro y glucosa. Las concentraciones de estos electrolitos deben equilibrarse cuidadosamente, prestando atención a la presión osmótica. La acidez de la solución debe regularse, a menudo utilizando un tampón de pH, como HEPES. El aislamiento de las células de algunos tejidos puede mejorarse oxigenando la solución. En las etapas iniciales, perfundir el tejido con una solución que no contiene calcio es útil, especialmente cuando se aíslan los miocitos cardíacos, ya que la ausencia de calcio causa la separación de los discos intercalados.
Se pueden añadir enzimas proteolíticas a la solución. Las enzimas que digieren el colágeno (colagenasas) a menudo se usan para aislar células del corazón o la vejiga. También se pueden usar enzimas de uso general que digieren muchos tipos de proteínas (proteasas). Al aislar las células del tejido cerebral, se pueden requerir otras enzimas que descomponen el ADN (DNAasas).
Estas enzimas, además de digerir la matriz extracelular, también pueden digerir otras proteínas importantes esenciales para el funcionamiento de las células de interés. Si las células se exponen a estas enzimas durante demasiado tiempo, se produce la muerte celular, pero si no se exponen a las enzimas durante el tiempo suficiente, la digestión de la matriz extracelular no se completará. Una vez que las enzimas se han eliminado del tejido mediante la infusión de una segunda solución que no contiene enzimas, las células se pueden separar o disociar mecánicamente. Una técnica sencilla para disociar células consiste en cortar el tejido en trozos pequeños antes de agitar los trozos en una solución con una pipeta.
