cirkulerende celleredit
de teknikker, der kræves for at opnå isoleret hjertemikroskopi eller varierer afhængigt af den krævede celletype. Cirkulerende celler såsom blodlegemer eller nogle tumorceller kan isoleres ved at tage en blodprøve. Da blodprøver indeholder en blanding af mange forskellige celletyper, skal der anvendes en metode til at adskille celler i forskellige typer. Den mest anvendte metode til dette er strømningscytometri, hvor en automatiseret analysator inspicerer en smal strøm af celler. I en version af denne teknik, et lys skinnes på strømmen af celler, og analysatoren registrerer det reflekterede lys eller fluorescens, før du bruger denne information til hurtigt at manøvrere cellerne af interesse ind i et opsamlingskammer.
fast vævredit
når man beskæftiger sig med fast væv, kan det være mere udfordrende at opnå væv til celleisolering. Overskydende humant væv kan undertiden opnås på tidspunktet for planlagt operation, for eksempel udskæres prøver af højre atrial vedhæng ofte og kasseres under åben hjerteoperation, såsom koronar bypass-operation. Andre væv, såsom prøver af bugspytkirtlen eller blæren, kan tages som en biopsi. Alternativt opnås væv fra dyr ofte ved at ofre dyret.
når en vævsprøve er opnået, skal den omringes eller perfunderes af en opløsning ved en passende temperatur, der indeholder de salte og næringsstoffer, der er nødvendige for at holde cellerne i live. Dette kan udføres ved blot at nedsænke vævet i opløsningen eller kan involvere mere komplekse arrangementer såsom Langendorff perfusion. Almindeligt anvendte opløsninger omfattede ændringer af Tyrodes opløsning eller Krebs og Henseleits opløsning disse opløsninger indeholder præcise koncentrationer af elektrolytter inklusive natrium, kalium, calcium, magnesium, fosfat, chlorid, og glukose. Koncentrationerne af disse elektrolytter skal nøje afbalanceres under hensyntagen til osmotisk tryk. Opløsningens surhed skal reguleres, ofte ved hjælp af en pH-buffer, såsom HEPES. Isolering af celler fra nogle væv kan forbedres ved iltning af opløsningen. I de indledende faser er perfusion af vævet med en opløsning, der ikke indeholder calcium, især nyttig ved isolering af hjertemyocytter, da fraværet af calcium forårsager adskillelse af de interkalerede diske.proteolytiske stoffer kan derefter tilsættes til opløsningen. Collagen (collagenaser) bruges ofte til isolering af celler fra hjertet eller blæren. Generelle formål, der fordøjer mange slags protein (proteaser) kan også anvendes. Når celler isoleres fra hjernevæv, kan det være nødvendigt med andre stoffer, der nedbryder DNA (Dnaaser).ud over at fordøje den ekstracellulære matrice kan disse proteiner også fordøje andre vigtige proteiner, der er essentielle for, at cellerne af interesse kan fungere. Hvis celler udsættes for disse celler for længe, resulterer celledød, men hvis de ikke udsættes for dem længe nok, vil fordøjelsen af den ekstracellulære matrice ikke være fuldstændig. Efter at cellerne er blevet fjernet fra vævet ved at perfusere det med en anden opløsning, der ikke indeholder dem, kan cellerne adskilles mekanisk eller dissocieres. En simpel teknik til dissociation af celler involverer at skære vævet i små stykker, før du omrører bidderne i en opløsning ved hjælp af en pipette.
