Narušení buněk

od roku 1940 se vysoký tlak používá jako metoda narušení buněk, zejména francouzským tlakovým lisem nebo zkráceně francouzským lisem. Tato metoda byla vyvinuta Charles Stacy francouzské a využívá vysoký tlak přinutit buňky přes úzký otvor, způsobuje buňky, aby se lyse vzhledem k třecím silám, které nastávají v celé diferenční tlak. Zatímco francouzské Lisy se staly základem položky v mnoha mikrobiologických laboratoří, jejich výroba byla do značné míry přerušena, což vede k oživení v alternativní aplikace podobné technologie.

moderní disruptory fyzikálních článků obvykle pracují buď pneumatickým nebo hydraulickým tlakem. Ačkoli pneumatické stroje jsou obvykle nižší náklady, jejich výkon může být nespolehlivý kvůli změnám zpracovatelského tlaku během zdvihu vzduchového čerpadla. To je obecně za to, že hydraulické stroje nabízejí vynikající lysing schopnost, zvláště při zpracování těžší rozbít vzorky, jako jsou kvasinky nebo Gram-pozitivní bakterie, vzhledem k jejich schopnost udržovat konstantní tlak v celém zdvihu pístu. Jako francouzský Tisk, který je ovládán hydraulickým tlakem, je schopen více než 90% lýza nejčastěji používané typy buněk je často brán jako zlatý standard v lýza výkon a moderní stroje jsou často porovnávány nejen z hlediska rozpadu efektivitu, ale také pokud jde o bezpečnost a snadnost použití. Někteří výrobci se také snaží zlepšit tradiční design změnou vlastností v těchto strojích, kromě tlaku, který vede vzorek otvorem. Jedním z takových příkladů jsou Constant Systems, kteří nedávno ukázali, že jejich buněčné disruptory nejen odpovídají výkonu tradičního francouzského tisku, ale také že usilují o dosažení stejných výsledků při mnohem nižším výkonu.

technologie tlakové cyklování („PCT“). PCT je patentovaný, což umožňuje technologie, platforma, která využívá střídající se cykly hydrostatického tlaku mezi vnějším a ultra-vysoké úrovně (až 90.000 psi) bezpečně, pohodlně a reprodukovatelně řídit akce molekul v biologických vzorcích, např., prasknutí (lýza) buněk a tkání z lidských, živočišných, rostlinných a mikrobiálních zdrojů a inaktivace patogenů. Pct-vylepšené systémy (nástroje a spotřební materiál) řeší některé náročné problémy spojené s přípravou biologických vzorků. PCT výhody patří: (a) těžba a využití více membránových proteinů, (b) rozšířené zdravé trávení, (c) diferenciální lýza ve smíšeném vzorku základu, (d), inaktivace patogenu, (e) zvýšená detekce DNA, a (f) vybrané přípravy vzorku, procesu kontroly.

Microfluidizer metoda použitá pro mobilní narušení silně ovlivňuje fyzikálně-chemické vlastnosti roztrhli buněčné suspenze, jako jsou velikost částic, viskozita, výnos bílkovin a enzymové aktivity. V posledních letech metoda Mikrofluidizátoru získala popularitu v narušení buněk díky snadnému použití a účinnosti při narušení mnoha různých druhů buněk. Na Microfluidizer technologie licencované od společnosti Arthur D. Little a byl nejprve vyvinut a využit v roce 1980, zpočátku začíná jako nástroj pro liposom stvoření. Od té doby se používá v jiných aplikacích, jako jsou nanoemulze narušení buněk a redukce velikosti pevných částic.

Použitím mikrokanálů s pevnou geometrií a zesilovacím čerpadlem se generují vysoké smykové rychlosti, které prasknou buňky. Tato metoda buněčné lýzy může způsobit zlomení více než 90% buněk E. coli.

mnoho proteinů je extrémně citlivých na teplotu a v mnoha případech může začít denaturovat při teplotách pouze 4 stupně Celsia. V rámci microchannels, teploty vyšší než 4 stupně celsia, ale stroj je navržen tak, aby rychle ochladí tak, že čas jsou buňky vystaveny zvýšeným teplotám je velmi krátký (doba 25 ms-40 ms). Díky této účinné regulaci teploty poskytuje Mikrofluidizátor vyšší hladiny aktivních proteinů a enzymů než jiné mechanické metody, pokud jsou proteiny citlivé na teplotu.

změny viskozity jsou také často pozorovány při narušení buněk. Pokud je viskozita buněčné suspenze vysoká, může to ztěžovat následnou manipulaci-jako je filtrace a přesné pipetování. Změny viskozity pozorované u Mikrofluidizátoru jsou relativně nízké a klesají s dalšími dodatečnými průchody strojem.

na rozdíl od jiných mechanických narušení metody Microfluidizer poruší buněčné membrány účinně, ale jemně, což vede k poměrně velké fragmenty buněčné stěny (450 nm), a proto je jednodušší oddělit obsah buňky. To může vést ke zkrácení doby filtrace a lepší separaci odstředění.

technologie Microfluidizer měří od jednoho mililitru do tisíců litrů.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.