Cirkulující cellsEdit
techniky potřebné k získání izolovaných buněk se liší v závislosti na buněčném typu požadováno. Cirkulující buňky, jako jsou krevní buňky nebo některé nádorové buňky, lze izolovat odebráním vzorku krve. Protože vzorky krve obsahují směs mnoha různých typů buněk, musí být použita metoda oddělení buněk do různých typů. Nejčastěji používanou metodou je průtoková cytometrie, během níž automatizovaný analyzátor kontroluje úzký proud buněk. V jedné verzi této techniky, světlo je zářil na proud z buňky, a analyzátor detekuje odražené světlo nebo fluorescence před použitím této informace rychle manévrovat buňky zájem do sbírky komory.
pevné tkáněeditovat
při práci s pevnými tkáněmi může být získání tkáně pro izolaci buněk náročnější. Přebytek lidské tkáně může být někdy získán v době plánované operace, například vzorky přívěsku pravé síně jsou často vyříznuty a vyřazeny během operace otevřeného srdce, jako je operace bypassu koronární arterie. Jiné tkáně, jako jsou vzorky pankreatu nebo močového měchýře, mohou být odebrány jako biopsie. Alternativně se tkáň ze zvířat často získává obětováním zvířete.
Po vzorku tkáně bylo získáno, musí být obklopen nebo promývat roztokem v přiměřené teplotě, obsahující soli a živiny potřebné k udržení buňky naživu. To může být provedeno jednoduchým ponořením tkáně do roztoku nebo může zahrnovat složitější uspořádání, jako je perfúze Langendorffa. Běžně používané řešení zahrnuté změny Tyrode řešení nebo Krebs a Henseleit řešení Tyto roztoky obsahují přesné koncentrace elektrolytů, včetně sodíku, draslíku, vápníku, hořčíku, fosfátů, chloridů a glukózy. Koncentrace těchto elektrolytů musí být pečlivě vyváženy, přičemž je třeba věnovat pozornost osmotickému tlaku. Kyselost roztoku musí být regulována, často za použití pH pufru, jako je HEPES. Izolace buněk z některých tkání může být zlepšena okysličením roztoku. V počátečních fázích, perfuze tkání s řešením, které neobsahuje vápník je užitečné zejména při izolaci srdeční myocyty, jako absence vápníku způsobuje oddělení interkalární disky.
proteolytické enzymy pak mohou být přidány do roztoku. Enzymy, které tráví kolagen (kolagenázy), se často používají při izolaci buněk ze srdce nebo močového měchýře. Mohou být také použity univerzální enzymy, které tráví mnoho druhů bílkovin (proteáz). Při izolaci buněk z mozkové tkáně mohou být vyžadovány další enzymy, které štěpí DNA (Dnaázy).
Tyto enzymy, kromě trávení extracelulární matrix, můžete také strávit další důležité proteiny nezbytné pro buňky v zájmu funkce. Pokud jsou buňky vystaveny těmto enzymům příliš dlouho, dochází k buněčné smrti, ale pokud nejsou vystaveny enzymům dostatečně dlouho, nebude trávení extracelulární matrice úplné. Po enzymů byly odstraněny z tkáně pomocí perfuze to druhé řešení, které neobsahuje enzymy, buňky mohou být strojně oddělené, nebo oddělit. Jednoduchá technika pro oddělení buněk zahrnuje řezání tkáně do malé kus před občasného míchání kousky v roztoku pomocí pipety.
