cDNA-kloning

revers transkription af RNA til komplementært DNA (cDNA) er det første trin i mange molekylærbiologiske arbejdsgange, herunder genekspressionsundersøgelser ved hjælp af realtids-PCR, genkloning og i oprettelsen af cDNA-biblioteker.

et cDNA-bibliotek er en samling af klonede DNA-sekvenser, der er komplementære til mRNA ‘ et, der blev ekstraheret fra en given celle eller væv. Biblioteket repræsenterer kun de transkriberede sekvenser inden for en bestemt prøve og kan give et væld af oplysninger om identiteten og funktionaliteten af specifikke gener. cDNA-biblioteker giver også indsigt i overflod af RNA produceret i en prøve, fordi jo mere et mRNA udtrykkes, jo mere cDNA vil blive produceret.

Ved konstruktion af cDNA-biblioteker er det vigtigt, at cDNA-klonerne er repræsentative for den oprindelige RNA-population, både med hensyn til deres fulde længde og relative overflod. Dette betyder, at valget af revers transkriptase anvendt i dette trin er af kritisk betydning. Ved kloning af cDNA ‘ er og oprettelse af cDNA-biblioteker anbefaler vi vores UltraScript og UltraScript 2.0 sortiment af produkter. Disse meget aktive og termostabile stoffer er i stand til at syntetisere mere cDNA-produkt i fuld længde, selv med begrænsede mængder RNA, RNA udtrykt i lave niveauer eller indeholdende en høj grad af sekundær struktur.