TEXT

řada lidských nádorů jsou citlivé na mitotické stresu, z čehož vyplývá, checkpoint vady. Mnoho proteinů, které obsahují domény spojené s forkhead (FHA), jsou kontrolními body buněčného cyklu. Pro izolaci nových mitotických Checkpoint genů hledali Scolnick a Halazonetis (2000)databázi est pro cDNA obsahující domény FHA. Identifikovali cDNA se nazývá CHFR pro stanoviště s forkhead a ring finger domény‘, který kóduje 664-aminokyseliny bílkovin s FHA a ring finger domény v rámci jeho N konci. V jeho C konci, CHFR obsahuje cystein bohaté oblasti, které se nezobrazuje významné podobnosti bílkovin v GenBank databázi, ale je velmi zachovaná mezi člověkem a myší. Northern blot analysis, exprese CHFR je všudypřítomná v normálních lidských tkáních; nicméně, 3 z 8 zkoumané lidské rakovinné buněčné linie neobsahovaly CHFR mRNA. Tyto stejné buněčné linie nevyjádřil CHFR bílkovin, určena immunoblot assay. Scolnick a Halazonetis (2000) ukázaly, že gen CHFR byl inaktivován kvůli nedostatku exprese nebo mutací ve 4 z 8 zkoumaných lidských rakovinných buněčných liniích. Normální primárních buněk a nádorových buněčných linií exprimujících wildtype CHFR vystavoval zpoždění vstupu v metafázi, kdy centrosome oddělení byla inhibována mitotické stresu. Naproti tomu nádorové buněčné linie, které ztratily funkci CHFR, vstoupily do metafázy bez prodlení. Ektopická exprese divokého typu CHFR obnovila zpoždění buněčného cyklu a zvýšila schopnost buněk přežít mitotický stres. Tak, Scolnick a Halazonetis (2000) k závěru, že CHFR definuje checkpoint, že zpoždění uvedení do metafáze v reakci na mitotické stresu.

Toyota et al. (2003) analyzoval vzorec exprese CHFR v řadě lidských rakovinných buněčných linií a primárních nádorů. Našli CpG metylace závislá umlčování CHFR výraz v 45% nádorových buněčných linií, 40% primárních kolorektálních karcinomů, 53% kolorektálních adenomů, a 30% primárního karcinomu hlavy a krku. Exprese CHFR byla přesně korelována jak s methylací CpG, tak s deacetylací histonů H3 a H4 v regulační oblasti bohaté na CpG. Buňky s methylací CHFR měly při léčbě inhibitorem mikrotubulů skutečně vysoký mitotický index. To znamená, že buňky, ve kterých byl CHFR epigeneticky inaktivován, představovaly alely ztráty funkce pro kontrolu mitotického kontrolního bodu. Dohromady, tato zjištění vrhají světlo na cestu, po které mitotického kontrolního bodu se obešel v nádorových buňkách a naznačují, že inaktivace checkpoint geny je mnohem rozšířenější, než se dříve předpokládalo.

Ahel et al. (2008) identifikoval novou poly(ADP-ribóza)-vázající zinek prst (PBZ) motiv v řadě eukaryotické proteiny podílející se na poškození DNA odpověď a checkpoint nařízení. Motiv PBZ je také vyžadován pro posttranslační poly (ADP-ribosyl) ation. Ahel a spol. (2008) prokázala interakce poly(ADP-ribóza) s tímto motivem ve 2 zástupce lidské proteiny, APLF (611035) a CHFR, a ukázal, že akce CHFR v antephase stanoviště jsou zrušena mutace v PBZ nebo inhibice poly(ADP-ribóza) syntézu.

Exprese mitotického kontrolního bodu bílkovin CHFR je ztracen ve 20 až 50% primárních nádorů a nádorových buněčných linií. Prozkoumat, zda downregulace CHFR přispívá přímo k tumorigenezi, Yu et al. (2005) generované Chfr knockout myši. Chfr-deficientní myši bylo zjištěno, že se rakovina-náchylný, rozvíjet spontánní nádory, a zvýšily kůže, výskyt nádoru po léčbě s dimethylbenz(alfa)anthracenu. Nedostatek Chfr vedl k chromozomální nestabilitě embryonálních fibroblastů a reguloval mitotickou kinázu aurora A (603072), která je často upregulována v různých nádorech. Chfr fyzicky interagoval s Aurorou a a všudypřítomnou Aurorou a in vitro i in vivo. Yu et al. (2005) dospěl k závěru, že CHFR je tumor supresor a že zajišťuje chromozomální stabilitu kontrolou hladin exprese klíčových mitotických proteinů, jako je aurora a.