gulerod (Daucus carota) er en vinter krydret toårig plante, der dyrkes for sin spiselige taproot. Det er en af de mest forbrugte og producerede grøntsager på grund af dets diætvariation i farve, smag, fiber og vitamin A samt dets forbrug i både rå og kogte former. Mere end 20 millioner tons af det produceres hvert år til konsum.

vævskulturpraksis har været meget populær i kloning af planter. Den første undersøgelse af gulerodsvævskultur blev rapporteret i 1939 af Gautheret og Nobecourt. Imidlertid, Manager Et al. og Reinert rapporterede den første undersøgelse af “gulerodsembryogenese”; de forsøgte at dyrke rødderne ved hjælp af cellesuspension og callus kulturer.

somatisk embryogenese er en effektiv metode til at forstå og undersøge de biokemiske, fysiologiske og genetiske aspekter af plantecellekultur.

mange undersøgelser af gulerodsvævskulturen førte til udviklingen af en simpel metode til embryogenese i gulerødder. Ifølge metoden kan væksten af gulerodskulturer induceres ved blot at fjerne hormonet 2,4-D fra cellesuspensionskulturer. Nu bruges guleroden ofte som en eksperimentel model til analyse af somatisk embryogenese i forskellige laboratorier over hele verden.

materiale og udstyr, der kræves til etablering af kulturen

steriliserede materialer

• 5 sprød callus-kultur af gulerod, uforurenet og opretholdt ved 25 liter.
• 5 Erlenmeyer kolber (250 ml), indeholdende dyrkningsmedium med 5 gange 10-8 g/ml 2, 4-D.
• 5 målecylindre (100 ml) med foliehætter.
• 2 spatler.
• 25 ark aluminiumsfolie (100 * 100 mm).
• 2 stykker nylon eller rustfrit stål sigter med en porøsitet på 250 liter, som kan indsættes i åbningen af målecylindrene.
• 5 petriskåle.

ikke-steriliserede materialer

• vandtæt mærkningspen
• roterende rystemaskine
• Bunsen-brænder
• 1 Erlenmeyer-kolbe (150 ml) indeholdende 95% ethanol
• Parafilm

procedure for initiering og etablering af kulturen

1. tag rørene af callus kultur, steril munden af alle 5 rør og overfør callus til petriskålen separat (5 calli i 5 petriskåle).
2. tag en 250 ml kanonisk kolbe indeholdende kulturmediet og 2, 4-D.
3. Overfør alle 5 calli fra petriskålen til 5 kanoniske kolber, separat.
4. flamme / steril munden på kolberne og dæk dem med hætten. Fastgør hætten ved hjælp af parafilm.
5. anbring alle kolber, der indeholder kulturen, på den roterende rystemaskine i mørk eller lav lysintensitet ved 25 liter.
6. efter 7 dage overføres kolberne fra rysteren til et sterilt rum.
7. Fjern parafilmen og foliehætten fra hver kolbe og flamme/steril munden på kolberne.
8. Overfør suspensionen af hver kolbe til en steril 100 ml cylinder separat ved at føre den gennem en sigte.
9. lad indholdet sætte sig i 10 minutter, og kasser derefter supernatanten.
10. Overfør resterne af celler, der er tilbage i målecylinderen, til en 250 ml kolbe indeholdende 60 ml frisk medium.
11. Gentag trin 10 for hver kulturkolbe.
12. sæt alle de fem kolber på rysteren igen.
13. efter 7 dage gentages den procedure, du har gjort før (fra trin 6-10). Denne gang tager dog kun 1/5 af de resterende celler som inokulum.
14. gentag proceduren omkring 3-4 gange. Ved at gøre det forbliver kun enkeltceller eller små aggregater i gulerodssuspensionen.
15. for gulerodscellesuspension varierer antallet af passende celler mellem 105 og 3 h 105 celler/ml eller 100 og 300 mg (frisk vægt) inokulum i et volumen på 60 ml frisk medium indeholdende medier og 5h10-8 g/ml, 2,4-D.
16. en overførselsperiode på 7 dage er passende for guleroden at få enkelte celler i suspensionskulturen.

Approximate Schedule of the Culture

Event	Timing (approximate)
Initiation of cell suspension and determination of total cell number and PCV (packed cell volume)	Day 0
First transfer of cultures	Day 8
Fourth transfer of cultures	Day 29

Result

What should you observe while experimenting? Her er nogle punkter, du skal huske, mens du noterer dine resultater.

• dato og varighed af forsøget.
• antallet af anvendte kulturer og behandlinger.
• Optag morfologi og antal inficerede kulturer med et interval på tre uger.
• Bestem PCV (pakket cellevolumen) i begyndelsen og slutningen af overførslen af kulturen.
• anslå det samlede celletal efter 3 subkulturer på dag 1, 2, 4 og 7, og plot en graf mod tiden.
• Undersøg forholdet mellem inokulumets tæthed og vækstmønsteret.suspensionskulturen giver en fordel i forhold til andre kulturer, da den tillader bevægelse af vævet i kulturmediet, der letter gasudveksling. Desuden fjerner det enhver polaritet af vævs-og næringsgradienten inden for og ved medierne.
  

  anvendelse af vævskultur til gulerod

  1. for at klone taproots.
  2. for at studere den mutante form af gulerødderne.
  3. at studere de fysiologiske reaktioner af gulerod, der kan lette en forståelse af andre planter samt.
  4. for at studere væksten og udviklingen af gulerod fra en enkeltcelle.
  5. at studere gulerodens stressrespons, der også giver et indblik i reaktionerne fra andre planter.
  6. at generere hundredvis af transgene planter fra suspensionen af enkeltceller til ethvert eksperimentelt formål.
  1. Reinert J. og Yeoman M. M. (1982). Plantecelle-og vævskultur: en laboratoriehåndbog. Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, Nyork.
  2. Hardegger M., Shakya R. (2004) Transformation af gulerod. I: Curtis I. S. (eds) transgene afgrøder af verden. Springer, Dordrecht. https://doi.org/10.1007/978-1-4020-2333-0_22.
  3. vækst og opdeling af gulerodsceller i suspensionskultur. (1970). Plante-og Cellefysiologi. DOI: 10.1093 / fodboldjournaler.pcp.a074564.
  4. https://www.atzlabs.com/prodcut-info/C1955-Carrot -…

  fik nogle PCT historie at dele?
  vi vil meget gerne høre din feedback og forslag!
  udvalgte PCT – produkthistorier vil også blive vist på vores hjemmeside. For ikke at glemme, kan nogle godbidder finde en vej til dit hjem sammen med det.
  Del dine forslag & historie med mig på [email protected]