Úvod

Hepatocelulární karcinom (HCC), který představuje themajor histologický podtyp primární rakoviny jater, je fifthmost časté rakoviny po celém světě a třetí nejčastější příčinou úmrtnosti ryb (1,2). Nejvyšší míra rakoviny jater je zjištěna v rozvojových zemích, zejména ve východní / jihovýchodní Asiia střední / západní Africe, zatímco sazby jsou nízké v jižní-střední, západní Asii, Severní a východní Evropě (3). Genetická změna a epigenetichivysoké rizikové faktory, jako je chronická infekce HBV nebo HCV, jaterní cirhóza, alkoholické onemocnění jater a aflatoxiny, představují vysokou morbiditu HCC (4-6).Nicméně, molekulární mechanismus doprovázenhepatokarcinogeneze a progrese je stále do značné míry nejasná.Tak, to je důležité pro nás pro objasnění etiologie a investigatethe životně molekulární změny hlubších hepatocellularcarcinoma zahájení a progresi, a v konečném důsledku zlepšit ourcurrent pojmy pro diagnostiku, screening a léčba thisdisease.

Během procesu hepatocarcinogenesis, theabrogation buněčného cyklu, kontrolní body, je důležitým znakem může podporovat vznik rakoviny (2).Jako jeden z regulátorů buněčného cyklu kontrolní bod, celldivision cyklu 20 (CDC20) zdá se, že působí jako regulační proteininteracting s anafázi podporující komplex/cyclosome (APC/C)buněčného cyklu, které je nutné pro anafáze zahájení andlate mitózy exit (7,8). Dva regulační faktory, CDC20 a Cdh1přímo se vážou na APC a aktivují jeho cyklinovou ubikvitinaciaktivitu během mitózy a fáze G1 (9,10).Bylo zjištěno, že receptor-associated protein, 80(RAP80), který rekrutuje BRCA1 na DNA poškození lokalit v ubiquitinsignaling dráhy indukované poškození DNA, může být narušena theanaphase-podpora complex (APC/C-Cdc20) nebo (APC/C-Cdh1) throughpolyubiquitination při mitóze, G1 fázi (11). Deplece RAP80 ukázala adefektivní kontrolu kontrolního bodu fáze G2-M a podporovala progresi mitotického buněčného cyklu.

exprese CDC20 může být pozoruhodně potlačena p53proteinem, který inhibuje maligní transformaci prostřednictvím regulace buněčného cyklu, buněčného stárnutí a genů souvisejících s apoptózou (12). Vysoká exprese CDC20has byly hlášeny v různých zhoubných nádorů, včetně pancreaticductal adenokarcinom (13), oralsquamous karcinom, rakovina žaludku (14), rakovina děložního hrdla (15) a různých nádorových buněk (14,16).Vzorec exprese CDC20 a jeho klinický význam u lidského hepatocelulárního karcinomu však nebyly objasněny.

v této studii analýzou datové sady microarray (přístupové číslo. GSE14520)z databáze genové exprese Omnibus (GEO) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) jsme zjistili, že Cdc20byl hlavním uzlem v HCC molekulárních interakčních sítích. Weexamined výraz úrovni CDC20 v primárních HCC a adjacentnon-nádorové tkáně, a hodnotí jeho clinicopathologic significancein 132 archivovány HCC vzorků. Byl zkoumán vliv knockdownu CDC20by siRNA na růst a buněčný cyklus buněk rakoviny jater. Naše zjištění naznačují, že CDC20 může hrát jakovýznamnou roli ve vývoji HCC.

Materiály a metody,

Bioinformatika analýza

Microarray dataset GSE14520 (17) byl stažen z GEO. Celkem of183 HCC a 179 odpovídajících para-karcinom tkání, které wereassayed s Affymetrix U133A GeneChips z kohorty 2 Chinesepatients byly použity v této studii. Profilování genové exprese datawas znovu shrnout pomocí RMA metoda (18) a Entrez gene-centric CDF soubory(19) (místo originalAffymetrix CDF soubory), které filtruje non-specifické sondy na theGeneChips a spojil několik sonda sady představující sameEntrez genu do jedné sondy nastavit. Význam analýzu microarrays(SAM) (20) byla provedena stanovit odlišně vyjádřené genů mezi HCC a correspondingpara-karcinom tkání. Delta byla nastavena na 2,25 a prahová hodnota ofFDR byla nastavena na 0,001. Byly studovány geny nadměrně exprimované v HCC, které byly exprimovány ve více než 50 tkáních HCC, ale méně než 10 odpovídajících tkáních para-karcinomu. Geny byly dále analyzovány pomocí softwaru GenCLiP (21) (http://ci.smu.edu.cn) za účelem anotace genových funkcí a strukturování sítí molekulárních interakcí.

etické prohlášení

klinické vzorky byly použity pouze pro výzkumné účely. Schválení bylo získáno od Etické komise Všeobecné nemocnice ChinesePLA (LREC 2012/40). Všechny vzorky byly shromážděnypod podmínkou předchozího písemného informovaného souhlasu pacientů.

Pacienti a vzorky tkáně

Šestnáct párů čerstvé HCC a přilehlé non-tumortissues použít pro real-time PCR a western blot analýzy werecollected během operace z Čínské PLA General Hospital(Peking, Čína), od listopadu 2012 do února 2013. Tkáně byly až do použití zmrazeny v kapalném dusíku. Paraffin-embedded,archivovány HCC a přilehlých nenádorových tkáních používá forimmunohistochemistry (IHC) byly získány z 132 HCC pacientů whounderwent částečné resekce jater ve stejné nemocnici betweenJanuary, 2006 a prosinci 2007. Střední věk pacientůbyl 52 let (rozmezí 24-80 let).

Buněčné kultury

Jeden normální jaterní buněčné linie (LO2) a tři HCC celllines (HepG2, SMMC7721, Huh7) byly zakoupeny od Americké TypeCulture Collection (ATCC, Manassas, VA) nebo Čínské Akademie věd Buněčné Banky a byly udržovány v Ústavu ofBiotechnology, Akademie Vojenských Lékařských Věd. Všechny buňky weremaintained v Dulbecco ‚s modified Eagle‘ s medium (DMEM, Invitrogen,CA) doplněném 10% fetálního bovinního séra (FBS, Gibco, Carlsbad,CA) a 2 mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilin, 100 µg/mlstreptomycin při 37°C s 5% CO2.

RNA extrakce, cDNA syntézu andreal-time PCR analýzy

Celková RNA byla extrahována z buněk linie a tissuesamples pomocí TRIzol reagent (Invitrogen) podle výrobce pokyny. Celkem 2 µg RNA byl reversetranscribed pomocí TransScript a cDNA Synthesis Kit fromTransGen Biotech (Peking, Čína). Real-time PCR was performed toexamine CDC20 mRNA level in cell lines and tissue samples by usinga Bio-Rad iQ5 Multicolor Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad,Hercules, CA). β-actin was used as an internal control fornormalization. PCR primers were designed using the Primer Premier 5software and the sequences were: CDC20 forward,5′-TCGCATCTGGAATGTGTGCT-3′; and reverse,5′-CCCGGGATGTGTGACCTTTG-3′; β-actin forward,5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′; and reverse, 5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′. Expresivní data byla normalizována na geometrický průměr genu β-aktinu a vypočtena pomocí ΔΔCt (22) a výsledky byly vyjádřeny pomocí 2−ΔΔCt.

Western blot analýzy

Western blot analýza byla provedena v rámci běžného protokolu. SDS-polyakrylamidovém gelu elektroforéza (10%) wasused oddělit protein, který byl pak electrotransferred z gelu na polyvinylidenfluorid (PVDF) membrány. Afterblocking s 5% sušeného nízkotučného mléka, 1 h, membrána wasincubated s králičí anti-lidské CDC20 polyklonální protilátky(1:1000, tak Bioworld Technologie, Sv. Louis Park, MN) po dobu 1 hodiny v roomteplota. Myší anti-lidské α-tubulinu monoklonální protilátka(1:5,000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) byl použit jako vnitřní kontrola. Po umytí s Tris-pufrovaný fyziologický roztok withTween-20 (TBST) třikrát, membrána byla inkubována po withsecondary křenovou peroxidázou konjugované protilátky proti rabbitor myší (ředění 1:5,000). Chemiluminiscenční detekce byla provedena pomocí imobilizéru Western Chemiluminescent HRP Substratekit (Millipore Corporation, Billerica, MA).

imunohistochemie (IHC) ascoring

imunohistochemie pro expresi CDC20 v HCC a přilehlých nenádorových vzorcích byla provedena za použití standardních metod.Krátce, tkáňové řezy byly inkubovány s králičí anti-CDC20diluted 1:200 (Bioworld Technologie) přes noc při 4°C, Bovinní serumalbumin (1%; BSA) bez primární protilátky byl použit jako negativecontrol. Sekundární Poly-Křenová peroxidáza (HRP)anti-králičí IgG protilátka (ZSGB-Bio, Peking, Čína) byla inkubována při pokojové teplotě po dobu 20 minut.

Všechny immunostained oddíly byly přezkoumány andscored nezávisle dvěma patology v oslepen mannerwithout znalosti clinicopathological informace, založené na H-skóre metoda, která se domnívá, že barvení intenzity spolus procento buněk barvení pozitivně (23,24).Pro metodu h-score bylo náhodně vybráno 10 polí při ×400magnifikaci. Barvení intenzity v buňkách byla hodnocena jako 0,1, 2 a 3 odpovídající negativní, slabá, střední a silné barvení, resp. V každém poli byl započítán celkový početbuněk a buněk obarvených při každé intenzitě. H-skóre bylo vypočteno podle vzorce: (%buněk obarvených v kategorii intenzity 1×1) + (%buněk obarvených v kategorii intenzity 2×2) + (%buněk obarvených v kategorii intenzity 3×3). H-skóre se lišilo od 0 do 300, kde 300 představovalo 100% silně zabarvených buněk (3+) (24). Vysoká exprese Cdc20 byla definována jako barvení H-skóre buněk ≥200.

Potlačení CDC20 malé interferingRNA (siRNA)

Double-stranded, malé interferující RNA (siRNA) wassynthesized a čistí GenePharma (Shanghai, Čína). Důsledky odpovídající kódovací oblasti lidského Cdc20byly: sense, 5′ – GGAGCUCAUCAGGCCA UUU-3′; antisense, 5 ‚- AUGGCCUGAGAGCUCCUU-3‘. Pro negativní kontrolu byla použita zakódovaná siRNA bez cíle. Tyto siRNA byly rozpuštěny indiethylpyrokarbonátovou (DEPC) vodou, aby se dosáhlo koncentrace 20µM. Jaterních nádorových buněk HepG2 byly ošetřeny s CDC20 siRNA ornegative kontrolní siRNA 20 nM pomocí INTERFERin invitro siRNA transfekce činidla (Polyplus Transfekci, NewYork, NY).

kvantitativní analýzy PCR a western blot v reálném čase byly použity pro detekci interferenčního efektu siCDC20. Buňky, které nebyly léčeny nebo léčeny negativní kontrolní sirnaoligonukleotidy byly kontrolní skupiny.

Buněčné proliferace

Dvě 25-cm2 plastových baněk byly eachinoculated s 2×105 buňky rakoviny jater (HepG2), které pak transfektovaly s 20 nM negativní kontrola siRNA a CDC20siRNA, respektive, pro 48-h inkubace. Poté byly buňky trávenya naočkovány do 6-jamkových desek obsahujících 2 ml média na jamku.Poté byly buňky ze studny tráveny a počítány počítadlem s automatizovanými buňkami (Invitrogen) každých 24 hodin až do pátého dne.

Fluorescence-activated cell sorting(FACS) test buněčného cyklu

siRNA pro CDC20 a negativní kontrola siRNAoligonucleotides byly transfektovaly do buněk HepG2 s theINTERFERin in vitro transfekci siRNA činidla pro 48 h.Po léčbě s 2 µg/ml thymidinu (Sigma-Aldrich, St. Louis,MO) za 24 h byly buňky sklizeny na 0, 3, 6, 9, 12-h afterremoving thymidinu ze střední a pevné s 70% alkoholu.Před analýzami byly buňky promyty PBS, ošetřeny 1 mg / mlrnázou a při 37°C po dobu 30 minut a poté obarveny jodidem propidiumjodidem(PI). Analýzy byly provedeny společností BD FACSCalibur (Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ) a výsledky byly analyzovány softwarem WinMDI Verze 2.9.

statistické analýzy

všechny statistické analýzy byly provedeny pomocí statistického softwarového balíčku IBMSPSS 20.0. Jednosměrná analýza variance (ANOVA) byla použita k porovnání exprese CDC20 mrnanormalizované na β-aktin v buněčných liniích. Stejná metoda byla také provedena při porovnávání histologické diferenciace v normalizovaných nádorových tkáních s normálními jaterními vzorky. Porovnání dat ve dvou skupinách bylo provedeno Studentovým t-testem. The χ2 testbyl použit k analýze vztahu mezi expresí CDC20 aklinikopatologické rysy. Bivariační korelace mezirůzné hodnoty byly vypočteny spearmanovými korelačními koeficienty.Úroveň statistické významnosti byla stanovena na P<0.05 pro alltests.

Výsledky

CDC20 je hlavní uzel v HCC molecularinteraction sítí

SAM analýza identifikovala 4,358 geny nadměrně exprimován inHCC, ve kterém 137 geny byly vyjádřeny ve více než 50 HCC buňkách,ale v méně než 10 para-karcinom tkání. GenCLiP analýzy prokázaly, mezi 137 geny, 72 geny byly v souvislosti s buněčného cyklu(P=1.238 e-15, χ2 test), 19 byly geny související tospindle shromáždění (P=2.172 e-55, χ2 test), a 26 geneswere vztahující se k segregaci chromozomů (P=5.472 e-55, byx2 test). Mezi molekulárními sítěmi postavenými s 137 geny byl CDC20 hlavním uzlem, který nebyl dříve hlášen jako příbuzný s HCC. Devět genů (NEK2, E2F1,BUB1, BUB1B, AURKB, CCNB1, CCNB2, UBE2C a CDKN2A) jsou známé tointeract s CDC20, v nichž 7 byly geny související s spindleassembly checkpoint (SAC) (Obr.1). Cílem vaku je CDC20 (25). Vyvodili jsme tedy,že v HCC nadměrná exprese CDC20 vede k absenci vaku a buňky rychlestane se aneuploidním.

CDC20 je nadměrně exprimován v HCC

Kvantitativní real-time PCR byl použit k examinetranscript úroveň CDC20 ve třech HCC buněčné linie (HepG2, SMMC-7721and Huh7), a jeden normální jaterní buněčné linie (LO2). Úroveň mRNA CDC20 byla vyšší ve všech třech buněčných liniích HCC než v normálníbuněčné linii (obr. 2).

aby bylo možné určit, zda upregulace ofCDC20 v HCC buněčných linií je podobný v HCC pacientů, jsme performedquantitative real-time PCR na 16 párů uzavřeno HCC a adjacentnormal jaterní tkáně. Jak je znázorněno na obr.3A bylo zjištěno, že CDC20 je diferencovaně nadměrně exprimován ve 14 všech zkoumaných primárních lidských vzorcích HCC ve srovnání s nerakovinovými vzorky od stejných pacientů. Kromě toho, nádor/non-nádoru(T/NT) poměr CDC20 mRNA exprese byla alespoň >2-krát ve všech těchto 14 upregulated vzorky, a nejvyšší poměr byl dokonce až o 40-krát. Hladina proteinu CDC20 byla potvrzena ve všech16 párových vzorků tkáně analýzou western blot. Obrázek J1.47v software byl použit k quantize šedý úroveň každé pásmo andcalculate na CDC20 T/NT poměr každého pacienta normalizace s-tubulinu. Výsledky ukázaly, že všechny zkoumané vzorky HCC vykazovaly vyšší úroveň exprese proteinu CDC20 s výjimkou vzorku 1 a sample4, což bylo v souladu s hladinou mRNA (obr. 3B). Tato zjištění naznačila, že cdc20 byl běžně upregulován buď v tkáních HCC, nebo v buněčných liniích.

Imunohistochemie barvení CDC20protein

Imunohistochemie (IHC) byla provedena analyzethe proteinové exprese a lokalizace CDC20 v 132paraffin-vložené archivovány HCC vzorky tkáně, včetně 14 casesof dobře diferencované, 78 případech, středně diferencovaný a 40cases chudých diferencované nádory. Protein CDC20 byl upregulován (h-skóre ≥200) v 90 (68,18%) ze 132 HCC tkání. Jak je znázorněno inFig. 4A, byly vysoké hladiny CDC20 přítomné v primárních lézích HCC a pozitivní barvení hlavnělokalizováno v cytoplazmě a jádrech. Naproti tomu CDC20 bylnegativně nebo slabě obarvené v odpovídajících nenádorových tkáních. Byquantitatively srovnání skóre CDC20 barvení mezi 132archived HCC a přilehlých nenádorových tkáních (hlavně includinghepatocirrhosis a hepatitidy), skóre CDC20 barvení wassignificantly zvýšil v HCC vzorků ve srovnání s peritumoralsamples (Obr. 4B). Kromě toho,skóre CDC20 barvení byla významně zvýšena spolu s progresí nádoru, histologické diferenciace z dobře topoorly diferencované tkáně (Obr.5).

Korelace mezi zvýšenou CDC20expression a clinicopathological parametry HCC

vztah mezi CDC20 bílkovin expressionand na clinicopatholigical funkce 132 HCC pacientů wasfurther analyzovány. Jak je shrnuto v Tabulce I, CDC20 výraz wassignificantly spojené s pohlavím (P=0.013), tumordifferentiation (P=0.000), TNM stadium (P=0.012), P53 a Ki-67expression (P=0, 023 a P=0.007). Nicméně, nostatistically významná asociace byla nalezena mezi vysokou CDC20expression a další clinicopathological vlastnosti includingage, velikost nádoru, infekce HBV, sérového AFP úrovni, jaterní cirhóza,vaskulární invaze a intra/extra jaterní metastázy. Spearmancorrelation analýza ukázala, že vysoká exprese CDC20 wasclosely související s pohlavím (R=0.215, P=0.013), chudší tumordifferentiation (R=0.421, P<0.001), pokročilým TNM staging(R=0,218 Ř, P=0.012), vyšší úroveň exprese p53 (R=0.212,P=0.014) a Ki-67 (R=0.235, P=0.007) (Tabulka II). Dohromady tyto resultsindicated, že CDC20 byl vysoce exprimován v HCC buňkách a itsexpression úzce souvisí s diferenciací andprogression HCC.

Potlačení CDC20 výraz bysiRNA

kvantitativní real-time PCR odhalila 90%transkripční úroveň potlačení CDC20 na 48 h aftertransfection s siCDC20, srovnání s neléčenými buňkami nebo cellstransfected s negativní kontrolní siRNA (Obr. 6A) (P< 0.0001). Západní blotanalýza také ukázala zjevné potlačení hladiny proteinu CDC20PO 48 hodinách po transfekci siCDC20(obr. 6B). Změněný výraz ofcyclin-dependentní kinázy 1A (p21), protein byl alsoexamined pomocí western blot analýzy a výsledky ukázaly, že P21protein úroveň byla pozoruhodně upregulated v důsledku suppressionof CDC20 (Obr. 6B).

Efekt CDC20 potlačení na cellproliferation a buněčného cyklu

Cell proliferation assay bylo zjištěno, že cellgrowth z CDC20 siRNA transfektovaly buněk byl pozoruhodně inhibitedcompared do buněk transfektovaly s negativní kontrolní siRNA(Obr. 6C). Očekávalo se, že inhibice buněčné proliferace siCDC20 bude doprovázena nejvzdálenější metafázou buněčného cyklu. Testem průtokové cytometrie byl pozorován zvýšený počet buněk ve fázi G2 / M v sicdc20transfektovaných buňkách ve srovnání s buňkami transfekovanými negativní kontrolovanou siRNA (obr. 6D). Thesedata ukázala, že suprese CDC20 inhibuje buněčný růst snížením fáze G2 / M.

Diskuse

Přes bioinformatika analýza microarraydataset z GEO databáze, jsme identifikovali CDC20, která byla majornode v HCC molekulární interakce sítě, to bylo v souvislosti withspindle assembly checkpoint (SAC) v buněčném cyklu. Duringtumorigenesis, defekty nebo narušení sestavy vřetena byly považovány za zodpovědné za zvýšenou rychlost aneuploidizace (26). Mondalet al hlásili, že CDC20 je nadměrně exprimován u primárních nádorů hlavy a krku a několika buněčných linií karcinomu dlaždicových buněk(OSCC). Vysoká úroveň exprese CDC20 v buňkách OSCC je spojena s předčasnou podporou anafázy, což vede k mitoticabnormalitám (27). Studie rovněž odhalila, že vysoké CDC20 výraz je detekován v oralsquamous karcinom a kolorektální karcinom tkání a itsoverexpression může předpovídat špatnou prognózu pro pacienty (28,29).

CDC20 je také vyžadován pro pozdní anafázové buňkyexit z mitózy (30). TargetingCDC20 výsledky v blokování mitózy výstupu, které může být bettercancer léčebné strategie pro zabíjení nádorových buněk skotsku než vřeteno-rušivé léky (31). Wang et al hlášeny thatCDC20, které mohou fungovat jako onkoproteinu na podporu theprogression a rozvoj lidských nádorů, představují promisingtherapeutic cíl (32). Z role CDC20 v tumorigenezi a prognózu několik humancancers byl hluboce zkoumal a potvrdil, omezené studieshave zkoumali potenciální funkce CDC20 v initiationand progrese hepatocelulárního karcinomu.

v této studii jsme hodnotili úroveň expresecdc20 v 16 spárovaných čerstvých zmrazených tkáních HCC a odpovídajícíchnádorové vzorky. Výsledky ukázaly, že průměrná mRNA ahladina proteinu CDC20 v tkáních HCC byla mnohem vyšší než inmatched non-nádorové tkáně. Imunohistochemie byla použita forinvestigating subcelulární umístění CDC20 a itsrelationship s klinických patologických parametrů HCC patients.By pomocí χ2 testu, jsme zjistili, že vyšší CDC20 proteinexpression úrovni byl spojen s pohlaví, diferenciace nádoru,TNM stadiu, P53 a Ki-67 exprese. Vyšetřovat potentialbiological funkce a molekulární mechanismus CDC20 v HCC, wedesigned double-stranded, malé interferující RNA (siRNA) targetingCDC20 v rozporu s jeho úroveň exprese v HepG2 cellline. Testem buněčné proliferace a FACS testem jsme zjistili, žebuňky transfektované oligonukleotidy siCDC20 vykazovaly sníženou rychlost růstu a zvýšený podíl buněk ve fázi G2/M.

konkrétní vyřazující CDC20 pomocí siRNA ukázal asuppressed účinek proti rakovině jater buněčné proliferace invitro, které ukázaly, že zvýšená exprese CDC20 možná, že očekává, že k urychlení buněčné proliferace a podporovat tumorinitiation a progresi HCC. Buňky rakoviny jater s potlačenou expresí CDC20 byly indukovány k akumulaci inG2 / M-fáze, která může být zodpovědná za inhibici buněčného růstu. Cyklin-dependentní kinázy 1A (p21), který je knownto účast v G2/M kontrolního bodu (33), se ukázala být upregulated když CDC20 výraz byl cíleně potlačen v játrech cancercells. P21 může inhibovat aktivitu CDKs vedoucí k theaccumulation z unphosphorylated Rb tumor supresorový protein, whichinhibits na transkripční aktivace E2F a subsequentlyprevents vstup buněk do S fáze buněčného cyklu(34).

Na závěr, toto je první studie zaměřené atexamining CDC20 výraz v HCC buňkách a buněčných linií, zajištěním nové zaměření, které CDC20 může být klinicky relevantní ukazatel a apromising terapeutický cíl HCC. Nicméně, další studie zaměřené na molekulární mechanismy CDC20 při zahájení aprogrese HCC a výzkum prognostického významucdc20 jsou vyžadovány.

poděkování

autoři děkují svým kolegům z Ústavu biotechnologie Akademie vojenských medicín za jejich technickou podporu.

	Parkin DM: Global cancer statistics in theyear 2000. Lancet Oncol. 2:533–543. 2001.PubMed/NCBI
	El-Serag HB and Rudolph KL: Hepatocellularcarcinoma: epidemiology and molecular carcinogenesis.Gastroenterology. 132:2557–2576. 2007. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Jemal, Bray F, Centru MM, Ferlay J, WardE a Forman D: Globální rakovina statistiky. CA rakovina J Clin.61:69–90. 2011. Zobrazit Článek : Google Scholar
	Severi T, van Malenstein H, Verslype C andvan Peltová JC: Nádor zahájení a progresi v hepatocellularcarcinoma: rizikové faktory, klasifikace a terapeutické cíle.Acta Pharmacol Sin. 31:1409–1420. 2010. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Michielsen P a Ho E: Virové hepatitidy Kapela hepatocelulárního karcinomu. Acta Gastroenterol Belg. 74:4–8.2011.
	McGivern DR a Citronovou SM: Virus-specificmechanisms karcinogeneze v hepatitidy C virus související livercancer. Onkogen. 30:1969–1983. 2011. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Fung TK a Poon RY: Horská dráha s mitotickými cykliny. Semin Cell Dev Biol. 16:335–342. 2005.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Weinstein J, Jacobsen FW, Hsu-Chen J., Wu Přikývla Baum LG: román savčí protein, p55CDC, dárek v dividingcells je spojena s protein kinázy a má homologyto na Saccharomyces cerevisiae cyklu buněčného dělení proteinů Cdc20and Cdc4. Mol Cell Biol. 14:3350–3363. 1994.
	Peters JM: Buněčná biologie: checkpointbrake se ulevilo. Povaha. 446:868–869. 2007. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Fang G, Yu H a Kirschner MW: Directbinding z CDC20 bílkovin členy rodiny aktivuje theanaphase-podpora komplex v mitóze a G1. Mol Cell. 2:163–171.1998. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Cho HJ, Lee EH, Han SH, et al: Degradace lidského RAP80 je buněčný cyklus regulovaný Ubikvitinligázami Cdc20 a Cdh1. Mol Cancer Res.10:615-625. 2012. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kidokoro T, Tanikawa C, Furukawa Y,Katagiri T, Nakamura Y a Matsuda K: CDC20, potenciální cancertherapeutic cíl, je negativně regulována p53. Onkogen.27:1562–1571. 2008. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Chang DZ, Ma Y Ji B, et al: Zvýšená exprese cdc20 je spojena s diferenciací a progresí pankreatického duktaladenokarcinomu. J Hematol Oncol.5:152012. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kim JM, Sohn HY, Yoon SY, et al:Identifikace žaludeční rakovina-příbuzné geny pomocí cDNAmicroarray obsahující románu vyjádřeno pořadí kategorie vyjádřil ingastric rakovinné buňky. Clintonová Res.11:473-482. 2005.PubMed/NCBI
	Espinosa JSEM, Alfaro, Roman-Basaure E, etal: Mitóza je zdrojem potenciálních markerů pro screening andsurvival a terapeutické cíle v rakovinu děložního čípku. PloS Jedna.8:.PubMed/NCBI
	Ouellet V, Guyot MC, Le Stránka C, et al:Tissue array analýza exprese microarray candidatesidentifies markery spojené s nádorem grade a výsledek inserous epitelové rakovinu vaječníků. Int J Rakovina. 119:599–607. 2006.Zobrazit Článek : Google Scholar
	Roessler S, Jia HL, Budhu A, et al: Jedinečné metastáz gen podpis umožňuje predikci tumorrelapse v rané fázi hepatocelulárního karcinomu u pacientů. Rakovina. 70:10202–10212. 2010. Zobrazit Článek : Google Scholar
	Irizarry RA, Hobbs B, Collin F, et al:Průzkum, normalizace, a souhrny vysoké densityoligonucleotide pole sondy úrovni údaje. Biostatistika. 4:249–264.2003. Zobrazit Článek : Google Scholar
	Dai M, Wang P., Boyd AD, et al: Evolvinggene/přepis definic výrazně změnit, nicméně pokud se naučíte GeneChip data. Nukleové kyseliny rez.33:e1752005. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Tusher VG, Tibshirani R a Chu G:Význam analýzu microarrays aplikován na ionizingradiation reakci. Proc Natl Acad Sci USA. 98:5116–5121. 2001.Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Huang ZX, Tian HY, Hu ZF, Zhou YB, Zhao Ja Yao KT: GenCLiP: software pro clustering gen listsby literatury profilování a konstrukci genové co-occurrencenetworks související s vlastní klíčová slova. BMC bioinformatika. 9:3082008.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Adhikary S a Eilers M: Transcriptionalregulation a transformace Myc proteiny. Nat Rev Mol CellBiol. 6:635–645. 2005. ViewArticle : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Detre S, Saclani Jotti G and Dowsett M: A’quickscore‘ method for immunohistochemical semiquantitation:validation for oestrogen receptor in breast carcinomas. J ClinPathol. 48:876–878. 1995.
	Früh MPM: EGFR IHC score for selection ofcetuximab treatment: Ready for clinical practice? Transl LungCancer Res. 1:145–146. 2012.
	Hwang LH, Lau LF, Smith DL, et al: Buddingyeast Cdc20: cíl vřetena stanoviště. Věda.279:1041–1044. 1998. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kops GJ, Weaver BA a Cleveland DW: Na cestě k rakovině: aneuploidie a mitotického kontrolního bodu. Nat RevCancer. 5:773–785. 2005. Přezkoumáníčlánek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Mondal G, Sengupta S, Panda CK, Gollin SM,Saunders WS a Roychoudhury S: zvýšená exprese Cdc20 vede toimpairment vřetena assembly checkpoint a aneuploidizationin rakovinu ústní dutiny. Karcinogeneze. 28:81–92. 2007. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Moura IM, Delgado ML, Silva PM, et al:High CDC20 exprese je spojena s horší prognózou v oralsquamous karcinom. J Ústní Patol Med. 43:225–231. 2013.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wu WJ, Hu KS, Wang DS, et al: CDC20overexpression předpovídá špatnou prognózu pro pacienty withcolorectal rakoviny. J. 11:1422013. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Young FM, Lim HH, Padmashree CG a SuranaU: Výstup z mitózy v pučící kvasinky: dvoufázová inaktivace theCdc28-Clb2 mitotické kinázy a roli Cdc20. Mol Cell.5:501–511. 2000. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Huang HC, Shi J, Orth JD a Mitchison TJ:Důkaz, že mitotic exit je lepší rakovina terapeutické targetthan vřeteno shromáždění. Rakovinová Buňka. 16:347–358. 2009. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wang Z, Wan L, Zhong J, et al: Cdc20: potenciální nový terapeutický cíl pro léčbu rakoviny. Curr PharmDes. 19:3210–3214. 2013. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bunz F, Dutriaux, Lengauer C, et al.: Požadavek pro p53 a p21 udržet G2 zatčení po poškození DNA.Věda. 282:1497–1501. 1998. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wells, J., Boyd KE, Smažit CJ, Bartley SM andFarnham PJ: Cílový gen specifičnost E2F a kapsa proteinfamily členů v živých buňkách. Mol Cell Biol. 20:5797–5807. 2000.Zobrazit Článek : Google Scholar