introduktion

hepatocellulært carcinom (HCC), som repræsentererstor histologisk undertype af primær levercancer, er den femtefyste kræft på verdensplan og den tredje førende årsag tilcancer dødelighed (1,2). De højeste leverkræftfrekvenser er fundet i udviklingslandene, især i øst – / Sydøstasien og mellem – / Vestafrika, mens satserne er lave i Syd-Central -, Vestasien, Nord-og Østeuropa (3). Genetisk ændring og epigenetiskhøjrisikofaktorer såsom kronisk infektion med HBV eller HCV,levercirrhose, alkoholisk leversygdom og aflatoksiner tegner sig for HCC ‘ s høje morbiditet (4-6).Den molekylære mekanisme ledsaget afhepatocarcinogenese og progression er dog stadig stort set uklar.Det er således kritisk for os at afklare etiologien og undersøgeden vitalt molekylære ændring, der ligger til grund for hepatocellularcarcinoma initiering og progression, og i sidste ende forbedre voresnuværende begreber til diagnosticering, screening og behandling af dettesygdom.

under processen med hepatocarcinogenese, abrogation af cellecykluskontrolpunkter er et vigtigt kendetegn, somkan fremme kræftdannelse (2). som en af regulatorerne for cellecykluscheckpunktet ser celledivisionscyklus 20 (CDC20)ud til at fungere som et regulatorisk proteininteragerer med det anafasefremmende kompleks/cyclosom (APC/C) i cellecyklussen, hvilket er nødvendigt for anafase initiering ogslate mitoseudgang (7,8). To regulatoriske faktorer, CDC20 og Cdh1, binder direkte til APC og aktiverer dens cyclin allestedsnærværende aktivitet under mitose og G1 fase (9,10).Det er rapporteret, at det receptorassocierede protein 80(RAP80), som rekrutterer BRCA1 til DNA-skadesteder i den allestedsnærværende signaleringsvej induceret af DNA-skade, kan nedbrydes afanafasefremmende kompleks (APC/C-Cdc20) eller (APC/C-Cdh1) gennempolyubikvitination under mitose til G1-fasen (11). Udtømningen af RAP80 viste endefekt kontrol af G2-M fase kontrolpunkt og fremmet mitoticcell cyklus progression.CDC20-ekspression kan undertrykkes bemærkelsesværdigt af p53protein, som hæmmer malign transformation gennem regulering af cellecyklussen, cellulær aldring og apoptoserelaterede gener(12). Høj ekspression af Cdc20har været rapporteret i forskellige maligne tumorer, herunder pancreaticductal adenocarcinom (13), oralskavamcellekarcinom, gastrisk cancer (14), livmoderhalskræft (15) og forskellige kræftceller (14,16).Imidlertid er ekspressionsmønsteret for CDC20 og dets kliniskebetydning i humant hepatocellulært carcinom er ikke blevet klarlagt.

i denne undersøgelse ved at analysere microarray-datasættet(tiltrædelsesnr. GSE14520)fra genekspression Omnibus (GEO) database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) fandt vi, at Cdc20var den største knude i HCC molekylære interaktionsnetværk. Vi undersøgte ekspressionsniveauet for CDC20 i primær HCC og adjacentnon-tumorvæv og evaluerede dets klinisk-patologiske signifikans i 132 arkiverede HCC-prøver. Effekten af nedslagningen af Cdc20af siRNA på vækst og cellecyklus af levercancerceller blev også undersøgt. Vores resultater tyder på, at CDC20 kan spille envæsentlig rolle i udviklingen af HCC.

materialer og metoder

Bioinformatik analyse

Microarray datasæt GSE14520 (17) blev hentet fra GEO. I alt 183 HCC og 179 tilsvarende para-carcinomvæv, der blev analyseret med Affymetriks U133A GeneChips fra kohorte 2 Kinesiskepatienter blev anvendt i denne undersøgelse. Genekspressionsprofileringsdata blev opsummeret ved hjælp af RMA-metoden(18) og Gencentrerede CDF-filer (19) (i stedet for originalaffymetrics CDF-filer), som filtrerede ikke-specifikke prober på genechips og flettede flere probesæt, der repræsenterer det samme gen i et probesæt. Signifikansanalyse af mikroarray (SAM) (20) blev udført tilidentificere forskelligt udtrykte gener mellem HCC og korresponderendeparakarcinomvæv. Delta blev sat til 2,25, og tærsklen ofFDR blev sat til 0,001. Gener overudtrykt i HCC, der blev udtrykt i mere end 50 HCC-væv, men mindre end 10tilsvarende para-karcinomvæv blev undersøgt. Generne blev yderligere analyseret med GenCLiP (21) (http://ci.smu.edu.cn) for at anmærke genfunktioner ogkonstruere molekylære interaktionsnetværk.

Etikerklæring

de kliniske prøver blev kun brugt til forskningsformål. Godkendelse blev opnået fra det etiske udvalg på ChinesePLA General Hospital (LREC 2012/40). Alle prøver blev indsamlet på betingelse af et forudgående skriftligt informeret samtykke fra patienterne.

patienter og vævsprøver

seksten par friske HCC og tilstødende ikke-tumorvæv anvendt til realtids PCR og vestlige blot analyser blev indsamlet under operation fra Det Kinesiske PLA General Hospital(Beijing, Kina) fra November 2012 til februar 2013. Væv blev snapfrosset i flydende nitrogen indtil brug. Paraffinindlejret, arkiveret HCC og tilstødende ikke-tumorvæv anvendt tilimmunohistokemi (IHC) blev opnået fra 132 HCC-patienter, somundergik delvis leverresektion på samme hospital mellemjanuar 2006 og December 2007. Patientens medianaldervar 52 år (interval 24-80 år).

cellekultur

en normal levercellelinie (LO2) og tre HCC-cellelinjer (HepG2, SMMC7721, Huh7) blev købt fra American TypeCulture Collection (ATCC, Manassas, VA) eller Chinese Academy ofScience Cell Bank og blev opretholdt i Institute ofBiotechnology, Academy of Military Medical Sciences. Alle celler blev vedligeholdt i dulbeccos modificerede Ørnemedium (DMEM, Invitrogen,CA) suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS, Gibco, Carlsbad,CA) og 2 mM L-glutamin, 100 E/ml penicillin, 100 liter/mlstreptomycin ved 37 liter C med 5% CO2.

RNA-ekstraktion, cDNA-syntese OGREALTIDS-PCR-analyse

Total RNA blev ekstraheret fra cellelinjer og vævsprøver ved hjælp af Trisol-reagens (Invitrogen) ifølge producentens anvisninger. I alt blev 2 larg RNA reversetranskriberet ved hjælp af Transskript og cDNA Synthesis Kit fromTransGen Biotech (Beijing, Kina). Real-time PCR was performed toexamine CDC20 mRNA level in cell lines and tissue samples by usinga Bio-Rad iQ5 Multicolor Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad,Hercules, CA). β-actin was used as an internal control fornormalization. PCR primers were designed using the Primer Premier 5software and the sequences were: CDC20 forward,5′-TCGCATCTGGAATGTGTGCT-3′; and reverse,5′-CCCGGGATGTGTGACCTTTG-3′; β-actin forward,5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′; and reverse, 5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′. Ekspressionsdata blev normaliseret til det geometriske gennemsnit af husholdnings-genet, der blev brugt til behandling af Kristian-actin, og beregnet med Kristian (22), og resultaterne blev udtrykt med 2−Kristian.

vestlig blot-analyse

vestlig blot-analyse blev udført understandardprotokol. SDS-polyacrylamidgelelektroforese (10%) blev brugt til at adskille proteinet, som derefter blev elektrooverført fra gelen til en polyvinylidenfluorid (PVDF) membran. Efterblokering med 5% tørret skummetmælk i 1 time blev membranen kuberet med kanin anti-humant CDC20 polyklonalt antistof (1: 1.000, Bioverdensteknologi, St. Louis Park, MN) i 1 time ved værelsestemperatur. Musens monoklonale antistof (1: 5.000) blev anvendt som en intern kontrol. Efter vask med Tris-bufret saltvand medmellem-20 (TBST) tre gange blev membranen inkuberet medsekundær peberrodsperoksidase-konjugeret antistof mod kaninmus (fortynding 1:5.000). Kemiluminescerende påvisning varudført med Immobilion vestlige kemiluminescerende HRP Substratekit (Millipore Corporation, Billerica, MA).

Immunohistokemi (IHC) ogscoring

Immunohistokemi til CDC20-ekspression i HCC ogtilstødende ikke-tumorprøver blev udført ved anvendelse af standardmetoder.Kort fortalt blev vævssektioner inkuberet med kanin-Anti-Cdc20fortyndet 1:200 (Bioverdensteknologi) natten over ved 4 liter C. bovint serumalbumin (1%; BSA) uden primært antistof blev anvendt som den negativekontrol. Anti-kanin IgG-antistof (SSGB-Bio, Beijing, Kina) blev inkubereti stuetemperatur i 20 minutter.

alle de immunforsynede sektioner blev gennemgået ogscoreret uafhængigt af to patologer på en blindet måde uden kendskab til den klinikopatologiske information baseret på h-score-metoden, der betragter farvningsintensiteten sammen med procentdelen af celler, der farver positivt (23,24).For H-score-metoden blev 10 felter valgt tilfældigt ved kr400forstørrelse. Farvningsintensiteten i cellerne blev scoret som 0,1, 2 og 3 svarende til henholdsvis negativ, svag, mellemliggende ogstærk farvning. I hvert felt det samlede antal celler og celler farvet ved hver intensitet blev talt. H-scoren blev beregnet efter formlen: (%af celler, der er farvet ved intensitetskategori 1, kr1) + (%af celler, der er farvet ved intensitetskategori 2, kr2) + (% af celler, der er farvet ved intensitetskategori 3, kr3). H-scoresvarieret fra 0 til 300, hvor 300 repræsenterede 100% af cellerne stærktfarvet (3+) (24). Høj Cdc20ekspression blev defineret som farvning H-scoringer af celler på 200.

undertrykkelse af CDC20 ved lille interfereringrna (siRNA)

dobbeltstrenget, lille interfererende RNA (siRNA) blev syntetiseret og oprenset af GenePharma (Shanghai, Kina). De følgevirkninger, der svarer til den kodende region for human Cdc20, var: sense, 5 ‘- GGAGCUCAUCAGGCCA UUU-3′; antisense,5′-AUGGCCUGAGAUGAGCUCCUU-3’. En krypteret ikke-målrettet siRNA blev brugt til den negative kontrol. Disse sirna ‘ er blev opløst indiethylpyrocarbonatvand (DEPC) for at nå en koncentration på 20 liter. Levercancer HepG2-celler blev behandlet med CDC20 siRNA ornegativ kontrol siRNA i 20 nM ved anvendelse af INTERFERin invitro siRNA transfektionsreagens (Polyplus transfektion, Nyork, NY).

kvantitative realtids-PCR-og vestlige blot-analyserblev brugt til at detektere interferenseffekten af siCDC20. Cellerder var ubehandlet eller behandlet med negativ kontrol sirnaoligonukleotider var kontrolgrupperne.

cellulær proliferationsassay

to 25 cm2 plastkolber blev hverinokuleret med 2 liter 105 levercancerceller (HepG2), som derefter blev transficeret med henholdsvis 20 nM negativ kontrol siRNA og CDC20siRNA Til 48-h inkubation. Derefter blev cellerne fordøjetog podet i 6-brøndsplader indeholdende 2 ml medium pr.brønd.Derefter blev cellerne fra en brønd fordøjet og talt afautomatiseret celletæller (Invitrogen) hver 24.time indtil dag fem.

Fluorescensaktiveret cellesorteringstest (FACS) af cellecyklussen

siRNA for CDC20 og negativ kontrol sirnaoligonukleotider blev transficeret til HepG2-celler medinterferin in vitro siRNA-transfektionsreagens i 48 timer.efter behandling med 2 lutg/ml thymidin (Sigma-Aldrich, St. Louis,Mo) i 24 timer blev celler høstet ved 0, 3, 6, 9, 12-h efterfjernelse af thymidin fra mediet og fikseret med 70% alkohol.Før analyserne blev cellerne vasket med PBS, behandlet med 1 mg/mlRNase A ved 37 liter C i 30 minutter og derefter farvet med propidiumiodid(PI). Analyser blev udført af BD FACSCalibur (Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ), og resultaterne blev analyseret ved hjælp af programmet Version 2.9.

statistiske analyser

alle statistiske analyser blev foretaget ved hjælp af den statistiske programpakke IBMSPSS 20.0. Envejsanalyse afvarians (ANOVA) blev brugt til at sammenligne ekspressionen af CDC20 mrnanormaliseret til kurr-actin i cellelinjer. Den samme metode var ogsåudformet til sammenligning af den histologiske differentiering i tumorvæv normaliseret til normale leverprøver. Data sammenligninger i togrupper blev udført af elevens t-test. Krist2-testen blev brugt til at analysere forholdet mellem CDC20-ekspression ogklinikopatologiske egenskaber. Bivariate korrelationer mellemvariabler blev beregnet ved hjælp af Spearmans korrelationskoefficienter.Niveauet af statistisk signifikans blev sat til P < 0.05 for alltests.

resultater

CDC20 er den største knude i HCC molekylæreinteraktionsnetværk

SAM-analyse identificerede 4.358 gener overudtrykt inHCC, hvor 137 gener blev udtrykt i mere end 50 HCC-væv,men i mindre end 10 para-carcinomvæv. GenCLiP-analyse visteat blandt de 137 gener var 72 gener relateret til cellecyklussen(P=1.238 e-15, ved hjælp af en kr2-test), 19 gener var relateret tilspindelsamling (P=2.172 e-55, ved hjælp af en kr2-test) og 26 genervar relateret til kromosomsegregering (P=5.472 e-55, byh2-test). Blandt de molekylære netværk konstrueret med 137 gener var CDC20 den største knude, der ikke tidligere har været rapporteret at være relateret til HCC. Ni gener (NEK2, E2F1,BUB1, BUB1B, AURKB, CCNB1, CCNB2, UBE2C og CDKN2A) er kendt forinteragere med CDC20, hvor 7 gener var relateret til spindleassembly checkpoint (SAC) (Fig.1). Målet for SAC er CDC20 (25). Således udledte vi,at i HCC fører overekspression af CDC20 til fravær af SAC, og celler hurtigtbliver aneuploid.

CDC20 er overudtrykt i HCC

kvantitativ realtids-PCR blev brugt til at undersøgetranscript-niveau af CDC20 i tre HCC-cellelinjer (HepG2, SMMC-7721og Huh7) og en normal levercellelinie (LO2). CDC20 mRNA-niveauvar højere i alle de tre HCC-cellelinjer end i normalcellelinjen (Fig. 2).

for at bestemme, om opreguleringen afcdc20 i HCC-cellelinjer er ens hos HCC-patienter, udførte vikvantitativ realtids-PCR på 16 par matchede HCC og tilstødendenormale levervæv. Som vist i Fig.3A, CDC20 viste sig at være differentielt overudtrykt i 14 af alle undersøgte humane primære HCC-prøver sammenlignet med ikke-kræftprøver fra de samme patienter. Derudover var tumor/ikke-tumor(T/NT) forholdet mellem CDC20 mRNA-ekspression mindst >2 gange i alle disse 14 opregulerede prøver, og det højeste forhold var endda op til omkring 40 gange. Proteinniveauet af CDC20 blev bekræftet i altde 16 parrede vævsprøver ved vestlig blot analyse. Billede J1.47V blev brugt til at kvantificere det grå niveau af hvert bånd og beregne CDC20 T/NT-forholdet for hver patient, der normaliserede Meda-tubulin. Resultaterne viste, at alle undersøgte HCC-prøver viste ethøjere ekspressionsniveau af CDC20-protein undtagen prøve 1 og sample4, hvilket var i overensstemmelse med mRNA-niveauet (Fig. 3B). Disse fund indikerede, atcdc20 almindeligvis blev opreguleret i enten HCC-væv eller cellelinjer.

Immunohistokemi farvning af CDC20protein

Immunohistokemi (IHC) blev udført for at analysereproteinekspression og lokalisering af CDC20 i 132paraffin-indlejrede arkiverede HCC-vævsprøver, herunder 14 tilfældeaf godt differentieret, 78 tilfælde af moderat differentieret og 40 tilfælde af dårlige differentierede tumorer. CDC20-protein blev opreguleret (h-score-200) i 90 (68,18%) af 132 HCC-væv. Som vist inFig. 4A, høje niveauer af CDC20 var til stede i primære HCC læsioner og den positive farvning hovedsageliglokaliseret i cytoplasma og kerner. I modsætning hertil var CDC20NEGATIVT eller svagt farvet i tilsvarende ikke-tumorvæv. Ved kvantitativt at sammenligne scorerne af CDC20-farvning mellem 132arkivede HCC og tilstødende ikke-tumorvæv (hovedsageligt inklusivehepatocirrhose og hepatitis) blev scorerne af CDC20-farvning signifikant øget i HCC-prøver sammenlignet med peritumoralprøver (Fig. 4B). Derudover blev scorerne af CDC20-farvning signifikant forøget sammen medprogressionen af tumorhistologisk differentiering fra godt topoorly differentierede væv (Fig.5).

korrelation mellem øget Cdc20ekspression og klinikopatologiske parametre for HCC

forholdet mellem CDC20 proteinekspressionog de klinikopatoligiske træk ved 132 HCC-patienter blev yderligere analyseret. Som opsummeret i tabel I var cdc20-ekspression signifikant forbundet med køn (P=0,013), tumordifferentiering (P=0,000), TNM-Stadium (P=0,012), P53 og Ki-67ekspression (P=0,023 og P=0,007). Imidlertid blev der fundet nostatisk signifikant sammenhæng mellem høj Cdc20ekspression og andre klinikopatologiske egenskaber, herunder alder, tumorstørrelse, HBV-infektion, serum AFP-niveau,levercirrhose, vaskulær invasion og intra/ekstra levermetastase. Spearmancorrelationsanalyse afslørede, at høj ekspression af CDC20 var tæt relateret til køn (R=0,215, P=0,013), dårligere tumordifferentiering (R=0,421, P<0,001), avanceret TNM-iscenesættelse(R=0,218, P=0,012), højere ekspressionsniveau for p53 (R=0,212, p=0, 014) og Ki-67 (R=0, 235, p=0, 007) (tabel II). Samlet set indikerede disse resultater, at CDC20 var stærkt udtrykt i HCC-væv, og dens ekspression var tæt korreleret med differentieringen ogprogressionen af HCC.

undertrykkelse af CDC20-ekspression bysiRNA

den kvantitative realtids-PCR afslørede 90% transkriptionsniveau undertrykkelse af CDC20 ved 48 h efteroverførsel med siCDC20, sammenligning med ubehandlet celler eller celleroverført med negativ kontrol sirna (fig. 6A) (P<0.0001). Den vestlige blotanalyse viste også en åbenbar undertrykkelse af CDC20 protein levelat 48 h efter transfektion med siCDC20 (Fig. 6B). Den ændrede ekspression af cyclinafhængig kinasehæmmer 1A (p21) protein blev også undersøgt ved vestlig blot-analyse, og resultaterne viste, at p21proteinniveauet var bemærkelsesværdigt opreguleret på grund af undertrykkelsen af CDC20 (Fig. 6B).

effekt af CDC20-undertrykkelse på celleproliferation og cellecyklussen

Celleproliferationsanalyse afslørede, at cellevæksten af CDC20 siRNA-transficerede celler var bemærkelsesværdigt hæmmetsammenlignet med cellerne transficeret med negativ kontrol siRNA(Fig. 6C). Sicdc20 ‘ s inhibering af cellespredning forventedes ledsaget afarrest at metafase i cellecyklussen. Ved strømningscytometri-test blev der observeret et øget antal celler i G2/M-fasen i sicdc20-overførte celler sammenlignet med celler transficeret med negativecontrol siRNA (Fig. 6D). Disse data indikerede, at undertrykkelse af CDC20 hæmmede cellevækst ved at reducere G2/M fasestop.

Diskussion

gennem bioinformatikanalyse af et mikroarraydataset fra GEO-databasen identificerede vi CDC20, som var majornoden i HCC molekylære interaktionsnetværk, det var relateret tilspindle assembly checkpoint (SAC) i cellecyklus. Under tumororigenese blev defekter eller forstyrrelser i spindelaggregatetcheckpoint anset for at være ansvarlige for den øgede hastighed afaneuploidisering (26). Mondalet al har rapporteret, at CDC20 er overudtrykt i primære hoved – og halstumorer og flere orale pladecellecarcinom(OSCC) cellelinjer. Højt ekspressionsniveau af CDC20 i OSCC-celler er forbundet med for tidlig anafase-forfremmelse, hvilket fører til mitotiskabnormaliteter (27). Undersøgelser har også afsløret, at høj CDC20-ekspression påvises i oralskkamcellekarcinom og tyktarmskræft væv og detsoverekspression kan forudsige en dårlig prognose for patienter (28,29).

CDC20 er også påkrævet for sen anafase celler tiludgang fra mitose (30). TargetingCDC20 resulterer i blokering af mitoseudgang, hvilket kan være en bedre kræftterapeutisk strategi til at dræbe kræftceller mere effektivt end spindelforstyrrende lægemidler (31). Cdc20, som kan fungere som et onkoprotein til fremme afprogression og udvikling af humane kræftformer, repræsenterer et lovende terapeutisk mål (32). Selvom CDC20 ‘ s rolle i tumorigenese og prognose for flere humancancers er blevet dybt undersøgt og bekræftet, begrænsede undersøgelserhar undersøgt den potentielle funktion af CDC20 i initieringenog progression af hepatocellulært carcinom.

i denne undersøgelse vurderede vi ekspressionsniveauet forcdc20 i 16 parrede friske frosne HCC-væv og tilsvarendeikke-tumorprøver. Resultaterne viste, at det gennemsnitlige mRNA ogproteinniveau af CDC20 i HCC-væv var meget højere end imatchede ikke-tumorvæv. Immunhistokemi blev anvendt tilundersøgelse af den subcellulære placering af CDC20 og dens forhold til kliniske patologiske parametre for HCC patients.By ved hjælp af kurt2-test fandt vi, at højere CDC20-proteinekspressionsniveau var forbundet med køn,tumordifferentiering, TNM-fase, P53 og Ki-67-ekspression. At undersøge den potentialebiologiske funktion og molekylære mekanisme af CDC20 i HCC, videsignede et dobbeltstrenget, lille interfererende RNA (siRNA) målretningcdc20 for at forstyrre dets ekspressionsniveau i HepG2-cellelinjen. Ved cellulær proliferationsanalyse og FACS-test fandt vi detceller transficeret med siCDC20 oligonukleotider viste nedsat væksthastighed og øget andel af celler i G2/M-trin.

den specifikke nedbrydning af CDC20 af siRNA viste enundertrykt virkning mod levercancercelleproliferation invitro, hvilket indikerede, at overekspression af CDC20 muligvis forventes at fremskynde celleproliferation og fremme tumorinitiering og progression af HCC. Leverkræftcellerne medundertrykt cdc20-ekspression blev induceret til at akkumulere inG2/M-fase, som kan være ansvarlig for inhiberingen af cellevækst. Cyclinafhængig kinasehæmmer 1a (p21), som er kendtat deltage i G2/M-kontrolpunktet (33), viste sig at være opreguleret, når CDC20-ekspressionen blev specifikt undertrykt i leverkræftceller. P21 kan hæmme aktiviteten af CDK ‘ er, der fører tilophobning af ikke-fosforyleret RB-tumorundertrykkelsesprotein, hvilket hæmmer transkriptionel aktivering af E2F og efterfølgendeforhindrer cellernes indtræden i S-fase af cellecyklussen(34).

afslutningsvis er dette den første undersøgelse rettet modundersøgelse af CDC20-ekspression i HCC-væv og cellelinjer, hvilket giver et nyt fokus, som CDC20 kan være en klinisk relevant indikator og apromising terapeutisk mål for HCC. Ikke desto mindre er der behov for yderligere undersøgelser, der fokuserer på de molekylære mekanismer i CDC20 i indledningen og progressionen af HCC og forskning om den prognostiske betydning afcdc20.

anerkendelser

forfatterne takker deres kolleger frainstitut for bioteknologi fra Academy of Military MedicineSciences for deres tekniske support.

	Parkin DM: Global cancer statistics in theyear 2000. Lancet Oncol. 2:533–543. 2001.PubMed/NCBI
	El-Serag HB and Rudolph KL: Hepatocellularcarcinoma: epidemiology and molecular carcinogenesis.Gastroenterology. 132:2557–2576. 2007. View Article : Google Scholar : PubMed / NCBI
	Jemal a, Bray F, Center MM, Ferlay J, Varde og Forman D: Global kræftstatistik. CA kræft J Clin.61:69–90. 2011. Se artikel: Google Scholar
td ropspan=”1″ colspan=”1″> Severi t, van Malenstein H, Verstype C andvan Pelt JF: Tumor initiering og progression i hepatocellularcarcinoma: risikofaktorer, klassificering og terapeutiske mål.Acta Pharmacol Sin. 31:1409–1420. 2010. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Michielsen P og Ho e: Viral hepatitis Band hepatocellulært carcinom. Acta Gastroenterol Belg. 74:4–8.2011.
	McGivern DR og citron SM: Virusspecifikmekanismer for carcinogenese i hepatitis C-virus associeret leverkræft. Onkogen. 30:1969–1983. 2011. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Fung TK and Poon RY: En rutsjebane ridemed de mitotiske cykliner. Semin Cell Dev Biol. 16:335–342. 2005.Se artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	har Homologitil Saccharomyces cerevisiae celledelingscyklusproteiner cdc20og cdc4. Mol Celle Biol. 14:3350–3363. 1994.
	Peters JM: Cellebiologi: checkpointbremsen lettet. Natur. 446:868–869. 2007. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Fang G, Yu H og Kirschner mv: Directbinding af CDC20 protein familiemedlemmer aktiverer detanafasefremmende kompleks i mitose og G1. Mol-Celle. 2:163–171.1998. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Cho HJ, Lee EH, Han SH, et al: Nedbrydning af human RAP80 er cellecyklus reguleret af Cdc20 og Cdh1 allestedsnærværende. Mol Kræft Res. 10: 615-625. 2012. Se artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kidokoro t, Tanikava C, Furukava Y,Katagiri T, Nakamura Y og Matsuda K: CDC20, en potentiel kræftterapeutisk mål, er negativt reguleret af p53. Onkogen.27:1562–1571. 2008. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Chang, Ma Y, Ji B, et al: Øget cdc20-ekspression er forbundet med differentiering og progression af pancreas-duktaladenocarcinom. J Hematol Oncol.5:152012. Se artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Kim JM, Sohn HY, Yoon SY, et al:identifikation af gastrisk kræftrelaterede gener ved hjælp af en cDNAmicroarray indeholdende nye udtrykte sekvensmærker udtrykt igastriske kræftceller. Clin Kræft Res. 11: 473-482. 2005.PubMed / NCBI
	Espinosa AM, Alfaro a, Roman-Basaure E, etal: mitose er en kilde til potentielle markører til screening ogoverlevelse og terapeutiske mål i livmoderhalskræft. PloS One.8:.PubMed / NCBI
	Ouellet V, Guyot MC, Le Page C, et al:Vævsarray analyse af ekspression mikroarray kandidateridentificerer markører forbundet med tumorkvalitet og resultat inserøs epithelial ovariecancer. Int J Kræft. 119:599–607. 2006.Se artikel: Google Scholar
TD ropspan=”1″colspan=”1″> Roessler s, Jia HL, Budhu A, et al: Aunik metastasegensignatur muliggør forudsigelse af tumorrelapse hos patienter med hepatocellulært carcinom i det tidlige stadium. CancerRes. 70:10202–10212. 2010. Se artikel: Google Scholar
	Irisarry RA, Hobbs B, Collin F, et al:udforskning, normalisering og resumeer af data med høj densityoligonukleotid array probe level. Biostatistik. 4:249–264.2003. Vis artikel: Google Scholar
	Dai M, Vang P, Boyd AD, et al: Evolvinggene / transcript definitioner ændrer fortolkningen af GeneChip data væsentligt. Nukleinsyrer Res. 33: e1752005. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Tusher VG, Tibshirani R og Chu G:Signifikansanalyse af mikroarrays anvendt på ioniseringsstrålingsresponset. Proc Natl Acad sci USA. 98:5116–5121. 2001.Se Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Huang, Tian HY, Hu, Hu, Ju YB, Jand Yao KT: GenCLiP: et program til klyngning af genlisterved litteraturprofilering og konstruktion af Gen co-forekomstnetværk relateret til brugerdefinerede søgeord. BMC Bioinformatik. 9:3082008.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Adhikary s og Eilers M: Transkriptionelregulering og transformation af Myc-proteiner. Nat Rev Mol CellBiol. 6:635–645. 2005. Viekvartiklen : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Detre S, Saclani Jotti G and Dowsett M: A’quickscore’ method for immunohistochemical semiquantitation:validation for oestrogen receptor in breast carcinomas. J ClinPathol. 48:876–878. 1995.
	Früh MPM: EGFR IHC score for selection ofcetuximab treatment: Ready for clinical practice? Transl LungCancer Res. 1:145–146. 2012.
	Hvang LH, Lau LF, Smith dl, et al: Buddingyeast Cdc20: et mål for spindelkontrolpunktet. Videnskab.279:1041–1044. 1998. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Kops GJ, væver BA og Cleveland DV: på vejen til kræft: aneuploidi og det mitotiske kontrolpunkt. Nat RevCancer. 5:773–785. 2005. Google Scholar : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Mondal G, Sengupta s, Panda CK, Gollin SM,Saunders vs. og Roychoudhury s: overekspression af Cdc20 fører tilimpairment af spindelsamlingen checkpoint og aneuploidiseringi oral cancer. Carcinogenese. 28:81–92. 2007. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
td ropspan=”1″> Moura IM, Delgado ML, Silva PM, et al:høj CDC20-ekspression er forbundet med dårlig prognose i oralskvamcellekarcinom. J Oral Pathol Med. 43:225–231. 2013.Se artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
td ropspan=”1″> Hu KS, Vang DS, et al: Cdc20overekspression forudsiger en dårlig prognose for patienter medkolorektal cancer. J Transl Med. 11:1422013. Se artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Yeong FM, Lim HH, Padmashree CG og SuranaU: udgang fra mitose i spirende gær: bifasisk inaktivering af theCdc28-Clb2 mitotisk kinase og Cdc20 ‘ s rolle. Mol-Celle.5:501–511. 2000. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Huang HC, Shi J, Orth JD og Mitchison TJ:bevis for, at mitotisk udgang er et bedre kræftterapeutisk målend spindelmontering. kræftcelle. 16:347–358. 2009. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	vil være, vil L, J, et al: Cdc20: apotential roman terapeutisk mål for kræftbehandling. Curr PharmDes. 19:3210–3214. 2013. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Bun F, Dutriauks a, Lengauer C, et al:krav til p53 og p21 for at opretholde G2-anholdelse efter DNA-skade.Videnskab. 282:1497–1501. 1998. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	brønde J, Boyd KE, Fry CJ, Bartley SM andFarnham PJ: Målgenspecificitet af E2F og lommeproteinfamiliemedlemmer i levende celler. Mol Celle Biol. 20:5797–5807. 2000.Se Artikel : Google Scholar