Abstrakt

rostoucí tlak moderního sociálního života zesiluje dopad stresu na rozvoj kardiovaskulárních onemocnění, které zahrnují hlubokou žilní trombózu (DVT). Renální sympatická denervace byla použita jako jeden z klinických přístupů k léčbě hypertenze rezistentní na léky. Kromě toho byl dobře zdokumentován úzký vztah mezi oxidačním stresem a kardiovaskulárními chorobami. Tato studie je navržena tak, aby prozkoumala mechanismus, kterým renální sympatický nervový systém a oxidační stres ovlivňují systém koagulace krve ve vývoji DVT. Model chronického šoku nohou u potkanů byl použit k napodobení stavu fyziologického stresu podobného člověku. Naše výsledky ukázaly, že postup chronického šoku nohou může podpořit DVT, což může být prostřednictvím aktivace agregace krevních destiček. Zhoršení DVT a aktivace krevních destiček byly zmírněny renální sympatickou denervací nebo antioxidační léčbou (Tempol). Současně by denervační léčba mohla také snížit hladiny cirkulujících oxidačních faktorů u potkanů. Tyto výsledky ukazují, že jak renální sympatický nervový systém, tak oxidační stres přispívají k rozvoji DVT v reakci na chronický stres,což může poskytnout novou strategii pro léčbu pacientů s DVT na klinice.

1. Úvod

Hluboké žilní trombózy (DVT) je časté kardiovaskulární onemocnění spojené následky, plicní embolie, která je třetí nejčastější příčinou úmrtí na kardiovaskulární onemocnění po srdečním infarktu a mozkové mrtvice. Pomalý průtok krve, poškození stěny žíly a hyperkoagulační stav jsou tři hlavní rizikové faktory pro vývoj DVT. V důsledku toho jsou antikoagulancia a trombolytika dvě hlavní léčby pacientů s klinickou DVT. Triáda rizikových faktorů predisponujících k tvorbě trombů, postulovaná Virchowem, zahrnuje změny poměru mezi krevními složkami, integritou stěny cévy a průtokem krve. Systém koagulace krve hraje klíčovou roli při ochraně savců před smrtelným krvácením. Ve všech formách trombózy jsou koagulace a zánět dvě hlavní cesty, které společně působí na koordinaci reakcí těla na zranění .

v posledních několika desetiletích byly psychologické faktory, jako je stres a deprese, uznávány jako důležité faktory ovlivňující lidské zdraví . Dlouhá období úzkosti vyvolá vývoj kardiovaskulárních onemocnění. Navíc tím, že se vyskytne současně, deprese a úzkost ještě zhorší vývoj kardiovaskulárních onemocnění. Kromě toho bylo prokázáno, že stres a další psychologické faktory úzce souvisejí s výskytem mrtvice a infarktu myokardu . Četné studie také ukázaly, že stres může způsobit dlouhodobé strukturální poškození tkání a orgánů . Chronické elektrické nohy šoku postup byl charakterizován jako model nekontrolovatelné a nepředvídatelné psychického stresu , což se prokázalo být schopen vyvolat zvýšení systolického krevního tlaku . Stále však neexistuje žádná zpráva týkající se účinků chronického šoku na vývoj DVT.

úloha sympatického renálního nervu ve vývoji hypertenze byla prokázána v experimentálních i klinických pozorováních . Existují dva typy sympatického renálního nervu: renální aferentní nervy a renální eferentní nerv. Aferentní sympatická vlákna pocházejí z ledvin a modulací centrálního sympatického odtoku přímo modifikují neurogenní hypertenzi. Současně eferentní nerv zvyšuje retenci sodíku a vody, stimuluje uvolňování reninu a mění průtok krve ledvinami . Tímto způsobem může být krátkodobý i dlouhodobý krevní tlak ovlivněn renálním sympatickým nervem . Klinické studie uváděly příznivé účinky renální sympatické denervace u pacientů s refrakterní hypertenzí . Kromě snížení účinku denervation na krevní tlak, další výhody byly hlášeny také u kardiovaskulárních onemocnění, diabetes , renální dysfunkce, srdeční hypertrofii , srdeční selhání a arytmie . Hypertenze, hlavní rizikový faktor pro mnoho nemocí, může zvýšit endoteliální dysfunkci a podpořit trombózu a je také úzce spjata s výskytem kardiocerebrálních vaskulárních onemocnění . Renální sympatická denervace proto může poskytnout novou strategii v prevenci a léčbě kardiovaskulárních onemocnění ve vysokém stresu.

nedávno experimenty ukázaly, že oxidační stres může být zodpovědný za změnu endotelové funkce . Zvýšené reaktivní druhy kyslíku produkované vaskulárním endotelem a cirkulujícími krevními buňkami narušují funkce vazomotorické a endotelové bariéry a zvyšují tvorbu trombů . Bylo také zjištěno, že oxidační stres je determinantem aktivace krevních destiček, což byl rizikový faktor pro aterotrombózu. Zda by však chronický stres mohl ovlivnit koagulační systém zvýšením oxidačního stresu, není dosud známo.

V současné době nejsou žádné zprávy přímo spojující psychický stres s koagulačním systémem a kardiocerebrálními vaskulárními chorobami. Vzhledem k tomu, že aktivace koagulačního systému má významný vliv na fyziologické hemostázy a patologické trombózy , jsme aplikovali nohy šok, stres modelu na potkanech, aby prozkoumala, zda chronické by mohly mít vliv na rozvoj hluboké žilní TROMBÓZY a možné mechanismy zapojené.

2. Materiály a metody

2.1. V této studii byl použit přípravek pro zvířata

Desetitýdenní samec potkanů Sprague-Dawley, získaný z Shanghai Laboratory Animal Center. Zvířata byla udržována v prostředí s řízenou teplotou 25°C s cyklem světlo : tma 12: 12 hodin. Krysy vystaveny stresu protokolu byly jednotlivě umístěny do nohy šok, stres pole, kde se jim dostalo na 4 hodiny sezení elektrických nohy proudem přes elektrifikované sítě podlaha dodání 5-vteřinové 0.15 mA šok každých 30 sekund. Krysí renální sympatický nerv byl chirurgicky přerušen, zatímco zvířata byla pod anestezií vyvolanou 10% chloralhydrátem. Po týdenní rekonvalescenci byl zahájen protokol o šoku nohou. Tempol (10 mg / kg / den) byl podáván intraperitoneální injekcí po zahájení stresového protokolu . Žilní trombóza byla indukována za anestetizovaných podmínek pomocí 10% chloralhydrátu, jak již bylo popsáno v Leungu . Krátce, byla otevřena břicho a dolní duté žíly (IVC), poté, co byl opatrně oddělen od okolních tkání, byl ligován těsně pod levé renální žíly pomocí bavlněnou nití. Poté bylo břicho uzavřeno dvojitou vrstvou stehů, nejprve uzavřelo peritoneum svaly a pak kůži odděleně. Po dvanácti hodinách byla zvířata znovu anestetizována, břicho bylo znovu otevřeno a plazma a trombus byly odebrány pro další analýzu . Tato studie byla provedena v souladu s Evropskou Úmluvou o Ochraně Obratlovců používaných pro Pokusné a Jiné Vědecké Účely (Rada Evropy číslo 123, Štrasburk, 1985). Všechny chirurgické postupy byly schváleny Soochow University a prováděny v souladu s pokyny pro péči a používání zvířat zřízený Soochow University.

2.2. Plazmatické Hladiny Kortikosteronu Měření

Plazmatické hladiny kortikosteronu byly měřeny pomocí komerčně dostupný enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (TSZ Elisa, USA).

2.3. Trombus Měření Hmotnosti

Od znovu otevřena břišní dutina, ligován segmentu vena cava byla odstraněna a otevřel podélně odstranit vytvořen trombus, což byl opláchnout a vážil na filtrační papír.

2.4. Analýza Krevní Koagulační Parametry

Protrombinový čas (PT), aktivovaný parciální tromboplastinový čas (APPT), trombinový čas (TT) byly měřeny pomocí automatizovaný koagulační analyzátor (Sysmex Corporation CA-50, Japonsko). Od znovuotevření břišní dutiny, krev (4,5 mL) byl odebrán z dolní duté žíly pomocí jednorázové injekční stříkačky obsahující 0,5 mL 3,8% citrátu sodného roztoku a převedeno do autoklávovaného centrifugační zkumavky. Polovina krve byla odstředěna při 3000 ot / min po dobu 10 minut a sérum bylo odebráno. 0,1 mL sérového alikvotu bylo kombinováno na 0.1 mL PT činidla. Po předehřátí po dobu 20 minut byl PT měřen pomocí automatizovaného analyzátoru koagulace krve, jak je uvedeno výše. APPT a TT byly měřeny stejnou metodou jako PT.

agregace destiček byla měřena pomocí analyzátoru agregace destiček (Chrono-Log 560 Ca, Německo). Po dutina byla otevřena, 4,5 mL krve byl odebrán z dolní duté žíly pomocí jednorázové injekční stříkačky obsažené s 0,5 mL citrátu sodného (o 3,8%) a poté přenesena do centrifugační zkumavky. Druhá polovina krve byla odstředěna při 1000 ot / min po dobu 10 minut, aby se získala plazma bohatá na destičky. Krev zbývající ve zkumavce byla odstředěna při 3000 ot / min po dobu 10 minut, aby se připravila plazma chudá na destičky. Poté byla koagulace vzorků plazmy stimulována pomocí kolagenového proteinu a adenosindifosfátu disodného (ADP) (1 mM, 10 mL) jako agonistů destiček.

2.5. Stanovení Plazmatické Noradrenalin (NA) Koncentrace

Plazmové noradrenalinu (NA) v krvi byly měřeny pomocí komerčně dostupný enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (TSZ Elisa, USA).

2.6. Měření Peroxidace Lipidů v Krvi a Plazmě superoxiddismutázy (SOD) a Glutathion Peroxidáza (GSH-Px) Činnost

Plazmové SOD a GSH-Px činnosti a peroxidace lipidů v krvi (thiobarbituric acid reactive substances, TBARS) byly měřeny pomocí komerčně dostupný enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) soupravy (TSZ Elisa, USA).

2.7. Statistické analýzy

všechna data byla prezentována jako průměr ± SEM. Statistickou významnost srovnání mezi více než dvěma skupinami byla testována pomocí two-way ANOVA následovanou Newman-Keuls test, nebo pomocí nepárový two-tailed Studenta -test. hodnoty < 0,05 byly považovány za statisticky významné.

3. Výsledky

3.1. Účinek Šoku, Denervation, a Tempol Léčby na Plazmatické Koncentrace Kortikosteronu

Plazmové kortikosteronu v krvi (marker stresu) byla výrazně zvýšena u nohy šok skupinu, když ve srovnání s kontrolní skupinou (Obrázek 1) a byly výrazně potlačeny v obou denervation plus šok a Tempol plus šok skupin ve srovnání s nohou šok sám group (Obrázek 1). Tento výsledek naznačil, že chronické nohy šoku významně zvýšené plazmatické kortikosteronu, když bylo tělo ve stresu, a to jak z denervation a Tempol léčba může zmírnit stres státu.

Obrázek 1

Plazmatické koncentrace kortikosteronu. Koncentrace kortikosteronu v plazmě v každé skupině po dvoutýdenním stresu byly měřeny tak, jak je popsáno v části materiály a metody. Údaje o každé skupině () byly prezentovány jako průměr ± SEM. * ve srovnání s kontrolní skupinou. † ve srovnání se stresovou skupinou.

3.2. Vliv léčby šokem, denervací a Tempolem na hmotnost trombů vyvolaných ligací IVC

tromby byly odebrány 12 hodin po ligaci IVC a váženy. Ve skupině šoků nohou byla hmotnost trombu významně zvýšena ve srovnání s kontrolní skupinou (Obrázek 2). Hmotnost trombu skupin denervace plus šok a Tempol plus šok však zůstala nezměněna ve srovnání s tromby kontrolní skupiny, ale byla významně snížena ve srovnání s tromby šokové skupiny nohou (Obrázek 2). Tyto výsledky naznačují, že chronický šok by mohl usnadnit tvorbu DVT, zatímco denervace i léčba Tempol by mohly inhibovat zvýšení tvorby DVT vyvolané stresem.

(a)

(b)

(a)
(b)

Obrázek 2

Hmotnost trombu. a) reprezentativní obraz trombu v každé skupině. (b) hmotnost trombu byla měřena v každé skupině po dvoutýdenním stresu, jak je popsáno v části materiály a metody. Údaje o každé skupině () byly prezentovány jako průměr ± SEM. * ve srovnání s kontrolní skupinou. † ve srovnání se stresovou skupinou.

3.3. Vliv léčby šokem, denervací a Tempolem na parametry koagulace krve

po odběru krve z IVC byly měřeny krevní parametry (PT, APPT, TT a agregace krevních destiček). Byl významný rozdíl v parametrech agregace PT, TT a destiček mezi kontrolní a šokovou skupinou nohou. PT skupiny šoku nohou byla nižší než u kontrolní skupiny; parametry TT a agregace trombocytů však byly vyšší ve skupině šoku nohou ve srovnání s kontrolní skupinou. Souběžně byl zaznamenán významný pokles v TT a agregace destiček parametry denervation plus šok a Tempol plus šok skupin ve srovnání s nohou šok skupiny (Tabulka 1 a Obrázek 3). Tyto výsledky ukazují, že chronický šok by mohl zvýšit koagulační systém aktivací agregace krevních destiček.

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

Figure 3

Platelet aggregation rate. Rychlost agregace trombocytů stimulovaná ADP (a, b) a rychlost agregace trombocytů stimulovaná kolagenem (c, d) byly měřeny v každé skupině po dvoutýdenním stresu, jak je popsáno v části materiály a metody pomocí analyzátoru agregace trombocytů. a) A c) představují stopu agregace trombocytů poskytovanou analyzátorem agregace trombocytů. Údaje o každé skupině () byly prezentovány jako průměr ± SEM. * ve srovnání s kontrolní skupinou. † ve srovnání se stresovou skupinou.

3.4. Účinek Šoku, Denervation, a Tempol Léčby na Plazmatické hladiny Noradrenalinu (NA) Koncentrace

Nožní šok významně zvýšené plazmatické noradrenalin (NA) úrovní ve srovnání s kontrolní skupinou (Obrázek 4). Plazmatické hladiny NA ve skupině denervace plus šok a Tempol plus šok byly významně potlačeny ve srovnání se skupinou šoku nohou (obrázek 4). Tyto výsledky potvrzují úspěch chirurgického zákroku s renální denervací.

Obrázek 4

Plazmatické koncentrace noradrenalinu. Koncentrace noradrenalinu v plazmě v každé skupině po dvoutýdenním stresu byly měřeny tak, jak je popsáno v části materiály a metody. Údaje o každé skupině () byly prezentovány jako průměr ± SEM. * ve srovnání s kontrolní skupinou. † ve srovnání se stresovou skupinou.

3.5. Účinek Šoku, Denervation, a Tempol Léčby na Plazmatické SOD a GSH-Px Činnosti a na TBARS Úrovně

plazmové SOD aktivity ve stresu skupina byla výrazně snížena ve srovnání s kontrolní skupinou (Obrázek 5(a)). Aktivita SOD v plazmě ve skupinách denervace plus šok a Tempol plus šok byla výrazně zvýšena ve srovnání se skupinou šoku nohou(obrázek 5 (a)).

(a)

(b)

(c)

(a)
(b)
(c)

Figure 5

Plasma SOD, GSH-Px activities, and TBARS levels. Plasma SOD activity (a), GSH-Px activity (b), and TBARS levels (c) in each group after two-week stress were measured as described in Materials and Methods section. Údaje o každé skupině () byly prezentovány jako průměr ± SEM. * ve srovnání s kontrolní skupinou. † ve srovnání se stresovou skupinou.

plazmatická aktivita GSH-Px byla také výrazně vyšší než aktivita kontrolní skupiny(obrázek 5 (B)). Plazmatická aktivita GSH-Px ve skupinách denervace plus šok a Tempol plus šok byla výrazně zvýšena ve srovnání se skupinou šoku nohou (obrázek 5(b)).

šok nohou vedl k výraznému zvýšení hladin plazmatických látek reaktivní kyselinou thiobarbiturovou (Tbar) ve srovnání s kontrolní skupinou (obrázek 5 C)). Plazmatické hladiny TBARS ve skupinách denervation plus shock a Tempol plus shock byly výrazně potlačeny ve srovnání se skupinou foot shock (, obrázek 5(c)).

4. Diskuse

v této studii jsme zjistili, že tvorba DVT je usnadněna za stresových podmínek a že změny v systému koagulace krve jsou vyvolány stresem. Shromažďování údajů ukázalo, že chronický psychický stres aktivoval dva systémy: jeden je hypothalamus-hypofýza-kůra nadledvin (HPA) systém, který byl zprostředkován hlavně uvolnění katecholaminů, kortizolu, vazopresin, endorfiny, a aldosteronu, druhá je prostřednictvím aktivace sympatického-nadledviny míše systému . Jak vyplývá z údajů, hladiny kortikosteronu ve skupině chronického šoku byly významně zvýšeny, což naznačuje, že HPA byla aktivována. Jaká je role sympatického nervového systému v reakci na stres? Od té doby bylo prokázáno, že renální sympatické aktivace systému je velmi vztahující se k rozvoji hypertenze a renální denervation je nová léčba v klinických pro refrakterní hypertenze u pacientů , renální sympatikus musí hrát důležitou roli v kardiovaskulárních onemocnění. Kromě toho, nedávná pozorování ukazují, že stresový stav je vysoce týkající se kardiovaskulárních chorob, zejména srdeční a mozkové myokardu; proto bychom spekulovat, zda chronický stres aktivuje koagulační systém prostřednictvím aktivace renální sympatické nervové soustavy. V této studii jsme nejprve zjistili, že chronický stres by mohl agregovat tvorbu DVT, což naznačuje, že stres zvýší riziko kardiovaskulárních onemocnění. Kromě toho jsme měřili parametry definující aktivitu systému koagulace krve, včetně PT, APPT, TT a agregace krevních destiček. Naše data ukázala, že došlo k významné změně agregace krevních destiček indukované ADP i kolagenem, což naznačuje, že přitěžující účinek stresu na tvorbu DVT byl zprostředkován aktivací krevních destiček. Naše výsledky nejprve odhalují mechanismus, který spojuje vysoký stres a kardiovaskulární onemocnění. I když je naše současná data jasně prokázala roli poruchou sympatického nervového systému v chronické šok vyvolaný rozvoj hluboké žilní TROMBÓZY, je těžké určit, zda aferentní nebo eferentní nervy hraje významnou roli vzhledem k omezení chirurgický zákrok. Spekulujeme, že oba jsou zapojeni; důvodem je to, že aferentní nerv může ovlivnit neurogenní kontrolu krevního tlaku, což může přispět k rozvoji DVT; a eferentní nerv by mohl regulovat renální sekreci noradrenalinu, což může také přispět k rozvoji DVT.

přítomnost poškozeného endotelu a aktivovaných koagulačních faktorů nebo krevních destiček usnadňuje vývoj a progresi DVT . Když destičky přilnou k sobě) vyskytující se v místech vaskulárního poškození je již dlouho považována za kritickou pro vývoj trombózy . V této studii jsme se zaměřili především na funkci krevních destiček v DVT. Jevy adheze, uvolňování nebo agregace destiček jsou také známé jako aktivace destiček . Aktivované krevní destičky hrají důležitou roli v procesu trombózy. Naše data ukazují, že agregace krevních destiček se po stresové léčbě zvýšila spolu se zvýšením tvorby DVT. Počet krevních destiček byl použit k normalizaci míry aktivity krevních destiček; nebyly však provedeny žádné statistiky o počtu krevních destiček v každé skupině.

Naše analýzy plazmy GSH-Px a SOD aktivity, stejně jako plazmy TBARS úrovni, ukázaly, že tělo je ve stavu oxidačního stresu vyvolaného chronickou nohy léčba šokem, která byla inhibována ledvin denervation. Několik zpráv ukázalo, že aktivita nad(P)H oxidázy může být přímo zvýšena α1-a β2-receptory prostřednictvím katecholaminů (CA) uvolňovaných renálním sympatickým nervem. Kromě toho bylo prokázáno, že antagonisté β1-receptoru snižují vaskulární oxidační stres způsobený aktivací nad (P)H oxidázy . Proto můžeme říci, že renální sympatická inervace přímo zvyšuje hladiny oxidačního stresu. Bylo hlášeno, že agregace krevních destiček, další rizikový faktor trombu, je spojena s oxidačním stresem . Oxidační stres by mohl přímo zvýšit agregaci krevních destiček prostřednictvím kyslíkových volných radikálů umístěných na povrchu destiček . Solidní důkazy prokázaly, že oxidační stres může přímo aktivovat krevní destičky různými způsoby. Jako produkt oxidačního stresu O2-by mohl reagovat s destičkami nebo endotelem, pak žádné odvozené od ONOO -, které má zvláštní význam pro vaskulární trombózu, má také takové účinky. Několik studií ukázaly, že O2− může snížit práh pro aktivace destiček na trombin, kolagen, nebo ADP a O2− může být dokonce schopen vyvolat spontánní agregace . Aktivovaná destička může dokonce produkovat ROS; role tohoto endogenního ROS je podobná exogennímu ROS při aktivaci destiček. Obecně existuje několik scénářů vedoucích k agregaci destiček vyvolané stresem. V prvním je renální sympatický nerv aktivován stresem, což vede ke zvýšenému oxidačnímu stresu v celém těle, po kterém následuje zvýšení agregace krevních destiček. V druhém scénáři stres přímo spouští produkci oxidačního stresu v těle, což přímo zvyšuje agregaci krevních destiček. Denervace sympatického nervu ledvin může přímo ovlivnit aktivaci krevních destiček, jejíž mechanismus je však třeba prozkoumat.

Naše data ukázala, že chronický stres léčba nemá žádný významný vliv buď na APPT nebo PT, což naznačuje, že stres, který zprostředkovala hlubokou žilní trombózou nemusí být spojena s vnější nebo vnitřní koagulační systém. Léčba chronického stresu by však mohla výrazně zvýšit TT, což naznačuje, že doba přeměny fibrinogenu na fibrin byla prodloužena kvůli hyperfibrinolýze. Proto spekulujeme, že fibrinolytická hyperfibrinolýza byla způsobena zvýšenou koagulací krve za stavu chronického stresu. Současně by renální denervace a antioxidační léčba mohly snížit agregaci krevních destiček, což zase potlačilo koagulaci krve. Na základě našich údajů jsme mohli pozorovat, že TT inklinoval k normální rychlosti v těchto dvou podmínkách ve srovnání se šokovou skupinou.

Je třeba poznamenat, že, v naší současné pozorování jsme zjistili, že Tempol léčba může snížit chronický stres-indukované zvýšení hladiny kortikosteronu, což naznačuje zapojení oxidačního stresu v HPA aktivace indukované uvolňování hormonů, což naznačuje, že antioxidační léčba může poskytnout některé prospěšné účinky v HAP aktivace vyvolané varhany zranění. Nenalezli jsme však žádný rozdíl mezi denervací a antioxidačními léčbami v žádných parametrech, což naznačuje, že sympatický nerv a oxidační stres mohou nezávisle přispívat k rozvoji DVT vyvolaného chronickým šokem.

Závěrem lze říci, že chronický stres by mohl zvýšit agregaci krevních destiček přímo aktivací renálního sympatického nervu a zvýšením oxidačního stresu. Poté se DVT usnadní zvýšením agregace krevních destiček. Řada studií prokázaly, že ateroskleróza a další kardiovaskulární onemocnění jsou úzce spojeny s oxidační stres a že pacienti jsou často přítomny nízká hladina antioxidantů v krvi a zvýšené hladiny oxidačního stresu markery . Takže s ohledem na kardiocerebrální vaskulární onemocnění a DVT můžeme těmto onemocněním předcházet a léčit cílením terapie na hormonální a antioxidační úrovni. Kromě toho se jedná o nový způsob léčby renálním sympatickým nervem.

střet zájmů

autoři deklarují žádné konkurenční finanční zájmy.

příspěvek autorů

Guo-Xing Zhang koncipoval a navrhl experimenty. Tao Dong, Yu-Wen Cheng, Pei-Wen Sun a Chen-Jie Zhu provedli experimenty. Fei Yang pomáhal s agregací krevních destiček. Guo-Xing Zhang přispěl činidly / materiály a analyzoval data. Guo-Xing Zhang, Tao Dong, a Yu-Wen Cheng napsal noviny.

poděkování

autoři jsou vděční profesorovi Li Zhu a dalším členům laboratoře Zhu za experimentální radu a pomoc. Tato práce byla podpořena National Natural Science Foundation of China (81270316, 814170563) a výzkumný Program Soochow University (Q413400111).